哈尔滨地区部分猪场沙门菌耐药性调查与防治

发布时间：2017-04-27 09:12

  本文关键词：哈尔滨地区部分猪场沙门菌耐药性调查与防治，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：抗生素对于动物与人类细菌性疾病的预防与治疗具有重要作用。但随着抗生素的广泛使用,随之而来的耐药性问题,也给人类与动物的健康带来非常大的困扰。近年来,我国养猪业集约化、规模化迅速发展,然而,由于一些猪场,用药不科学、不规范,使得猪源性细菌耐药性的产生也越来越严重,尤其是猪场常见菌沙门菌存在广泛的耐药性,使得临床上对细菌性疾病的防治效果越来越差,耐药性问题已成为猪场临床抗菌治疗的主要威胁,严重影响着猪类产品质量,进而威胁着人类的健康。合理使用抗生素来降低药物的耐药性,以及采取各种措施来清除耐药性的影响越来越重要。本课题是为了探明哈尔滨地区部分猪场沙门菌的耐药情况,为本地区猪场合理预防沙门菌病及其它细菌提供参考,并为有效减少沙门菌耐药性的产生提出相应方案。本研究从该哈尔滨地区10个猪场采集病料。进行细菌培养和沙门菌的培养分离鉴定。对培养的细菌和分离的35株沙门菌采用微量稀释法测定了氨曲南、厄他培南、亚胺培南、美罗培南、哌拉西林、氨苄西林、多黏菌素、头孢他啶、头孢噻肟、头孢毗肟、头孢西丁、妥布霉素、环丙沙星、阿米卡星、庆大霉素、四环素、替吉环素、呋喃妥因18种抗生素的最小抑菌浓度,并判定其耐药性：检测了喹诺酮类、β-内酰胺类、四环素类和大环内酯类等14个耐药基因。并且根据药敏实验和耐药基因检测结果,进行了预防试验。研究结果表明：1.总菌对12种抗生素有很强的耐药性,最敏感药物为喹诺酮类环丙沙星：总菌存在多重耐药现象。从总菌质粒DNA中检出β-内酰胺类blaCTX-M, blaNDM-1;四环素类tetA、 tetB;大环内酯类ermB、ermC、ermF和转座子耐药基因intI共8个。2.分离的35株沙门菌对18种抗生素均有不同程度耐药,对氨苄西林全部耐药.庆大霉素耐药率92%；对替吉环素耐药率最低,环丙沙星次之。多重耐药的菌株集中在耐6～10种药物之间。占多重耐药菌株的94%。3.沙门菌中检测出tetA、tetB、ermB、ermC、ermF、blaCTX-M、intl和blaNDM-1共8个与总菌相同的耐药基因。检出含tetA阳性菌株最多,检出含blaNDM-1阳性菌株最少；检出3个耐药基因的菌株数最多；检测出1个和6个耐药基因的菌株的最少。均为1株。4.猪场使用乳酸环丙沙星与替吉环素以后,总发病率比2011年降低56.5%,比2012年降低70.7%：沙门菌病发病率比2011年降低85.2%,比2012年降低88.1%。综上所述,哈尔滨地区部分猪场细菌及分离的沙门菌对多种抗生素具有耐药性,有大量多重耐药性和多种耐药基因存在。根据结果,制定了猪场预防用药方案,取得了良好的预防效果。此结果不仅为当地猪场合理使用抗菌药物,为降低沙门菌耐药性的产生和传递提供了参考,也为有效控制细菌性疾病的发生奠定了基础。
【关键词】：抗生素 耐药性 耐药基因 沙门菌 猪
【学位授予单位】：东北农业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：S852.61
【目录】：

