新型乳酸杆菌递送载体的筛选及金黄色葡萄球菌口服疫苗的研究
发布时间：2023-03-10 23:28
金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是引起机体感染的重要致病菌之一,其可引起菌血症、肺炎等多种疾病,近年来,由于抗生素的滥用导致耐药性菌株越来越多,针对S.aureus感染的控制越来越难,对于我们预防和治疗的难度也随之加大。而金黄色葡萄球菌疫苗的研发可能是防治其感染的有效手段,因此,安全有效的金黄色葡萄球菌疫苗研发迫在眉睫。金黄色葡萄球菌可通过粘膜途径感染机体,金黄色葡萄球菌粘膜疫苗可能是防止金黄色葡萄球菌感染的有效途径。粘膜免疫需要一个能有效避免降解的抗原呈递系统,同时可以刺激机体产生免疫应答;乳酸菌和减毒的致病菌均可作为递送载体递送抗原,但减毒的致病菌存在毒力回复的可能,而乳酸杆菌应用广泛且安全无毒,因此成为良好的递送载体。本研究从传统奶制品中进行乳酸菌的分离鉴定及筛选,从中选取益生效果较好的乳酸杆菌递送金黄色葡萄球菌抗原Csa1、TraP、MntC、HlaH35L,对其免疫保护效果进行评价。具体研究结果如下:1.从传统奶制品中共分离得到155株乳酸菌,其中杆菌73株,大致分为9种:包括:Lactobacillus p...
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 乳酸菌概述
1.1.1 益生菌
1.1.2 益生性乳酸菌的生理功能
1.2 乳酸菌作为递送载体的研究进展
1.2.1 粘膜免疫概述
1.2.2 以乳酸菌为递送载体的研究现状
1.3 金黄色葡萄球菌概述及疫苗研究进展
1.3.1 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)候选抗原Csa1、TraP、MntC、Hla概述
1.4 本研究的目的及意义
第二章 乳酸菌的分离鉴定及益生性筛选
2.1 实验材料
2.1.1 试验样品来源
2.1.2 实验菌株、动物及细胞
2.1.3 试验材料
2.1.4 试验仪器及设备
2.1.5 试验相关试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 乳酸菌的分离纯化及菌种保藏
2.2.2 革兰氏染色及过氧化氢酶促试验
2.2.3 16S rDNA扩增及系统发育进化树分析
2.2.4 乳酸菌的粘膜递送载体潜质筛选
2.2.5 乳酸菌体内拮抗金黄色葡萄球菌的研究
2.3 实验结果及分析
2.3.1 乳酸菌的分离鉴定结果
2.3.2 乳酸菌革兰氏染色及过氧化氢酶促实验结果
2.3.3 16S rDNA扩增及系统发育进化树分析
2.3.4 乳酸菌的粘膜递送载体潜质筛选结果
2.3.5 乳酸菌体内拮抗金黄色葡萄球菌的研究结果
2.4 讨论
结论
第三章 乳酸杆菌递送金黄色葡萄球菌抗原
3.1 实验材料
3.1.1 实验菌株、感受态细胞及载体
3.1.2 实验材料及试剂
3.1.3 实验仪器及设备
3.1.4 试验相关试剂配制
3.2 实验方法
3.2.1 目的基因的设计及合成
3.2.2 重组质粒的构建(pNZ8148-csa1、pNZ8148-traP、pNZ8148-mntC)
3.2.3 乳酸菌感受态细胞的制备
3.2.4 重组乳酸菌的制备
3.2.5 重组乳酸菌的抗原诱导表达
3.2.6 重组乳酸菌的生理生化及遗传稳定性分析
3.3 实验结果及分析
3.3.1 双酶切重组质粒pUC57-csa1、pUC57-traP、pUC57-mntC
3.3.2 表达质粒与基因的连接鉴定结果
3.3.3 重组乳酸杆菌鉴定结果
3.3.4 乳酸杆菌诱导抗原表达结果
3.3.5 重组乳酸杆菌在不同温度下的生长情况
3.3.6 重组乳酸杆菌在不同pH下的生长情况
3.3.7 重组乳酸杆菌在不同浓度NaCl下的生长情况
3.3.8 重组乳酸杆菌对人工胃液的耐受情况
3.3.9 重组乳酸杆菌在对含胆盐的人工肠液耐受情况
3.3.10 重组乳酸杆菌质粒遗传稳定性的检测
3.4 讨论
结论
第四章 乳杆菌递送抗原在小鼠肺炎模型中免疫效果的评价
4.1 实验材料
4.1.1 实验菌株
4.1.2 实验动物
4.1.3 实验所需试剂
4.1.4 实验所需设备
4.2 实验方法
4.2.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)重组菌免疫小鼠
4.2.2 WXD176/WXD171(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)重组菌免疫小鼠
4.2.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)重组菌免疫小鼠
4.3 实验结果及分析
