蛋白磷酸化与低温获能间联系及CLC改善冻融配子质量的研究
发布时间：2021-05-17 06:16
本研究的主要目的是阐明低温引发的低温获能和获能发生机制差异以及探究冷冻稀释液中添加CLC对冻融猪配子质量的影响。试验主要分三部分,第一部分主要研究获能、顶体反应及低温获能处理对猪精子蛋白32（sp32）及其酪氨酸磷酸化的表达水平的影响;第二部分主要研究添加CLC对冻融猪精子获能状态线粒体膜电位以及质量特性的研究;第三部分主要研究添加CLC对冻融的GV期线粒体膜电位、促凋亡基因表达、透明带泛素化水平以及精子-ZP结合能力的影响。试验结果如下:1.获能、顶体反应及低温获能处理后结果表明,获能和顶体反应处理组sp32的表达水平显著高于鲜精组和低温获能处理组（P<0.05）;2.获能和顶体反应处理组sp32酪氨酸磷酸化水平显著高于鲜精组和低温获能处理组（P<0.05）;3.冷冻稀释液中添加CLC（0,0.5,1.0和2.0mg/mL）处理后结果表明,0.5 mg/mLCLC组活力、存活率和顶体完整率均高于其他三处理组组（P<0.05）;而获能和顶体反应百分比低于其他三组（P<0.05）;4.添加CLC能够显著提高4℃处理组和玻璃化冷冻处理组精子的线粒体跨膜电位（P<...
【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1.1 配子的冷冻保存
1.1.1 精子的冷冻保存
1.1.2 卵母细胞的冷冻保存
1.2 获能与受精
1.2.1 葡萄糖和精子获能
1.2.2 线粒体OXPHOS和精子获能
1.3 低温获能
1.4 获能精子的酪氨酸磷酸化
1.4.1 SACY调节中的cAMP,HCO3-和Ca2+
1.4.2 PKA作为cAMP靶标的作用
1.4.3 PKA激活的下游事件
1.4.4 酪氨酸磷酸化的调节:Src激酶家族和ser/thr磷酸酶的作用
1.4.5 在精子获能期间观察到的其他磷酸化途径
1.4.6 获能过程中磷酸化的调控模型
1.5 包埋胆固醇的甲基-β-环糊精(CLC)
1.5.1 CLC对卵母细胞的作用
1.5.2 CLC对精子的作用
1.6 细胞的凋亡
1.7 线粒体膜电位与细胞凋亡的关系
1.8 精子-卵母细胞的识别
第二章 猪精子顶体膜sp32的表达及其酪氨酸磷酸化水平的变化
2.1 试验材料
2.1.1 猪精液和精子
2.1.2 试验主要仪器
2.1.3 试验主要药品
2.2 试验方法
2.2.1 药品的配制
2.2.2 试验步骤
2.3 结果与分析
2.3.1 顶体膜蛋白的SDS-PAGE分析结果
2.3.2 顶体膜蛋白中的sp32蛋白免疫印迹结果
2.3.3 体膜蛋白中的酪氨酸磷酸化水平
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 添加CLC对精子冷冻保存质量的影响
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 药品的配制
3.2.2 试验步骤
3.3 结果与分析
3.3.1 CLC对精子前向运动、存活率和顶体完整率的影响
3.3.2 CLC对精子获能和顶体反应的影响
3.3.3 CLC对精子线粒体跨膜电位的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 在玻璃化冷冻前添加CLC对体外成熟的猪卵母细胞质量的影响
4.1 试验材料
4.1.1 试验主要仪器
4.1.2 试验主要药品
4.2 试验方法
4.2.1 药品的配制
4.2.2 试验步骤
4.3 结果与分析
4.3.1 添加CLC后,胆固醇与卵母细胞的结合情况
4.3.2 CLC对玻璃化冷冻解冻后GV期卵母细胞的正常率和成熟率的影响
4.3.3 CLC对GV期玻璃化冷冻的成熟猪卵母细胞线粒体跨膜电位的影响
