猪繁殖与呼吸综合征病毒拮抗宿主蛋白IRF1和CH25H抗病毒活性的分子机制

发布时间：2021-03-27 09:07

　　猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）是严重危害全球养猪业的重要病原,其具有快速演化和变异、拮抗宿主天然免疫等特性,这给PRRSV感染及其所致临床疾病的预防与控制造成巨大困难。因此,研究宿主天然抗病毒分子对PRRSV的抗病毒活性和PRRSV拮抗天然抗病毒分子的机制,对于理解PRRSV逃逸宿主天然免疫的机制以及寻找抗PRRSV天然分子具有重要的理论和实践意义。本研究分析干扰素调节因子1（IRF1）、胆固醇25羟化酶（CH25H）和25-羟基胆固醇（25HC）对PRRSV的抗病毒活性及其机制,并探讨PRRSV拮抗其抗病毒功能的分子机制,以期为阐释PRRSV拮抗宿主天然免疫的机制和PRRSV防控新策略提供科学依据。采用慢病毒转导技术构建稳定表达猪IRF1基因的MARC-145细胞,分析过表达IRF1对PRRSV增殖的影响,结果显示,过表达IRF1可显著降低PRRSV的增殖滴度,表明IRF1可抑制PRRSV的复制;同时,采用siRNA干扰技术证实,敲低IRF1可促进PRRSV的复制。将PRRSV感染MARC-145细胞和PAMs然后检测IRF1的含量,结果显示,感染初期PRRSV上调IRF1的表... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：101 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

图２－１稳定表达丨ＲＦｌ－ＧＦＰ和ＧＦＰ的ＭＡＲＣ－１４５细胞的建立??

分析了?ｎｓｐｌｐ是否通过溶酶体途径降解ＩＲＦ１。将ｐ３ｘＦｌａｇ－ＩＲＦｌ和ｐＣＭＶ－ＨＡ－ｎｓｐｉｐ共转染??ＨＥＫ２９３ＦＴ细胞，再用溶酶体抑制剂氣喹（Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ，?ＣＱ）处理细胞，最后检测ＩＲＦ１的表达。??结果显示，与未处理绀相比，ＣＱ处理组中ＩＲＦ１的总表达量显著增加（图２－６Ｂ），表明ｎｓｐｉｐ可??通过溶酶体途径降解ＩＲＦ】。为了进一步验证上述结果，用剂Ｍ递增的溶酶体抑制剂ＣＱ（３７．５?ｎＭ、??７５?ｐＭ和１５０?ｐＭ）处理共转染的细胞，然后检测１ＲＦ１的表达情况。结果显示，与对照相比，ＣＱ??处理组中ＩＲＦ１的表达Ｍ随ＣＱ浓度的递增而逐渐增加（图２－６Ｄ）。综上结果，表明ＰＲＲＳＶ的ｎＳｐｌ（３??可通过溶酶体途径降解ＩＲＦ１

转染ＨＥＫ２９３ＦＴ细胞，再用剂量递增的蛋白酶体抑制剂ＭＧ１３２?（２．５ｐＭ、５｜ａＭ和１０ｐＭ）处理??细胞，最后检测ＩＲＦ１的表达情况。结果显示，与对照相比，ＩＲＦ１的总表达量随ＭＧ１３２浓度的??升高而显著增加（图２－７Ａ），表明ｎｓｐｌＯ可通过蛋白酶体途径降解ＩＲＦ１。将ｐ３ｘＦｌａｇ－ＩＲＦｌ和??ｐＣＭＶ－ＨＡ－ｎｓｐｌＯ共转染ＨＥＫ２９３ＦＴ细胞，再用溶酶体抑制剂氯喹（Ｃｈｌｏｒｏｑｕｉｎｅ，?ＣＱ）处理细胞，??最后检测ＩＲＦ１的表达情况。结果显示，与未处理组相比，ＣＱ处理组中ＩＲＦ１的总表达呈显著增??力口（图２－７Ｂ），表明ｎｓｐｌＯ可通过溶酶体途径降解ＩＲＦ１。为了进一步验证上述结果，用剂Ｍ递增??的溶酶体抑制剂ＣＱ?（３７．５＾Ｍ、７５ｐＭ和１５０｜ｉＭ）处理共转染的细胞，然后检测ＩＲＦ１的表达情??况。结果显示，与对照相比，ＣＱ处理组中ＩＲＦ１的表达量随ＣＱ浓度的递增而逐渐增加（图２－７Ｃ）。??综上


本文编号：3103244