我国检疫性实蝇分子鉴定技术体系的研究

发布时间：2021-07-21 10:15

　　实蝇Fruit Flies,隶属于双翅目Diptera,实蝇科Tephritidae,全世界广泛分布,是多种热带、亚热带水果和蔬菜的重要害虫,以卵、幼虫或蛹随寄主果实、包装物或交通工具等进行远距离的人为传播。由于非成虫态实蝇难以进行形态学鉴定,其分子鉴定成为植物检疫以及生物入侵防控领域亟需开展的研究。本研究针对我国检疫性实蝇开展分子鉴定技术体系的研究。主要研究结果如下：（1）构建了我国检疫性实蝇DNA条形码库,其中收录来自亚洲、大洋洲、非洲、欧洲、北美洲和南美洲的实蝇DNA条形码序列共计6属181种2252条。以果实蝇属为例,对实蝇DNA条形码鉴定有效性进行分析,结果表明DNA条形码可实现除复合体以外的实蝇物种的准确鉴定。（2）基于DNA条形码序列,设计并筛选出27种我国主要检疫性实蝇（墨西哥按实蝇Anastrepha ludens.西印度按实蝇A.obliqua.蒲桃果实蝇Bactrocera albistrigata、番石榴果实蝇B.correcta、杨桃果实蝇B.carambolae、橘小实蝇B.dorsalis、辣椒果实蝇B.latifrons、锈红果实蝇B.rubigina、... 

【文章来源】：中国农业大学北京市 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：179 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
Abstract
第一章 绪论
    1.1 我国检疫性实蝇概述
        1.1.1 检疫性实蝇种属及分类特征
        1.1.2 实蝇生活史及传播途径
        1.1.3 实蝇进境检疫截获及监测情况
        1.1.4 实蝇复合体研究进展
    1.2 主要分子鉴定技术概述
        1.2.1 DNA条形码技术
        1.2.2 常规PCR技术
        1.2.3 实时荧光PCR技术
        1.2.4 集成流路芯片技术
    1.3 研究内容与目的意义
        1.3.1 研究内容
        1.3.2 研究目的和意义
        1.3.3 技术路线
第二章 我国检疫性实蝇DNA条形码库的构建
    2.1 研究材料
        2.1.1 实蝇样品的采集与保存
        2.1.2 主要仪器与试剂
    2.2 研究方法
        2.2.1 实蝇形态鉴定
        2.2.2 实蝇DNA条形码序列测定
        2.2.3 实蝇DNA条形码库的建立
        2.2.4 果实蝇属DNA条形码鉴定有效性分析
    2.3 结果与分析
        2.3.1 实蝇样品的采集与形态鉴定
        2.3.2 实蝇DNA条形码序列测定
        2.3.3 实蝇DNA条形码库
        2.3.4 果实蝇属DNA条形码鉴定有效性
    2.4 小结
第三章 我国检疫性实蝇常规PCR鉴定技术研究
    3.1 研究材料
        3.1.1 供试实蝇样品
        3.1.2 主要仪器与试剂
    3.2 研究方法
        3.2.1 特异引物设计
        3.2.2 特异引物筛选与反应体系优化
        3.2.3 常规PCR灵敏度检测
    3.3 结果与分析
        3.3.1 筛选出的特异引物
        3.3.2 常规PCR技术方法的建立
        3.3.3 引物特异性及灵敏度检测
    3.4 小结
第四章 我国检疫性实蝇实时荧光PCR鉴定技术研究
    4.1 研究材料
        4.1.1 供试实蝇样品
        4.1.2 主要仪器与试剂
    4.2 研究方法
        4.2.1 TaqMan-MGB探针设计
        4.2.2 TaqMan-MGB探针筛选与反应体系优化
    4.3 结果与分析
        4.3.1 筛选出的TaqMan-MGB探针
        4.3.2 实时荧光PCR技术方法的建立
        4.3.3 TaqMan-MGB探针和引物特异性及灵敏度检测
    4.4 小结
第五章 我国检疫性实蝇集成流路芯片鉴定技术研究
    5.1 研究材料
        5.1.1 供试实蝇样品
        5.1.2 主要仪器与试剂
    5.2 研究方法
        5.2.1 反应体系优化
        5.2.2 引物和TaqMan-MGB探针特异性检测
    5.3 结果与分析
        5.3.1 集成流路芯片技术方法的建立
        5.3.2 引物和TaqMan-MGB探针特异性
    5.4 小结
第六章 我国检疫性实蝇分子鉴定技术的初步应用及比较
    6.1 研究材料
        6.1.1 供试实蝇样品
        6.1.2 主要仪器与试剂
    6.2 研究方法
        6.2.1 DNA条形码技术的初步应用
        6.2.2 常规PCR技术的初步应用
        6.2.3 实时荧光PCR技术的初步应用
        6.2.4 集成流路芯片技术的初步应用
        6.2.5 四种分子鉴定技术的比较
    6.3 结果与分析
        6.3.1 非成虫态实蝇基因组DNA浓度及纯度
        6.3.2 基于DNA条形码技术的鉴定结果
        6.3.3 基于常规PCR技术的鉴定结果
        6.3.4 基于实时荧光PCR技术的鉴定结果
        6.3.5 基于集成流路芯片技术的鉴定结果
        6.3.6 四种分子鉴定技术的比较结果
    6.4 小结
第七章 结论与讨论
    7.1 结论
    7.2 讨论
        7.2.1 本研究的创新性
        7.2.2 本研究的局限性
        7.2.3 实蝇分子鉴定技术研究与应用展望
参考文献
致谢
附录
作者简历