• 摘要10-11
• 英文摘要11-13
• 1 引言13-23
• 1.1 沙门菌病13-16
• 1.1.1 病原学13-15
• 1.1.2 流行病学15-16
• 1.1.3 猪沙门菌病16
• 1.2 病原菌的耐药机理16-18
• 1.2.1 动物病原菌的耐药现状16-17
• 1.2.2 细菌的耐药机制17-18
• 1.3 沙门菌的耐药机理18-22
• 1.3.1 沙门菌的耐药现状19
• 1.3.2 沙门菌的耐药机制研究进展19-22
• 1.4 本研究的目的和意义22-23
• 2 材料与方法23-33
• 2.1 试验动物及样品处理23
• 2.1.1 样品来源23
• 2.1.2 参考菌株23
• 2.2 流行病学调查23
• 2.2.1 背景调查23
• 2.2.2 猪场流行病学调查23
• 2.3 主要试剂与仪器23-25
• 2.3.1 主要试剂23-24
• 2.3.2 主要仪器24-25
• 2.4 细菌的分离培养25
• 2.4.1 细菌的培养25
• 2.4.2 沙门菌的分离25
• 2.5 沙门菌的筛选25-26
• 2.5.1 革兰氏染色25
• 2.5.2 氧化酶试验25-26
• 2.5.3 发酵试验26
• 2.6 沙门菌的鉴定26-27
• 2.6.1 生化试验26
• 2.6.2 沙门菌分离株的血清学试验26
• 2.6.3 人工感染及毒力的试验26
• 2.6.4 沙门菌分离株的16sPCR鉴定26-27
• 2.6.5 沙门菌血清群的鉴定27
• 2.7 药物敏感性实验27-30
• 2.7.1 质控菌与抗菌药物27-28
• 2.7.2 最小抑菌浓度测定28-29
• 2.7.3 抗药谱的建立29
• 2.7.4 多重耐药指数的测定29-30
• 2.8 耐药基因的检测30-31
• 2.8.1 质粒DNA的提取30
• 2.8.2 目的基因PCR扩增30
• 2.8.3 基因的克隆、鉴定及序列测定30-31
• 2.9 耐药基因的转移31-32
• 2.10 预防试验32
• 2.11 实验数据分析与统计32-33
• 3 结果与分析33-51
• 3.1 猪场流行病学调查结果33-34
• 3.2 临床健康猪直肠沙门菌的分离鉴定结果34-35
• 3.2.1 沙门菌分离培养34
• 3.2.2 沙门菌分离株生化试验鉴定结果34
• 3.2.3 毒力试验结果34-35
• 3.2.4 沙门菌分离株PCR鉴定结果35
• 3.3 规模猪场临床健康猪沙门菌带菌情况35-37
• 3.3.1 沙门菌检出率35-36
• 3.3.2 沙门菌血清型分布36-37
• 3.4 耐药性检测结果37-40
• 3.4.1 总菌的药敏实验结果37-38
• 3.4.2 沙门菌的药敏实验结果38-40
• 3.5 耐药基因的检测结果40-50
• 3.5.1 细菌耐药基因检测结果40-44
• 3.5.2 沙门菌耐药基因检测结果44-50
• 3.6 耐药基因的转移50
• 3.7 预防效果50-51
• 4 讨论51-60
• 4.1 哈尔滨地区部分猪场沙门菌病流行病学分析51-52
• 4.2 猪源性细菌耐药性的分析52-55
• 4.2.1 猪源性细菌对头孢菌素类抗生素耐药性的分析53
• 4.2.2 猪源性细菌对碳青霉烯类抗生素耐药性的分析53
• 4.2.3 猪源性细菌对四环素类抗生素耐药性的分析53
• 4.2.4 猪源性细菌对喹诺酮类抗生素耐药性的分析53-54
• 4.2.5 猪源性细菌对氨基糖甙类抗生素耐药性的分析54-55
• 4.3 猪源性沙门菌耐药基因的分析55-57
• 4.3.1 猪源性沙门菌对四环素类抗生素的耐药基因分析55
• 4.3.2 猪源性沙门菌对大环内酯类抗生素的耐药基因分析55-56
• 4.3.3 猪源性沙门菌对喹诺酮类抗生素的耐药基因分析56
• 4.3.4 猪源性沙门菌对β-内酰胺类抗生素的耐药基因分析56
• 4.3.5 猪源性沙门菌多重耐药性与Ⅰ类整合子的关系56-57
• 4.4 预防效果分析57
• 4.5 防治耐药性产生的措施57-60
• 4.5.1 建设良好的环境57
• 4.5.2 合理使用疫苗免预防程序57-58
• 4.5.3 加强对细菌耐药性的监测58
• 4.5.4 研究消除耐药质粒技术58
• 4.5.5 抗沙门菌药物的合理使用58-59
• 4.5.6 合理使用抗生素替代品59-60
• 5 结论60-61
• 致谢61-62
• 参考文献62-69
• 攻读博士学位期间发表的学术论文与专利69

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本文编号：330335