基于Cx43蛋白研究肾主骨生长发育理论与相关实验

发布时间：2024-12-27 00:19

　　目的阐明肾主骨生长发育的中医理论内涵及现代医学研究情况。以Cx43蛋白及其介导的GJIC功能为切入点探讨肾主骨生长发育的理论实质,并通过大鼠BMSCs体外培养软骨向诱导分化实验,进行实验研究,论证左归丸对Cx43蛋白的调控作用及机制。方法1、理论研究:理论研究从理论渊源、理论内涵、理论运用角度,阐明祖国医学对“肾主骨生长发育”理论的认识。根据现代医学肾主骨生长发育研究情况,探讨其理论的现代医学实质。2、实验研究:SPF级2月龄SD雄性大鼠中药浓缩剂灌胃,通过血清药理学方法,制备体积分数为10%的含药血清培养液,进行共培养。采用密度梯度离心法制取BMSCs培养传代,加入诱导液进行成软骨诱导。实验分组:设立正常对照A组(培养基加入灌服生理盐水动物血清配制的诱导液)、左归丸含药血清B组(培养基加入左归丸含药血清配制的诱导液),左归丸含药血清+缝隙连接阻滞C组(同B组+AGA)。细胞分组处理后,每3d换液一次,诱导培养21d。培养过程中进行细胞形态学观察;第14天采用RT-PCR技术检测Cx43、GDF-5mRNA表达、免疫荧光染色检测Cx43蛋白表达,划痕染料标记示踪法检测细胞GJIC功能;第...

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【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1细胞生长形态学观察注:倒置相差显微镜×100倍

基于CX43研究肾主骨生长发育理论与相关实验313结果3.1培养细胞形态学观察原代细胞培养初期呈梭形或纺锤形，旋涡状向四周扩增生长，见图1-A；传代细胞呈梭形波浪状排列，见图1-B。软骨向分化诱导培养初期细胞为梭型，有星形多突起，见图1-C；培养第7天，细胞增殖、体积增大，伸展出....

图2目的基因琼脂糖凝胶电泳图

湖北中医药大学2020届硕士学位论文32图2目的基因琼脂糖凝胶电泳图注:数字0代表Mark;1,2代表A组;3,4代表B组;5,6代表C组。表2各组细胞目的基因Cx43、GDF-5mRNA相对表达量(sx)组别A组B组C组Cx431.000±0.0001.722±0.013*1.....

图3免疫荧光染色检测培养细胞Cx43蛋白表达注：A、B、C代表实验的三个分组；1为目的蛋白Cx43染色，2为细胞DAPI核染，3为前两种染色的叠加

基于CX43研究肾主骨生长发育理论与相关实验33图3免疫荧光染色检测培养细胞Cx43蛋白表达注：A、B、C代表实验的三个分组；1为目的蛋白Cx43染色，2为细胞DAPI核染，3为前两种染色的叠加。（荧光显微镜×400倍）表3各组细胞Cx43蛋白表达定量(sx)组别A组B组C组平均....

图4各组细胞缝隙连接荧光黄染料标记

湖北中医药大学2020届硕士学位论文34间的扩散距离，B组与A组对比，差异显著（P<0.O5），加用AGA后，GJIC功能明显下降，C组与B组比较，P<O.O5。结果见图4、表4。图4各组细胞缝隙连接荧光黄染料标记注：A、B、C代表实验的三个分组。(荧光显微镜×200倍)表4各组....

本文编号：4020848