鞣花酸与GDC-0941对乳腺癌治疗的协同作用及机制探讨

发布时间：2017-08-15 06:24

  本文关键词：鞣花酸与GDC-0941对乳腺癌治疗的协同作用及机制探讨

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【摘要】：目的:乳腺癌是女性高发的恶性肿瘤之一,也是患病人数(女性中)最多,病死率最高的肿瘤,而且其患病人数呈持续增长趋势。不仅严重影响人们生存质量而且给世界卫生系统带来沉重的负担。乳腺癌的发病原因非常复杂,包括遗传因素、激素调节异常和环境因素影响等。传统乳腺癌的治疗方法有手术、放疗和化疗等。而随着分子生物学研究的进展,分子靶向治疗已成为继传统治疗之后的一种全新的生物治疗模式。但是在针对乳腺癌的治疗时,若只针对单一靶点所设计的靶向药物,那在临床应用中往往容易产生耐受性以及较大的毒副作用,从而无法较好的满足临床的需要。因此将多种药物联合应用,在提高化疗药物药效的同时,也提高患者的生存质量,因此也成为肿瘤治疗的热点方向之一。鞣花酸(Ellagic Acid)是一种存在于水果蔬菜的多酚类植物化学物质,不仅具有天然化学物质的属性,而且鞣花酸还具有抗肿瘤,抗氧化,抗纤维化等特性。对于鞣花酸的抗肿瘤研究在不断深入,已在多种肿瘤的研究与治疗得到体现,如皮肤癌,食道癌,结肠癌,乳腺癌和胰腺癌等。鞣花酸抑制肿瘤作用主要表现在诱导肿瘤细胞的凋亡、抑制细胞周期、抑制血管生成、以及抑制癌细胞的转移等方面。但是对于其具体发挥作用的机制,尚不甚明确。磷酸肌醇-3-激酶(PI3K)信号通路与乳腺癌发生发展之间的关系已被逐渐阐明,而以PI3K作为治疗靶点的研究也日益成熟;新型PI3K小分子抑制剂GDC-0941,是一种能特异性地抑制p110阿尔法催化亚基的小分子药物,其现正在美国处于一期临床试验阶段。本文就鞣花酸与化疗药物GDC-0941联合使用观察其药效的发挥情况并探讨其作用机制。方法:(1)细胞增殖实验和克隆形成实验检测鞣花酸与GDC-0941联合用药抑制人乳腺癌细胞的增殖。(2)利用Annexin V/PI双染法流式细胞术检测凋亡率。(3)Western blot法检测凋亡蛋白的表达。(4)Western blot法检测PI3K/AKT/m TOR下游通路上S6RP、4EBP1磷酸化程度的变化。(5)划痕实验检测细胞迁移率的改变。(6)小鼠体内实验检测联合用药对肿瘤细胞肺部转移的影响。结果:(1)30?M鞣花酸和1?M GDC-0941作用于乳腺癌细胞MDA-MB-231,SKBR3和SUM159之后表现出较强的协同抑制细胞增殖作用,并表现出时间依赖性。(2)对MDA-MB-231,SKBR3和SUM159三种乳腺癌细胞,鞣花酸能显著增加GDC-0941诱导的细胞凋亡,其具体表现为早期凋亡的发生和凋亡蛋白c-PARP的出现和高表达。(3)鞣花酸与GDC-0941联合使用所产生的抑制肿瘤细胞生长增殖和诱导凋亡的作用,主要是通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路中m TOR的磷酸化实现,具体表现为降低S6RP和4EBP1的活化。(4)鞣花酸和GDC-0941联合作用可有效的抑制乳腺癌细胞的迁移。(5)体内试验中,鞣花酸和GDC-0941的联合使用可有效抑制癌细胞的肺部转移。结论:(1)鞣花酸与GDC-0941同时作用于三种乳腺癌细胞,表现出较强的协同抑制细胞增殖作用,并表现出时间依赖性。(2)鞣花酸能显著增加GDC-0941诱导的细胞凋亡,其具体表现为早期凋亡的发生和凋亡蛋白c-PARP的出现和高表达。(3)协同抑制肿瘤、增强凋亡作用主要是通过抑制PI3K/AKT/m TOR信号通路中m TOR的磷酸化实现。(4)其联合作用可有效的抑制乳腺癌细胞的迁移和转移。
【关键词】：鞣花酸 乳腺癌 PI3K/AKT/mTOR GDC-0941 联合用药
【学位授予单位】：大连医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-11
• 前言11-13
• 材料和方法13-20
• 1.实验仪器和材料13-14
• 1.1 研究对象13-14
• 1.2 仪器与试剂14
• 2.方法14-20
• 2.1 肿瘤细胞的常规培养14-15
• 2.2 细胞增殖实验 (Proliferation assay)15
• 2.3 细胞凋亡实验 (Apoptosis assay)15-16
• 2.4 克隆形成实验 (Colony formation assay)..16
• 2.5 蛋白印迹分析 (Western blot)16-19
• 2.5.1 细胞全蛋白提取16-17
• 2.5.2 BCA法蛋白含量检测17-18
• 2.5.3 蛋白变性18
• 2.5.4 SDS-PAGE电泳灌胶、上样及电泳18
• 2.5.5 转膜18
• 2.5.6 封闭与抗体孵育18-19
• 2.5.7 ECL显色反应19
• 2.6 划痕实验 (Scratching assay)19
• 2.7 FVB小鼠乳腺癌细胞肺部转移实验 (Lung transferringassay )19-20
• 数据分析20
• 实验结果20-34
• 1. 显微镜下的人乳腺癌细胞MDA-MB-231,SKBR3和SUM15920-21
• 2. 鞣花酸和GDC-0941对三种乳腺癌细胞系表现出较强的协同抑制增殖作用21-24
• 3. 鞣花酸可明显增强GDC-0941诱导的乳腺癌细胞的凋亡能力24-26
• 4. 鞣花酸促进GDC-0941诱导的细胞凋亡通路相关蛋白c-PARP的表达26-28
• 5. 鞣花酸和GDC-0941联合进一步抑制PI3K信号通路下游相关蛋白的表达.28-30
• 6. 鞣花酸与GDC-0941联合使用可协同抑制乳腺癌细胞的迁移.30-32
• 7. 鞣花酸协同GDC-0941治疗小鼠，对肿瘤细胞体内肺部转移有明显的抑制作用32-34
• 讨论34-38
• 结论38
• 参考文献38-42
• 综述42-53
• （一）前言42-43
• （二）肿瘤的药物治疗43-44
• （三）植物化学物鞣花酸44-48
• （四）结论与展望48
• （五）参考文献48-53
• 附录53-54
• 攻读学位期间发表文章情况54-55
• 致谢55-56

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本文编号：676681