铜绿假单胞菌裂解性噬菌体的筛
发布时间：2021-11-15 13:13
水貂是世界上最重要的毛皮动物品种。水貂养殖广泛分布于北美、北欧、俄罗斯、阿根廷、乌克兰以及中国等国家。随着集约化、规模化程度的提高,在降低养殖成本的同时,高密度养殖也带来了细菌性疾病的蔓延传播,给水貂养殖业带来了巨大的经济损失。其中,由铜绿假单胞菌引起的出血性肺炎,死亡率较高,是水貂养殖过程中一种重要的细菌传染性疾病。噬菌体是感染细菌的病毒,是自然界分布最广的一种生物类群,具有存在广泛、研发时间短、成本低；增殖快；安全有效；无残留等优点,作为抗生素的替代品,具有广阔的研发前景。近年来,抗生素的过量使用以及超级细菌的出现,噬菌体作为抗菌制剂的研发又开始受到国内外专家的普遍关注,并相继有一些在食品加工过程中控制食源性致病菌的噬菌体制剂产品面市。本论文以水貂源铜绿假单胞菌为宿主,分离其裂解性噬菌体,研究应用噬菌体对水貂出血性肺炎的控制作用。具体实验内容与结果如下：1.采集出血性肺炎水貂的肺部样品,使用铜绿假单胞菌选择性培养基,分离得到5株铜绿假单胞菌疑似菌株,经生理生化指标及16S rDNA分子生物学鉴定,PA1-1、 PA5-1-1、 PA5-1-2、 PA5-2-1、 PA5-2-25株...
【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１?ｐｈｉＫＭＶ?Ｉｔ菌体基因组结构［１４８］??Ｆｉｇ．?１．１?Ｇｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｐｈｉＫＭＶ?ｐｈａｇｅ??
能够对机体器官和组织造成极大危害，是铜绿假单胞菌最主要的致病因子［１７７］。??釆用ＥＬＩＳＡ方法，比较２０１２年与２００２年铜绿假单胞菌菌株的铜绿假单胞菌外毒素Ａ??水平，结果如图２．５所示。结果显示，与２００２年水貂源的铜绿假单胞菌比较，２０１２年??菌株的外毒素表达水平显著提高（Ｐ＜０．０５），暗示铜绿假单胞菌的致病性逐渐增强。??１．１２?－?—??＞?－Ｔ?■??Ｋ?Ｉ?Ｉ??Ｉｒ?Ｉ?，?Ｉ??图２．５不同年份铜绿假单胞菌分离株外毒素Ａ水平比较??＊表不差异显著（Ｐ＜０．０５）。??Ｆｉｇ．２．５?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｅｘｏｔｏｘｉｎ?Ａ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｒ?ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｙｅａｒ??＊ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ，Ｐ＜０．０５．??２．４．７丝裂霉素Ｃ诱导裂解实验??丝裂霉素Ｃ又称自力霉素，是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种抗肿瘤抗生素，??具有裂解细胞ＤＮＡ、干扰ＤＮＡ复制以及破坏或抑制细胞壁的形成，造成细胞壁缺陷型??细菌的功能。在分离哩菌体前，首先要确定宿主菌不能为溶源性细菌。目前普遍釆用的??是应用丝裂霉素诱导裂解方法处理宿主菌，如宿主菌为溶源性细菌，就会导致原嗟菌体??活化
?２．４．１１?一步生长曲线??ＰＰＡ０２０５和ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ?２种噬菌体的？步生长曲线如图２．９所示。可以看出，職??菌体ＰＰＡ０２０５、ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ潜伏期分别为３０?ｍｉｎ和２５?ｍｉｎ，裂解期分别为４０?ｍｉｎ和??３５ｍｉｎ，裂解量分别为７０?ＰＦＵ／?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｃｅｌｌ和１１５?ＰＦＵ／?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｃｅｌｌ，即每个感染的细胞??大约可以释放７０和１１５个子代噬菌体。与睡菌体ＰＰＡ０２０５相比较，噬菌体ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ??