嗜水气单胞菌Ⅵ型分泌系统效应分子Hcp的功能分析
发布时间：2021-11-11 21:24
嗜水气单胞菌（Aeromonas hydrophila）是一种常见的条件致病菌,广泛存在于水环境中,能导致多种淡水鱼暴发出血性败血症,也能引起人类食物中毒、感染性腹泻、败血症等。Ⅵ型分泌系统（T6SS）是许多革兰阴性菌用于靶向真核宿主细胞或者其他细菌的一种多功能武器,在细菌的毒力作用和细菌间竞争过程中发挥重要作用。溶血素共调节蛋白（Hcp）是T6SS的重要结构成分和效应分子,其分泌被认为是T6SS发挥功能的标志。然而到目前为止,T6SS在嗜水气单胞菌的功能仍未被报道过。本研究对已完成全基因组测序的14株嗜水气单胞菌进行了生物信息学分析,发现T6SS基因簇在嗜水气单胞菌不同分离株中具有多样性;在此基础上,分别对嗜水气单胞菌中国分离株NJ-35和美国分离株ML09-119的T6SS效应分子Hcp进行了功能分析,并评价了重组Hcp蛋白在常见淡水养殖鱼类—鲫鱼中的免疫原性和保护效力;同时,对嗜水气单胞菌NJ-35中的一组新型抗菌效应蛋白/免疫蛋白对TseP/TsiP进行了鉴定及功能分析。1.嗜水气单胞菌中国分离株NJ-35 T6SS基因簇的鉴定及Hcp家族蛋白多样性分析对已完成全基因组测序的1...
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：204 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１?ＶＩ型分泌系统（Ｔ６ＳＳ）的结构和机制示意图ｌ：Ｑｌ??Ｆｉｇ?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｔ６ＳＳ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ??
?嗜水气单胞菌ＶＩ型分泌系统效应分子Ｈｅｐ的功能分析???ｎ＾—??ＳＢ?３〉??Ｑ?Ｓｐｃａａｔｅ？ＪｒＨ？ｔ〇ｒｃｉｏ＜ｒ？ｎ?＇?５?＇??Ａａｗｊｏｒｙｐｒａｔ＾ｎ??ＩＭｆｆｌ？？??Ｔｒｅｎｃｔｓ?ｍ?Ｍ（ｃｒｏｂ＊ｏｌｏｇｙ??图２－２?Ｔ６ＳＳ效应蛋白递送模式图＾??Ｆｉｇ?２－２?Ｍｏｄｅｓ?ｏｆ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?Ｄｅｌｉｖｅｒｙ?ｂｙ?ｔｈｅ?Ｔｙｐｅ?ＶＩ?Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ?Ｓｙｓｔｅｍ?（Ｔ６ＳＳ）??Ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ?ｓｅｃｒｅｔｅｄ?ｖｉａ?ｔｈｅ?Ｔ６ＳＳ?ｈａｖｅ?ｂｅｅｎ?ｄｉｖｉｄｅｄ?ｉｎｔｏ?ｓｐｅｃｉａｌｉｓｅｄ?（１－３）?ａｎｄ?ｃａｒｇｏ?（４－６）?ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ．??对比之下，货物效应蛋白不与Ｔ６ＳＳ装置的任何组分融合，并且在某些情况下，不??与Ｔ６ＳＳ的其他任何基因相邻。然而，大量的效应蛋白编码基因被发现与ｖｇｒＧ、六＃??或基因相毗邻，表明它们的分泌与邻近的核心成分有关。学者在迟钝爱德华菌中??首先发现了?Ｈｅｐ依赖性效应蛋白的易位，证实了效应蛋白ＥｖｐＰ与Ｈｅｐ之间的直接作??用［６４］。对铜绿假单胞菌Ｈ１－Ｔ６ＳＳ中ＨｃｐＩ和Ｔｓｅ２之间相互作用的研究发现，Ｔｓｅ２能??够直接与Ｈｃｐｌ相互作用，并且可以被定位到Ｈｃｐｌ小管的内表面［６５］。此外，由铜绿??假单胞菌的Ｈ１－Ｔ６ＳＳ递送的４种小的效应蛋白也是由Ｈｃｐｌ固定，表明Ｈｅｐ能够发挥??一种伴侣蛋白的作用，并且在其他细菌中可能也发挥这种作用。ＶｇｒＧ和ＰＡＡＲ蛋白??同样也被认为能够特异性结合效应蛋白，进而能够在分泌过程中引导它们的递送。事??实上，在霍乱弧菌中，磷脂酶效应蛋白Ｔｓｅ
