捻转血矛线虫排泄分泌蛋白T细胞、单核细胞结合蛋白的鉴定及其对相应细胞功能的影响

发布时间：2021-04-21 21:56

　　捻转血矛线虫是寄生于小反刍动物皱胃,以吸食宿主血液为生的寄生性胃肠道线虫。感染捻转血矛线虫可引起严重贫血、腹泻、脱水甚至是宿主的死亡。近期的研究表明寄生性胃肠道线虫可通过产生排泄分泌物（ESP）释放免疫抑制因子与宿主免疫细胞或免疫调节分子相互作用,抑制或逃避宿主的免疫应答从而保证其存活。T细胞和单核细胞均为参与宿主机体免疫应答的核心细胞,因此针对捻转血矛线虫ESP中一些对T细胞和单核细胞功能抑制分子的研究有助于揭示其调节宿主免疫反应及产生免疫逃避的具体机制。同时鉴定出的抑制分子可作为候选疫苗抗原,用于临床治疗与研究,为控制捻转血矛线虫病提供新的方法。为此,我们进行了以下研究:1捻转血矛线虫半乳糖凝集素C端与N端糖结合域与山羊PBMC结合位点的鉴定及其功能研究在之前的研究中,我们发现捻转血矛线虫半乳糖凝集素（Hco-gal-m/f）的C端和N端糖结合域（CRD）具有不同的糖结合能力。然而,在宿主与寄生虫相互作用中,Hco-gal-m/f的不同CRD是否具有不同的免疫调节功能依然未知。在本章研究中,我们发现Hco-gal-m/f的N端CRD（MNh）和C端CRD（MCh）可通过不同的受体与... 