4.3.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)免疫小鼠对存活率的影响
4.3.2 WXD171/WXD176(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)免疫小鼠对存活率的影响
4.3.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)免疫小鼠对存活率的影响
4.4 讨论
结论
创新点及展望
创新点
展望
参考文献
致谢
本文编号：3758763
【文章页数】：91 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
1.1 乳酸菌概述
1.1.1 益生菌
1.1.2 益生性乳酸菌的生理功能
1.2 乳酸菌作为递送载体的研究进展
1.2.1 粘膜免疫概述
1.2.2 以乳酸菌为递送载体的研究现状
1.3 金黄色葡萄球菌概述及疫苗研究进展
1.3.1 金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)候选抗原Csa1、TraP、MntC、Hla概述
1.4 本研究的目的及意义
第二章 乳酸菌的分离鉴定及益生性筛选
2.1 实验材料
2.1.1 试验样品来源
2.1.2 实验菌株、动物及细胞
2.1.3 试验材料
2.1.4 试验仪器及设备
2.1.5 试验相关试剂配制
2.2 实验方法
2.2.1 乳酸菌的分离纯化及菌种保藏
2.2.2 革兰氏染色及过氧化氢酶促试验
2.2.3 16S rDNA扩增及系统发育进化树分析
2.2.4 乳酸菌的粘膜递送载体潜质筛选
2.2.5 乳酸菌体内拮抗金黄色葡萄球菌的研究
2.3 实验结果及分析
2.3.1 乳酸菌的分离鉴定结果
2.3.2 乳酸菌革兰氏染色及过氧化氢酶促实验结果
2.3.3 16S rDNA扩增及系统发育进化树分析
2.3.4 乳酸菌的粘膜递送载体潜质筛选结果
2.3.5 乳酸菌体内拮抗金黄色葡萄球菌的研究结果
2.4 讨论
结论
第三章 乳酸杆菌递送金黄色葡萄球菌抗原
3.1 实验材料
3.1.1 实验菌株、感受态细胞及载体
3.1.2 实验材料及试剂
3.1.3 实验仪器及设备
3.1.4 试验相关试剂配制
3.2 实验方法
3.2.1 目的基因的设计及合成
3.2.2 重组质粒的构建(pNZ8148-csa1、pNZ8148-traP、pNZ8148-mntC)
3.2.3 乳酸菌感受态细胞的制备
3.2.4 重组乳酸菌的制备
3.2.5 重组乳酸菌的抗原诱导表达
3.2.6 重组乳酸菌的生理生化及遗传稳定性分析
3.3 实验结果及分析
3.3.1 双酶切重组质粒pUC57-csa1、pUC57-traP、pUC57-mntC
3.3.2 表达质粒与基因的连接鉴定结果
3.3.3 重组乳酸杆菌鉴定结果
3.3.4 乳酸杆菌诱导抗原表达结果
3.3.5 重组乳酸杆菌在不同温度下的生长情况
3.3.6 重组乳酸杆菌在不同pH下的生长情况
3.3.7 重组乳酸杆菌在不同浓度NaCl下的生长情况
3.3.8 重组乳酸杆菌对人工胃液的耐受情况
3.3.9 重组乳酸杆菌在对含胆盐的人工肠液耐受情况
3.3.10 重组乳酸杆菌质粒遗传稳定性的检测
3.4 讨论
结论
第四章 乳杆菌递送抗原在小鼠肺炎模型中免疫效果的评价
4.1 实验材料
4.1.1 实验菌株
4.1.2 实验动物
4.1.3 实验所需试剂
4.1.4 实验所需设备
4.2 实验方法
4.2.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)重组菌免疫小鼠
4.2.2 WXD176/WXD171(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)重组菌免疫小鼠
4.2.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)重组菌免疫小鼠
4.3 实验结果及分析
4.3.1 WXD114(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)免疫小鼠对存活率的影响
4.3.2 WXD171/WXD176(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)免疫小鼠对存活率的影响
4.3.3 WXD234(pNZ8148-csa1/traP/mntC/hlaH35L)免疫小鼠对存活率的影响
4.4 讨论
结论
创新点及展望
创新点
展望
参考文献
致谢
本文编号：3758763
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