第二篇试验研究第三章嗜水气单胞菌中国分离株ＮＪ－３５Ｔ６ＳＳ基因簇的鉴定及Ｈｅｐ家族蛋白多样性分析??ｄ５?ｄ１?Ｆ?ｄ３??—＞?—＞?—＞?—＞??＜—?／?＜—?＜—??６２?Ｒ?ｄ４?ｄ６??厶ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ??图３－ｌ嗜水气单胞菌基因缺失构建模式图??Ｆｉｇ?３－ｌ?Ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔ?ｉｎ?Ａ．?ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ??表３－２本研究相关引物??Ｔａｂｌｅ?３－２?Ｐｒｉｍｅｒｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｔｈｉｓ?ｓｔｕｄｙ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?（５ｆ?—？?３；）ａ?Ｆｕｎｃｔｉｏｎ???Ｈｃｐ－Ｆ?ＧＧＡＡＴＴＣＡＴＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＧＴＴＡＴＡＴＣＡＧ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ／；ｃｐ?ｇｅｎｅ??（￡ｃｏＲ?Ｉ）??Ｈｃｐ－Ｒ?ＣＣＧＣＴＣＧＡＧＴＴＡＧＧＣＣＴＣＧＡＴＣＧＧＣ?（Ｘｈｏ?Ｉ）??ｈｃｐｌ－ｄ＼?ＣＡＧＧＴＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＣＴＴＧＡＴＧＴＡＧＴ?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｈｅｐ?ｌ??ＣＡＴＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣ?（ＢａｍＷ＼）?ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔ??ｈｃｐｌ－ｄｌ?ＴＡＡＧＡＡＡＧＧＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＣＣＴ?Ａ?Ａ?ＡＴ?ＡＧ?ＡＴＴ??ＧＧ??ｈｃｐｌ－ｄ３?ＧＡＧＣＡＴＡＣＡＣＣＣＣＴＴＴＣＴＴＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＴＣＣ??ｈｃｐＪ－ｄ４?ＧＡＧＣＴＣＧＧＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＣＴＡＣＣＣＣ??ＧＣＡＣＡＣＴＣＴ?（Ｂａｍｌｌｌ）??ｈｃｐｌ－ｄ５?ＡＡＡＧＧＣ?ＡＴＴ?ＡＧ
【参考文献】：
期刊论文
[1]H-NS蛋白对副溶血弧菌hcp1的转录调控[J]. 王洁,董新波,高丽晓,周冬生,殷喆,张义全. 微生物学报. 2016(01)
[2]嗜水气单胞菌毒力因子研究进展[J]. 李绍戊,卢彤岩. 水产学杂志. 2013(05)
[3]嗜水气单胞菌及其对人的致病性[J]. 杨守明,王民生. 疾病控制杂志. 2006(05)
[4]引起鱼类暴发性流行病的嗜水气单胞菌的血清型、毒力及溶血性[J]. 钱冬,陈月英,沈锦玉,沈智华. 微生物学报. 1995(06)
[5]致病性嗜水气单胞菌及其所致鱼病综述[J]. 陆承平. 水产学报. 1992(03)
[6]介绍一种新的半干式免疫转渍法[J]. 李永兴,胡长征,王继文,李久蒂. 生物化学与生物物理进展. 1991(03)
本文编号：3489549
【文章来源】：南京农业大学江苏省 211工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：204 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１?ＶＩ型分泌系统（Ｔ６ＳＳ）的结构和机制示意图ｌ：Ｑｌ??Ｆｉｇ?２－１?Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ?Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?Ｔ６ＳＳ?Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ａｎｄ?Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ??