【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：259 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
英文缩略语
前言
    参考文献
第一篇 文献综述
    第一章 捻转血矛线虫及捻转血矛线虫病
        1 捻转血矛线虫病概述
            1.1 病原学
            1.2 生活史
        2 流行病学
            2.1 致病作用、病理变化及临床症状
            2.2 捻转血矛线虫病的诊断
            2.3 捻转血矛线虫病的防治
            2.4 捻转血矛线虫的抗药性
        3 小结
        参考文献
    第二章 寄生性胃肠道线虫感染与免疫研究
        1 寄生性胃肠道线虫病概述
        2 寄生性胃肠道线虫感染与宿主免疫应答
            2.1 机体检测
            2.2 信号转导
            2.3 机体免疫诱导
            2.4 免疫排斥
            2.5 机体修复
        3 捻转血矛线虫感染与宿主免疫应答
            3.1 三期幼虫、四期幼虫与宿主免疫应答
            3.2 捻转血矛线虫成虫与宿主免疫应答
        4 总结与展望
        参考文献
    第三章 反刍动物胃肠道线虫免疫调节分子研究进展
        1 反刍动物胃肠道线虫概述
        2 胃肠道线虫调节分子
            2.1 半乳糖凝集素
            2.2 蛋白酶抑制剂
            2.3 补体系统抑制分子
            2.4 巨噬细胞迁移抑制因子
            2.5 其他免疫调节性分子
        3 免疫调节分子用于疫苗研究
            3.1 捻转血矛线虫
            3.2 背带线虫
        4 总结
        参考文献
第二篇 实验研究
    第四章 捻转血矛线虫半乳糖凝集素C端与N端糖结合域与山羊PBMC结合位点的鉴定及功能研究
        1 材料和方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 重组表达质粒pET-32a-MNh及pET-32a-MCh双酶切鉴定
            2.2 重组蛋白rMNh及rMCh的纯化
            2.3 rMNh及rMCh与山羊PBMC结合
            2.4 MNh及MCh在山羊PBMC上受体鉴定
            2.5 rMCh与rMNh对细胞增殖的作用
            2.6 rMCh与rMNh对山羊PBMC一氧化氮分泌的影响
            2.7 rMCh与rMNh对山羊PBMC凋亡作用
            2.8 rMCh与rMNh对山羊PBMC细胞因子转录的影响
        3 讨论
        参考文献
    第五章 捻转血矛线虫ESP中与山羊T细胞结合蛋白的鉴定及其对T细胞功能的影响
        1 材料和方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 捻转血矛线虫ESP的获取与多克隆抗体的制备
            2.2 山羊T细胞的磁珠分选
            2.3 捻转血矛线虫ESP与山羊T细胞的结合
            2.4 捻转血矛线虫ESP与山羊T细胞体外免疫共沉淀的SDS-PAGE和Western Blot分析
            2.5 LC-MS/MS鉴定与分析
            2.6 GO注释与KEGG分析
            2.7 ESP对T细胞活力影响
            2.8 ESP对T细胞凋亡的影响
            2.9 ESP对T细胞增殖的影响
            2.10 ESP对T细胞周期的影响
            2.11 ESP对T细胞主要分型的影响
            2.12 ESP对T细胞分泌细胞因子的影响
        3 讨论
        参考文献
    第六章 捻转血矛线虫ESP中与山羊单核细胞结合蛋白的鉴定及其对单核细胞功能的影响
        1 材料和方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 山羊单核细胞磁珠分选
            2.2 捻转血矛线虫ESP与山羊单核细胞的结合
            2.3 捻转血矛线虫ESP与山羊单核细胞体外免疫共沉淀的SDS-PAGE和Western Blot分析
            2.4 LC-MS/MS鉴定与分析
            2.5 GO注释与KEGG分析
            2.6 ESP对单核细胞分泌一氧化氮水平影响
            2.7 ESP对单核细胞吞噬能力影响
            2.8 ESP对单核细胞MHC分子表达影响
            2.9 ESP对单核细胞凋亡影响
            2.10 ESP对单核细胞分泌细胞因子的影响
        3 讨论
        参考文献
    第七章 捻转血矛线虫Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM基因的克隆表达及其对T细胞功能的影响
        1 材料和方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM的PCR扩增
            2.2 重组质粒pET28a-HcABHD、pET-32a-HcGHD及pET-32a-HcADRM的双酶切鉴定
            2.3 重组蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM的纯化
            2.4 重组蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM的Western blot分析
            2.5 捻转血矛线虫不同发育阶段Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM转录水平的变化
            2.6 Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM的组织定位
            2.7 重组蛋白Hc-ABHD、Hc-GHD及Hc-ADRM与山羊T细胞结合
            2.8 重组蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM对T细胞活力影响
            2.9 重组蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM对T细胞凋亡及相关信号通路的影响
            2.10 重组蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM对T细胞增殖的影响
            2.11 重组蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM对T细胞周期及相关通路的影响
            2.12 重组蛋白rHc-ABHD、rHc-GHD及rHc-ADRM对T淋巴细胞分泌细胞因子的影响
        3 讨论
        参考文献
    第八章 捻转血矛线虫Hc-Rab33、Hc-Mak1及Hc-ATPD基因的克隆表达及其对单核细胞功能的影响
        1 材料和方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 Hc-Rab33、Hc-Mak1及Hc-ATPD的PCR扩增
            2.2 重组质粒pET28a-HcRab33、pET28a-HcMak1及pET28a-HcATPD的双酶切鉴定
            2.3 重组蛋白rHc-Rb33、rHc-Mak1及rHc-ATPD的纯化
            2.4 重组蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD的Western blot分析
            2.5 捻转血矛线虫不同发育阶段Hc-Rb33、Hc-Mak1及Hc-ATPD转录水平的变化
            2.6 Hc-Rab33、Hc-Mak1及Hc-ATPD的组织定位
            2.7 重组蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD与山羊单核细胞结合
            2.8 重组蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD对单核细胞NO分泌水平的影响
            2.9 重组蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD对单核细胞吞噬能力的影响
            2.10 重组蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD对单核细胞内MHC-11分子表达水平的影响
            2.11 重组蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD对单核细胞凋亡的影响
            2.12 重组蛋白rHc-Rab33、rHc-Mak1及rHc-ATPD对细胞因子分泌水平的影响
        3 讨论
        参考文献
    第九章 捻转血矛线虫水解酶包含蛋白（Hc-ABHD）、粘附调节因子（Hc-ADRM）和Ras结构域包含蛋白（Hc-Rab33）抗血清免疫保护性研究
        1 材料与方法
            1.1 实验材料
            1.2 实验方法
        2 结果
            2.1 虫卵排出情况
            2.2 成虫减少率
            2.3 血常规检测
            2.4 血清抗体检测
            2.5 细胞因子检测
        3 讨论
        参考文献
全文总结
致谢
博士期间论文发表情况


【参考文献】：
期刊论文
[1]Recombinant Galectins of Hemonchus contortus Inhibit Goat Cytokine mRNA Transcription of Peripheral Blood Mononuclear Cells in vitro[J]. Charles I Muleke.  Agricultural Sciences in China. 2007(10)
[2]捻转血矛线虫雌、雄成虫galectin基因的克隆、鉴定及序列分析[J]. 李春华,李祥瑞,魏晓锋,徐立新.  农业生物技术学报. 2005(01)



本文编号：3152556