4.3.4 CLC对GV期玻璃化的成熟猪卵母细胞中促凋亡基因的mRNA表达水平的影响
4.3.5 CLC对GV期玻璃化的成熟猪卵母细胞的ZP蛋白泛素化的影响
4.3.6 CLC对精子与GV期玻璃化的成熟猪卵母细胞结合的影响
4.4 讨论
4.4.1 CLC对线粒体跨膜电位的影响
4.4.2 CLC对促凋亡基因的mRNA表达水平的影响
4.4.3 CLC对ZP蛋白泛素化的影响
4.4.4 CLC对受精率的影响
4.5 小结
第五章 结论
参考文献
附录一 英文简写缩略表
附录二 攻读学位期间发表的论文
致谢
本文编号：3191249
【文章来源】：延边大学吉林省 211工程院校
【文章页数】：102 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 综述
1.1 配子的冷冻保存
1.1.1 精子的冷冻保存
1.1.2 卵母细胞的冷冻保存
1.2 获能与受精
1.2.1 葡萄糖和精子获能
1.2.2 线粒体OXPHOS和精子获能
1.3 低温获能
1.4 获能精子的酪氨酸磷酸化
1.4.1 SACY调节中的cAMP,HCO3-和Ca2+
1.4.2 PKA作为cAMP靶标的作用
1.4.3 PKA激活的下游事件
1.4.4 酪氨酸磷酸化的调节:Src激酶家族和ser/thr磷酸酶的作用
1.4.5 在精子获能期间观察到的其他磷酸化途径
1.4.6 获能过程中磷酸化的调控模型
1.5 包埋胆固醇的甲基-β-环糊精(CLC)
1.5.1 CLC对卵母细胞的作用
1.5.2 CLC对精子的作用
1.6 细胞的凋亡
1.7 线粒体膜电位与细胞凋亡的关系
1.8 精子-卵母细胞的识别
第二章 猪精子顶体膜sp32的表达及其酪氨酸磷酸化水平的变化
2.1 试验材料
2.1.1 猪精液和精子
2.1.2 试验主要仪器
2.1.3 试验主要药品
2.2 试验方法
2.2.1 药品的配制
2.2.2 试验步骤
2.3 结果与分析
2.3.1 顶体膜蛋白的SDS-PAGE分析结果
2.3.2 顶体膜蛋白中的sp32蛋白免疫印迹结果
2.3.3 体膜蛋白中的酪氨酸磷酸化水平
2.4 讨论
2.5 小结
第三章 添加CLC对精子冷冻保存质量的影响
3.1 试验材料
3.2 试验方法
3.2.1 药品的配制
3.2.2 试验步骤
3.3 结果与分析
3.3.1 CLC对精子前向运动、存活率和顶体完整率的影响
3.3.2 CLC对精子获能和顶体反应的影响
3.3.3 CLC对精子线粒体跨膜电位的影响
3.4 讨论
3.5 小结
第四章 在玻璃化冷冻前添加CLC对体外成熟的猪卵母细胞质量的影响
4.1 试验材料
4.1.1 试验主要仪器
4.1.2 试验主要药品
4.2 试验方法
4.2.1 药品的配制
4.2.2 试验步骤
4.3 结果与分析
4.3.1 添加CLC后,胆固醇与卵母细胞的结合情况
4.3.2 CLC对玻璃化冷冻解冻后GV期卵母细胞的正常率和成熟率的影响
4.3.3 CLC对GV期玻璃化冷冻的成熟猪卵母细胞线粒体跨膜电位的影响
4.3.4 CLC对GV期玻璃化的成熟猪卵母细胞中促凋亡基因的mRNA表达水平的影响
4.3.5 CLC对GV期玻璃化的成熟猪卵母细胞的ZP蛋白泛素化的影响
4.3.6 CLC对精子与GV期玻璃化的成熟猪卵母细胞结合的影响
4.4 讨论
4.4.1 CLC对线粒体跨膜电位的影响
4.4.2 CLC对促凋亡基因的mRNA表达水平的影响
4.4.3 CLC对ZP蛋白泛素化的影响
4.4.4 CLC对受精率的影响
4.5 小结
第五章 结论
参考文献
附录一 英文简写缩略表
附录二 攻读学位期间发表的论文
致谢
本文编号：3191249
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