田鼠巴贝斯虫外泌体的分离鉴定及两种抗氧化酶分子的功能研究
发布时间：2022-01-08 01:51
田鼠巴贝斯虫（Babesia microti）是最重要的人兽共患巴贝斯虫之一,经蜱传播,寄生于宿主红细胞中。目前,防控巴贝斯虫病仍缺少疫苗和高效药物,了解虫体与宿主的互作机制,研发新型防治技术已刻不容缓。外泌体是一种可携带蛋白质、RNA和脂质等多种生物活性物质的膜性小囊泡,可以介导免疫调节、细胞迁移和细胞间通讯等功能。目前已有多种寄生虫外泌体在寄生虫-宿主互作中发挥重要作用的研究被报道,然而巴贝斯虫外泌体研究仍基本为空白。因此对田鼠巴贝斯虫外泌体的研究为深入解析巴贝斯虫与宿主互作机制提供基础。此外,B.nicroti寄生于宿主红细胞中,必然暴露于活性氧簇（reactive oxygen species,ROS）,虫体依赖硫氧还蛋白系统抵抗宿主的氧化作用。硫氧还蛋白（thioredoxin,Trx）是一种广泛存在于原核生物和真核生物中的小分子蛋白质,它和硫氧还蛋白还原酶（thioredoxin reductase,TrxR）、NADPH共同构成了硫氧还蛋白系统,是硫氧还蛋白系统的重要组成部分。已有研究表明恶性疟原虫（Plasmodium farciparum）Trx2和TrxR分子都是潜...
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１外泌体的生物合成途径??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??
２外泌体的组分??近年来，对外泌体的研究己然成为热门，大量的研宄数据清晰的揭示了外泌??体的结构和功能。外泌体主要组成包括脂质、蛋白质和核酸（图２－２）。??然而，引发人们密切关注的是外泌体中的蛋白质。许多外泌体均携带有部分??母细胞来源的共通的蛋白组分，同时又含有另外一部分蛋白可以反映细胞来源特??异性，可以反映母细胞的类型和病理生理状态［１Ｑ，１１］。普遍在各种外泌体中发现的??蛋白有血小板衍化生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ），乳凝集素??（ｌａｃｔａｄｈｅｒｉｎ），跨膜蛋白家族和溶酶体相关膜蛋白－２Ｂ?（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ａｎｄ??ｌｙｓｏｓｏｍｅ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ－２Ｂ）?［１２，丨３］，膜转运和融合蛋白如膜耳关蛋白??（ａｎｎｅｘｉｎｓ）、小窝蛋白（ｆｌｏｔｉｌｌｉｎｓ）、ＧＴＰ?酶（ＧＴＰａｓｅｓ）、热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋ??ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、四分子交耳关体家方矣成员（ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎｓ，如?ＣＤ９，ＣＤ６３，ＣＤ８１，ＣＤ８２），多??１４??
（６）尽量弃去上层白色物质，同时尽量吸取沉淀上面的絮状物，剩余即为红??细胞，１ＸＰＢＳ重悬清洗，２０００ｒｐｍ，４°Ｃ离心ｌＯｍｉｎ，重复三次。??１．２．２田鼠巴贝斯虫的短期体外培养??将１Ｘ１０７田鼠巴贝斯虫感染４周龄雌性昆明小鼠（约３０ｇ）。感染后７２ｈ，染??虫率约３０％－４０％时，应用１．２．１中所述方法收集染虫红细胞。将每ＩＸ?１〇７染虫红??细胞用?ｌｍｌ?培养液（含有?４０％?ＦＢＳ、２５?ｍＭＨＥＰＥＳ、１％?Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ?的??ＲＰＭＩ?１６４０）重悬，置于３７１：，５％Ｃ０２环境中培养。??１．２．３免疫血清制备??将１Ｘ１０７田鼠巴贝斯虫感染４周龄雌性昆明小鼠（约３０ｇ）。感染后２１天，??对小鼠摘眼球采血，收集血液置于３７°Ｃ温浴ｌｈ，而后４°Ｃ静置过夜。３０００ｒｐｍ，４°Ｃ??离心ｌＯｍｉｎ，吸取血清并每管２０ｕｌ分装，－７０°Ｃ保存备用。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
[2]1例人感染巴贝虫的诊断与病原体鉴定[J]. 姚立农,阮卫,曾长佑,李祖火,张轩,雷永良,陆巧绎,陈华良. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(02)
[3]鼠与蜱感染人致病性巴贝虫状况的初步研究[J]. 范东辉,李明,徐翮飞,呼满霞,张箭,孙毅. 中华卫生杀虫药械. 2012(01)
[4]人体感染巴贝虫一例[J]. 石珍宝,李珍珍,高权荣,丁玉茂. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 1996(03)
[5]人巴贝虫病[J]. 刘朝一,范生尧. 中国人兽共患病杂志. 1993(05)
[6]人巴贝斯焦虫病的发现[J]. 李金福,孟大邦,王庆芳,董兴仁,王进义. 中国兽医杂志. 1984(06)
硕士论文
[1]田鼠巴贝斯虫两个硫氧还蛋白基因的克隆及鉴定[D]. 熊康.上海师范大学 2016
本文编号：3575668
【文章来源】：中国农业科学院北京市
【文章页数】：93 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
图２－１外泌体的生物合成途径??Ｆｉｕｒｅ?２－１?Ｂｉｏｓｙｎｔｈｅｔｉｃ?ｐａｔｈｗａｙ?ｏｆ?ｅｘｏｓｏｍｅｓ??