的潜伏期和裂解期较短，裂解量较大。??１０?ｒ??—＾ＰＰＡ０：０５?ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ??■??＾??Ｓ?‘?？?‘?■?？?？?‘??０?１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０?ＳＯ?９０??ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??图２．９?■菌体一步生长曲线??Ｆｉｇ?２．９?Ｏｎｅ－ｓｔｅｐ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??２．４．１２?１１菌体的体外抑菌实验??应用噬菌体在动物体内控制致病菌实验前，需要考察在体外条件下噬菌体对致病菌??的裂解能力。噬菌体按照不同的感染复数加入到铜绿假单胞菌的培养液，在不同的时间??点检测培养液的ＯＤｅｏｏ值，可以反应各个处理铜绿假单胞菌的生长情况。结果如图２．１０??和图２．１１所示
【参考文献】：
期刊论文
[1]ICTV第九次报告对病毒分类系统的一些修改[J]. 张忠信. 病毒学报. 2012(05)
[2]绿脓杆菌外毒素A的最新研究进展[J]. 夏海华,于冲,曲晓军,孙建华,王金英. 生物技术. 2012(02)
[3]应对耐药菌的新方法—噬菌体制剂[J]. 武英. 国外医药(抗生素分册). 2011(05)
[4]水貂绿脓杆菌分离株的生物学特性和血清型分析[J]. 白雪,柴秀丽,闫喜军,高晗,张海玲,赵建军,张蕾,邵西群,罗国良,王长凤. 畜牧与兽医. 2011(07)
[5]试用噬菌体制止超级细菌感染刍议——回忆原‘大连所’的一个早已被人们遗忘了的旮旯[J]. 陈廷祚. 微生物学免疫学进展. 2010(04)
[6]水貂出血性肺炎的诊治[J]. 李国华,史秋梅. 中国兽医杂志. 2010(07)
[7]噬菌体基因组学研究进展[J]. 王雨晨,孙建和. 畜牧与兽医. 2010(06)
[8]铜绿假单胞菌噬菌体PaP1内溶素基因克隆、表达及活性分析[J]. 孙卫忠,胡晓梅,饶贤才,谭银玲,陈志谨,丛延广,胡福泉. 第三军医大学学报. 2008(13)
[9]通过生物信息学技术预测铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的作用机制[J]. 孙卫忠,胡晓梅,饶贤才,谭银玲,陈志谨,丛延广,胡福泉. 第三军医大学学报. 2008(09)
[10]水貂在配种期应当注意的事项[J]. 马玉胜. 农村养殖技术. 2008(03)
博士论文
[1]日粮蛋白质和蛋氨酸水平对水貂生产性能及毛皮发育的影响[D]. 张海华.中国农业科学院 2011
本文编号：3496849
【文章来源】：大连理工大学辽宁省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图１．１?ｐｈｉＫＭＶ?Ｉｔ菌体基因组结构［１４８］??Ｆｉｇ．?１．１?Ｇｅｎｏｍｅ?ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ?ｏｆ?ｐｈｉＫＭＶ?ｐｈａｇｅ??
能够对机体器官和组织造成极大危害，是铜绿假单胞菌最主要的致病因子［１７７］。??釆用ＥＬＩＳＡ方法，比较２０１２年与２００２年铜绿假单胞菌菌株的铜绿假单胞菌外毒素Ａ??水平，结果如图２．５所示。结果显示，与２００２年水貂源的铜绿假单胞菌比较，２０１２年??菌株的外毒素表达水平显著提高（Ｐ＜０．０５），暗示铜绿假单胞菌的致病性逐渐增强。??１．１２?－?—??＞?－Ｔ?■??Ｋ?Ｉ?Ｉ??Ｉｒ?Ｉ?，?Ｉ??图２．５不同年份铜绿假单胞菌分离株外毒素Ａ水平比较??＊表不差异显著（Ｐ＜０．０５）。??Ｆｉｇ．２．５?Ｃｏｍｐａｒｉｓｏｎ?ｏｆ?ｅｘｏｔｏｘｉｎ?Ａ?ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ?ｏｆ?Ｒ?ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ?ｉｓｏｌａｔｅｓ?