【参考文献】：
期刊论文
[1]实蝇类害虫分子鉴定研究进展[J]. 陈韶萍,黄振,郭琼霞,刘长明.  生物安全学报. 2014(03)
[2]SYBR Green实时荧光PCR快速鉴定枣实蝇技术[J]. 程晓甜,阿地力·沙塔尔,张伟,李新泉,玛依拉.  林业科学. 2014(04)
[3]枣实蝇及其他5种检疫性实蝇的PCR-RFLP快速鉴定[J]. 程晓甜,阿地力·沙塔尔,张伟,李新泉.  南京林业大学学报(自然科学版). 2014(01)
[4]利用DNA条形码技术对截获瓜实蝇幼虫的鉴定研究[J]. 龚秀泽,Buahom Nopparat,卢厚林,李志红,张君潮.  植物检疫. 2014(01)
[5]枣实蝇特异引物PCR鉴定技术[J]. 程晓甜,阿地力·沙塔尔,张伟,温俊宝,李新泉,陈梦.  林业科学. 2013(11)
[6]实蝇科害虫入侵防控技术研究进展[J]. 李志红,姜帆,马兴莉,方焱,孙壮志,秦誉嘉,王巧铃.  植物检疫. 2013(02)
[7]数字PCR技术进展[J]. 林彩琴,姚波.  化学进展. 2012(12)
[8]以雾灵山夜蛾科为材料评估进化模型对DNA条码分类的影响[J]. 迟美妍,韩辉林,高强,杨聪慧,金倩,李俊,陈付强,武春生,张爱兵.  昆虫学报. 2012(10)
[9]AllGlo实时荧光PCR快速检测6种按实蝇[J]. 徐浪,余道坚,李建光,王银竹,陈志粦.  植物检疫. 2010(05)
[10]中国果实蝇属一新纪录种（双翅目,实蝇科）（英文）[J]. 刘晓飞,汪兴鉴,叶辉.  动物分类学报. 2009(03)

博士论文
[1]检疫性实蝇分子生物学快速鉴定技术的研究[D]. 余道坚.中国科学院研究生院（上海生命科学研究院） 2005

硕士论文
[1]DNA条形码技术在主要实蝇类害虫识别中的应用[D]. 刘慎思.西南大学 2012
[2]地中海实蝇及其近缘种和桔小实蝇复合种基因芯片的研制及应用[D]. 李文芬.湖南师范大学 2008
[3]五种实蝇的分子系统发育分析与分子快速鉴定研究[D]. 张长禹.华中农业大学 2007
[4]陕西省常见四种实蝇的分子鉴定[D]. 张红梅.西北农林科技大学 2004



本文编号：3294830