WDR45突变导致BPAN的分子病理机制研究

发布时间：2023-04-08 21:28

　　β-螺旋蛋白相关性神经变性病(β-propeller protein-associated neurodegeneration,BPAN),是一种X染色体显性神经退行性疾病,其临床进程主要分为两个阶段:在儿童时期患者表现为认知和运动障碍,发育迟缓,基本上是静止的;到青春期或成年早期患者发生肌张力障碍、帕金森综合征,并且患者的脑部核磁共振图像(MRI)显示大脑苍白球和黑质部位存在异常的铁积累。目前研究表明,BPAN患者体内均存在自噬相关基因WDR45突变,并且WDR45突变后导致自噬受损是BPAN发病的主要原因。在此之前,我们实验室报道了一例3岁大的BPAN病例,该患者主要症状表现为运动和认知障碍、发育迟缓、伴有癫痫性抽搐、铁代谢异常等,经全外显子测序显示该患者WDR45存在一个新发突变(NM₀07075.3,c.1040₁041del,p.Glu347Glyfs*7),并且她的姐姐与父亲母亲均不携带致病位点,所以判定该患者是BPAN患者。为了进一步研究BPAN的致病机制,本课题将以此突变位点通过一系列分子生物学及细胞生物学实验来进行探索。1....

【文章页数】：68 页

【学位级别】：硕士

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中文摘要
ABSTRACT
第一章 文献综述
    1.1 β-螺旋蛋白相关性神经变性病
    1.2 自噬
    1.3 WDR45
    1.4 铁沉积
    1.5 研究课题
第二章 WDR45 基因突变导致细胞自噬通路受损
    2.1 实验仪器与实验材料
        2.1.1 实验仪器设备
        2.1.2 实验材料
        2.1.3 试剂配制方法
    2.2 实验方法
        2.2.1 细胞培养
        2.2.2 细胞RNA的提取及反转录
        2.2.3 DH5α感受态的制备
        2.2.4 载体构建
        2.2.5 细胞转染
        2.2.6 细胞蛋白提取
        2.2.7 Western Blot
        2.2.8 免疫荧光
    2.3 实验结果
        2.3.1 WDR45 蛋白结构预测
        2.3.2 瞬时表达载体构建及自噬相关蛋白表达水平验证
        2.3.3 稳定表达载体构建及自噬相关蛋白表达水平验证
    2.4 讨论
第三章 鉴定与WDR45 相互作用的蛋白
    3.1 实验仪器与实验材料
        3.1.1 实验仪器设备
        3.1.2 实验材料
        3.1.3 试剂配制方法
    3.2 实验方法
        3.2.1 细胞培养
        3.2.2 细胞RNA的提取及反转录
        3.2.3 载体构建
        3.2.4 细胞转染
        3.2.5 蛋白提取
        3.2.6 Western Blot
        3.2.7 免疫共沉淀
        3.2.8 免疫荧光
    3.3 结果
        3.3.1 互作蛋白的寻找及鉴定
        3.3.2 Tf R1 通过自噬降解
    3.4 讨论
第四章 WDR45 突变后导致细胞内铁含量增加
    4.1 实验仪器与实验材料
        4.1.1 实验仪器设备
        4.1.2 实验材料
        4.1.3 试剂配制方法
    4.2 实验方法
        4.2.1 细胞培养
        4.2.2 细胞RNA的提取及反转录
        4.2.3 载体构建
        4.2.4 细胞转染
        4.2.5 蛋白提取
        4.2.6 Western Blot
        4.2.7 细胞总铁含量测定
        4.2.8 活细胞Fe2+染色
    4.3 结果
    4.4 讨论
总结与展望
参考文献
攻读学位期间取得的研究成果
致谢
个人简况及联系方式



本文编号：3786501