柔嫩艾美耳球虫病毒RNA依赖性RNA聚合酶互作蛋白的筛选及功能研究
发布时间：2021-04-11 18:14
柔嫩艾美耳球虫（E.tenella）可以引起以出血和肠道溃烂为特征的鸡的球虫病,给养鸡业造成严重的经济损失。目前抗球虫药物和弱毒疫苗是控制球虫病的主要手段,然而球虫耐药性和活疫苗毒力反强等问题的出现阻碍了对球虫病的有效防治,其原因之一是人们对于鸡球虫的细胞及分子生物学特性的了解不够深入。许多原虫都含有双链RNA病毒,它们可以影响原虫的毒力或繁殖能力。有报道称携病毒E.tenella比不携病毒E.tenella对鸡的感染能力更强,而E.tenella病毒和E.tenella之间的关系目前还不清楚。RNA依赖性RNA聚合酶（RDRP）是E.tenella病毒编码的一种具有复制和转录双重功能的蛋白。本研究利用酵母双杂交技术筛选出RDRP的互作蛋白OTU,并分析了其活性。另有报道称OTU是一种端粒相关蛋白且与端粒酶活性有关,故本研究又通过酵母双杂交和pull down试验确定了E.tenella端粒酶逆转录酶RNA结合区（TRBD）和E.tenella OTU蛋白的互作关系,并在此基础上探讨了OTU对端粒酶逆转录酶（TERT）活性的影响。主要研究内容如下:柔嫩艾美球虫病毒RDRP互作蛋白的筛选...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pGBKT7-RDRP双酶切鉴定电泳图
pGBKT7-RDRP 双酶切鉴定电15000 DNA marker)；1：pGBKT7-R2：pGBKT7-RDRP 质粒图togram of double enzyme digestioDNAmarker); 1: The result of pGBKTn; 2: The plasmid DNA of pGBKT7-R母细胞中表达情况及自激活作 与pGBKT7质粒的酵母菌用珠子签抗体为一抗，山羊抗鼠 HR组蛋白大小为53kDa，如图1.2活性，且其对酵母无毒性作用，
提取酵母蛋白。以 Myc 标签抗体为一抗，山羊抗鼠 HRP 标记的 IgG 为二抗，western-blot结果显示，试验组蛋白大小为53kDa，如图1.2所示。α-半乳糖苷酶试验结果显示诱饵质粒无自激活活性，且其对酵母无毒性作用，鉴定结果如图1.3所示。图 1.2 western-blot 鉴定重组 pGBKT7-RDRP 蛋白在 Y187 中的表达1：转化重组诱饵载体 pGBKT7-RDRP 的 Y187 酵母蛋白；2：转化 pGBKT7 的 Y187 酵母蛋白Fig.1.2 DetectiontheexpressionofrecombinantRDRPinY187yeastcelllbywestern-blot1: The yeast cell Y187 lysates transformed with pGBKT7-RDRP;2: The yeast cell Y187 lysates transformed with pGBKT724
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体切割效果的研究[J]. 陈丽凤,李建华,邹亚学,赵月平,曹利利,张西臣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2007(04)
[2]抗病基因Bdv2抑制大麦黄矮病毒复制和运动的分子证据（英文）[J]. 刘晓东,张增艳,刘艳,辛志勇. 遗传学报. 2005(09)
博士论文
[1]c-Maf的泛素化及其泛素连接酶的研究[D]. 陈国栋.苏州大学 2013
硕士论文
[1]一个新的TPP1相互作用蛋白OTUB1参与端粒长度调节的作用研究[D]. 王丹.中山大学 2013
本文编号：3131722
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：106 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
pGBKT7-RDRP双酶切鉴定电泳图
pGBKT7-RDRP 双酶切鉴定电15000 DNA marker)；1：pGBKT7-R2：pGBKT7-RDRP 质粒图togram of double enzyme digestioDNAmarker); 1: The result of pGBKTn; 2: The plasmid DNA of pGBKT7-R母细胞中表达情况及自激活作 与pGBKT7质粒的酵母菌用珠子签抗体为一抗，山羊抗鼠 HR组蛋白大小为53kDa，如图1.2活性，且其对酵母无毒性作用，
提取酵母蛋白。以 Myc 标签抗体为一抗，山羊抗鼠 HRP 标记的 IgG 为二抗，western-blot结果显示，试验组蛋白大小为53kDa，如图1.2所示。α-半乳糖苷酶试验结果显示诱饵质粒无自激活活性，且其对酵母无毒性作用，鉴定结果如图1.3所示。图 1.2 western-blot 鉴定重组 pGBKT7-RDRP 蛋白在 Y187 中的表达1：转化重组诱饵载体 pGBKT7-RDRP 的 Y187 酵母蛋白；2：转化 pGBKT7 的 Y187 酵母蛋白Fig.1.2 DetectiontheexpressionofrecombinantRDRPinY187yeastcelllbywestern-blot1: The yeast cell Y187 lysates transformed with pGBKT7-RDRP;2: The yeast cell Y187 lysates transformed with pGBKT724
【参考文献】：
期刊论文
[1]犬贾第虫病毒转染载体介导的锤头状核酶对KRR1基因体外转录体切割效果的研究[J]. 陈丽凤,李建华,邹亚学,赵月平,曹利利,张西臣. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2007(04)
[2]抗病基因Bdv2抑制大麦黄矮病毒复制和运动的分子证据（英文）[J]. 刘晓东,张增艳,刘艳,辛志勇. 遗传学报. 2005(09)
博士论文
[1]c-Maf的泛素化及其泛素连接酶的研究[D]. 陈国栋.苏州大学 2013
硕士论文
[1]一个新的TPP1相互作用蛋白OTUB1参与端粒长度调节的作用研究[D]. 王丹.中山大学 2013
本文编号：3131722
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