２外泌体的组分??近年来，对外泌体的研究己然成为热门，大量的研宄数据清晰的揭示了外泌??体的结构和功能。外泌体主要组成包括脂质、蛋白质和核酸（图２－２）。??然而，引发人们密切关注的是外泌体中的蛋白质。许多外泌体均携带有部分??母细胞来源的共通的蛋白组分，同时又含有另外一部分蛋白可以反映细胞来源特??异性，可以反映母细胞的类型和病理生理状态［１Ｑ，１１］。普遍在各种外泌体中发现的??蛋白有血小板衍化生长因子（ｐｌａｔｅｌｅｔ?ｄｅｒｉｖｅｄ?ｇｒｏｗｔｈ?ｆａｃｔｏｒ?ｒｅｃｅｐｔｏｒ），乳凝集素??（ｌａｃｔａｄｈｅｒｉｎ），跨膜蛋白家族和溶酶体相关膜蛋白－２Ｂ?（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎｓ?ａｎｄ??ｌｙｓｏｓｏｍｅ?ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ?ｍｅｍｂｒａｎｅ?ｐｒｏｔｅｉｎ－２Ｂ）?［１２，丨３］，膜转运和融合蛋白如膜耳关蛋白??（ａｎｎｅｘｉｎｓ）、小窝蛋白（ｆｌｏｔｉｌｌｉｎｓ）、ＧＴＰ?酶（ＧＴＰａｓｅｓ）、热休克蛋白（ｈｅａｔｓｈｏｃｋ??ｐｒｏｔｅｉｎｓ）、四分子交耳关体家方矣成员（ｔｅｔｒａｓｐａｎｉｎｓ，如?ＣＤ９，ＣＤ６３，ＣＤ８１，ＣＤ８２），多??１４??
（６）尽量弃去上层白色物质，同时尽量吸取沉淀上面的絮状物，剩余即为红??细胞，１ＸＰＢＳ重悬清洗，２０００ｒｐｍ，４°Ｃ离心ｌＯｍｉｎ，重复三次。??１．２．２田鼠巴贝斯虫的短期体外培养??将１Ｘ１０７田鼠巴贝斯虫感染４周龄雌性昆明小鼠（约３０ｇ）。感染后７２ｈ，染??虫率约３０％－４０％时，应用１．２．１中所述方法收集染虫红细胞。将每ＩＸ?１〇７染虫红??细胞用?ｌｍｌ?培养液（含有?４０％?ＦＢＳ、２５?ｍＭＨＥＰＥＳ、１％?Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｎ－Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｉｎ?的??ＲＰＭＩ?１６４０）重悬，置于３７１：，５％Ｃ０２环境中培养。??１．２．３免疫血清制备??将１Ｘ１０７田鼠巴贝斯虫感染４周龄雌性昆明小鼠（约３０ｇ）。感染后２１天，??对小鼠摘眼球采血，收集血液置于３７°Ｃ温浴ｌｈ，而后４°Ｃ静置过夜。３０００ｒｐｍ，４°Ｃ??离心ｌＯｍｉｎ，吸取血清并每管２０ｕｌ分装，－７０°Ｃ保存备用。??
【参考文献】：
期刊论文
[1]Exosome and Exosomal MicroRNA: Trafficking, Sorting, and Function[J]. Jian Zhang,Sha Li,Lu Li,Meng Li,Chongye Guo,Jun Yao,Shuangli Mi. Genomics,Proteomics & Bioinformatics. 2015(01)
[2]1例人感染巴贝虫的诊断与病原体鉴定[J]. 姚立农,阮卫,曾长佑,李祖火,张轩,雷永良,陆巧绎,陈华良. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 2012(02)
[3]鼠与蜱感染人致病性巴贝虫状况的初步研究[J]. 范东辉,李明,徐翮飞,呼满霞,张箭,孙毅. 中华卫生杀虫药械. 2012(01)
[4]人体感染巴贝虫一例[J]. 石珍宝,李珍珍,高权荣,丁玉茂. 中国寄生虫学与寄生虫病杂志. 1996(03)
[5]人巴贝虫病[J]. 刘朝一,范生尧. 中国人兽共患病杂志. 1993(05)
[6]人巴贝斯焦虫病的发现[J]. 李金福,孟大邦,王庆芳,董兴仁,王进义. 中国兽医杂志. 1984(06)
硕士论文
[1]田鼠巴贝斯虫两个硫氧还蛋白基因的克隆及鉴定[D]. 熊康.上海师范大学 2016
本文编号：3575668
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