ｉｎ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ?ｙｅａｒ??＊ｒｅｐｒｅｓｅｎｔｓ?ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ?ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅｓ，Ｐ＜０．０５．??２．４．７丝裂霉素Ｃ诱导裂解实验??丝裂霉素Ｃ又称自力霉素，是从头状链霉菌培养液中分离提取的一种抗肿瘤抗生素，??具有裂解细胞ＤＮＡ、干扰ＤＮＡ复制以及破坏或抑制细胞壁的形成，造成细胞壁缺陷型??细菌的功能。在分离哩菌体前，首先要确定宿主菌不能为溶源性细菌。目前普遍釆用的??是应用丝裂霉素诱导裂解方法处理宿主菌，如宿主菌为溶源性细菌，就会导致原嗟菌体??活化
?２．４．１１?一步生长曲线??ＰＰＡ０２０５和ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ?２种噬菌体的？步生长曲线如图２．９所示。可以看出，職??菌体ＰＰＡ０２０５、ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ潜伏期分别为３０?ｍｉｎ和２５?ｍｉｎ，裂解期分别为４０?ｍｉｎ和??３５ｍｉｎ，裂解量分别为７０?ＰＦＵ／?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｃｅｌｌ和１１５?ＰＦＵ／?ｉｎｆｅｃｔｅｄ?ｃｅｌｌ，即每个感染的细胞??大约可以释放７０和１１５个子代噬菌体。与睡菌体ＰＰＡ０２０５相比较，噬菌体ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ??的潜伏期和裂解期较短，裂解量较大。??１０?ｒ??—＾ＰＰＡ０：０５?ＰＰＡ－ＡＢＴＮＬ??■??＾??Ｓ?‘?？?‘?■?？?？?‘??０?１０?２０?３０?４０?５０?６０?７０?ＳＯ?９０??ｔｉｍｅ?（ｍｉｎ）??图２．９?■菌体一步生长曲线??Ｆｉｇ?２．９?Ｏｎｅ－ｓｔｅｐ?ｇｒｏｗｔｈ?ｃｕｒｖｅ?ｏｆ?ｐｈａｇｅｓ??２．４．１２?１１菌体的体外抑菌实验??应用噬菌体在动物体内控制致病菌实验前，需要考察在体外条件下噬菌体对致病菌??的裂解能力。噬菌体按照不同的感染复数加入到铜绿假单胞菌的培养液，在不同的时间??点检测培养液的ＯＤｅｏｏ值，可以反应各个处理铜绿假单胞菌的生长情况。结果如图２．１０??和图２．１１所示
【参考文献】：
期刊论文
[1]ICTV第九次报告对病毒分类系统的一些修改[J]. 张忠信. 病毒学报. 2012(05)
[2]绿脓杆菌外毒素A的最新研究进展[J]. 夏海华,于冲,曲晓军,孙建华,王金英. 生物技术. 2012(02)
[3]应对耐药菌的新方法—噬菌体制剂[J]. 武英. 国外医药(抗生素分册). 2011(05)
[4]水貂绿脓杆菌分离株的生物学特性和血清型分析[J]. 白雪,柴秀丽,闫喜军,高晗,张海玲,赵建军,张蕾,邵西群,罗国良,王长凤. 畜牧与兽医. 2011(07)
[5]试用噬菌体制止超级细菌感染刍议——回忆原‘大连所’的一个早已被人们遗忘了的旮旯[J]. 陈廷祚. 微生物学免疫学进展. 2010(04)
[6]水貂出血性肺炎的诊治[J]. 李国华,史秋梅. 中国兽医杂志. 2010(07)
[7]噬菌体基因组学研究进展[J]. 王雨晨,孙建和. 畜牧与兽医. 2010(06)
[8]铜绿假单胞菌噬菌体PaP1内溶素基因克隆、表达及活性分析[J]. 孙卫忠,胡晓梅,饶贤才,谭银玲,陈志谨,丛延广,胡福泉. 第三军医大学学报. 2008(13)
[9]通过生物信息学技术预测铜绿假单胞菌噬菌体内溶素的作用机制[J]. 孙卫忠,胡晓梅,饶贤才,谭银玲,陈志谨,丛延广,胡福泉. 第三军医大学学报. 2008(09)
[10]水貂在配种期应当注意的事项[J]. 马玉胜. 农村养殖技术. 2008(03)
博士论文
[1]日粮蛋白质和蛋氨酸水平对水貂生产性能及毛皮发育的影响[D]. 张海华.中国农业科学院 2011
本文编号：3496849
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