?嗜水气单胞菌ＶＩ型分泌系统效应分子Ｈｅｐ的功能分析???ｎ＾—??ＳＢ?３〉??Ｑ?Ｓｐｃａａｔｅ？ＪｒＨ？ｔ〇ｒｃｉｏ＜ｒ？ｎ?＇?５?＇??Ａａｗｊｏｒｙｐｒａｔ＾ｎ??ＩＭｆｆｌ？？??Ｔｒｅｎｃｔｓ?ｍ?Ｍ（ｃｒｏｂ＊ｏｌｏｇｙ??图２－２?Ｔ６ＳＳ效应蛋白递送模式图＾??Ｆｉｇ?２－２?Ｍｏｄｅｓ?ｏｆ?Ｅｆｆｅｃｔｏｒ?Ｄｅｌｉｖｅｒｙ?ｂｙ?ｔｈｅ?Ｔｙｐｅ?ＶＩ?Ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ?Ｓｙｓｔｅｍ?（Ｔ６ＳＳ）??Ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ?ｓｅｃｒｅｔｅｄ?ｖｉａ?ｔｈｅ?Ｔ６ＳＳ?ｈａｖｅ?ｂｅｅｎ?ｄｉｖｉｄｅｄ?ｉｎｔｏ?ｓｐｅｃｉａｌｉｓｅｄ?（１－３）?ａｎｄ?ｃａｒｇｏ?（４－６）?ｅｆｆｅｃｔｏｒｓ．??对比之下，货物效应蛋白不与Ｔ６ＳＳ装置的任何组分融合，并且在某些情况下，不??与Ｔ６ＳＳ的其他任何基因相邻。然而，大量的效应蛋白编码基因被发现与ｖｇｒＧ、六＃??或基因相毗邻，表明它们的分泌与邻近的核心成分有关。学者在迟钝爱德华菌中??首先发现了?Ｈｅｐ依赖性效应蛋白的易位，证实了效应蛋白ＥｖｐＰ与Ｈｅｐ之间的直接作??用［６４］。对铜绿假单胞菌Ｈ１－Ｔ６ＳＳ中ＨｃｐＩ和Ｔｓｅ２之间相互作用的研究发现，Ｔｓｅ２能??够直接与Ｈｃｐｌ相互作用，并且可以被定位到Ｈｃｐｌ小管的内表面［６５］。此外，由铜绿??假单胞菌的Ｈ１－Ｔ６ＳＳ递送的４种小的效应蛋白也是由Ｈｃｐｌ固定，表明Ｈｅｐ能够发挥??一种伴侣蛋白的作用，并且在其他细菌中可能也发挥这种作用。ＶｇｒＧ和ＰＡＡＲ蛋白??同样也被认为能够特异性结合效应蛋白，进而能够在分泌过程中引导它们的递送。事??实上，在霍乱弧菌中，磷脂酶效应蛋白Ｔｓｅ
第二篇试验研究第三章嗜水气单胞菌中国分离株ＮＪ－３５Ｔ６ＳＳ基因簇的鉴定及Ｈｅｐ家族蛋白多样性分析??ｄ５?ｄ１?Ｆ?ｄ３??—＞?—＞?—＞?—＞??＜—?／?＜—?＜—??６２?Ｒ?ｄ４?ｄ６??厶ｔａｒｇｅｔ?ｇｅｎｅ??图３－ｌ嗜水气单胞菌基因缺失构建模式图??Ｆｉｇ?３－ｌ?Ｍｏｄｅｌ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｇｅｎｅ?ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔ?ｉｎ?Ａ．?ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ??表３－２本研究相关引物??Ｔａｂｌｅ?３－２?Ｐｒｉｍｅｒｓ?ｕｓｅｄ?ｉｎ?ｔｈｉｓ?ｓｔｕｄｙ??Ｐｒｉｍｅｒ?Ｓｅｑｕｅｎｃｅ?（５ｆ?—？?３；）ａ?Ｆｕｎｃｔｉｏｎ???Ｈｃｐ－Ｆ?ＧＧＡＡＴＴＣＡＴＧＣＣＡＡＣＴＣＣＡＴＧＴＴＡＴＡＴＣＡＧ?Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ／；ｃｐ?ｇｅｎｅ??（￡ｃｏＲ?Ｉ）??Ｈｃｐ－Ｒ?ＣＣＧＣＴＣＧＡＧＴＴＡＧＧＣＣＴＣＧＡＴＣＧＧＣ?（Ｘｈｏ?Ｉ）??ｈｃｐｌ－ｄ＼?ＣＡＧＧＴＣＧＡＣＴＣＴＡＧＡＧＧＡＴＣＣＴＴＧＡＴＧＴＡＧＴ?Ｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎ?ｏｆ?ｔｈｅ?ｈｅｐ?ｌ??ＣＡＴＡＧＡＧＧＣＴＧＴＣ?（ＢａｍＷ＼）?ｄｅｌｅｔｉｏｎ?ｍｕｔａｎｔ??ｈｃｐｌ－ｄｌ?ＴＡＡＧＡＡＡＧＧＧＧＴＧＴＡＴＧＣＴＣＣＴ?Ａ?Ａ?ＡＴ?ＡＧ?ＡＴＴ??ＧＧ??ｈｃｐｌ－ｄ３?ＧＡＧＣＡＴＡＣＡＣＣＣＣＴＴＴＣＴＴＡＴＴＴＴＧＧＡＡＴＴＣＣ??ｈｃｐＪ－ｄ４?ＧＡＧＣＴＣＧＧＴＡＣＣＣＧＧＧＧＡＴＣＣＴＣＡＣＴＡＣＣＣＣ??ＧＣＡＣＡＣＴＣＴ?（Ｂａｍｌｌｌ）??ｈｃｐｌ－ｄ５?ＡＡＡＧＧＣ?ＡＴＴ?ＡＧ
【参考文献】：
期刊论文
[1]H-NS蛋白对副溶血弧菌hcp1的转录调控[J]. 王洁,董新波,高丽晓,周冬生,殷喆,张义全. 微生物学报. 2016(01)
[2]嗜水气单胞菌毒力因子研究进展[J]. 李绍戊,卢彤岩. 水产学杂志. 2013(05)
[3]嗜水气单胞菌及其对人的致病性[J]. 杨守明,王民生. 疾病控制杂志. 2006(05)
[4]引起鱼类暴发性流行病的嗜水气单胞菌的血清型、毒力及溶血性[J]. 钱冬,陈月英,沈锦玉,沈智华. 微生物学报. 1995(06)
[5]致病性嗜水气单胞菌及其所致鱼病综述[J]. 陆承平. 水产学报. 1992(03)
[6]介绍一种新的半干式免疫转渍法[J]. 李永兴,胡长征,王继文,李久蒂. 生物化学与生物物理进展. 1991(03)
本文编号：3489549
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/nykjbs/3489549.html
