促黄体素与雌激素在小鼠和山羊卵丘扩展中的作用及其机制研究
发布时间：2023-06-18 05:10
哺乳动物的卵母细胞在个体出生前后,就进入第一次减数分裂,并被阻滞在第一次减数分裂前期的双线期,这种阻滞可能长达数月、数年甚至数十年之久,直到在排卵前促黄体素(LH)峰的刺激下,成熟卵泡中的卵母细胞才会恢复并完成减数分裂,成为具备受精和后续发育能力的成熟卵母细胞。在雌性哺乳动物的每个发情周期中,雌激素分泌波总是伴随着LH峰的出现,并在雌激素分泌波和LH峰出现之后发生成熟卵母细胞的排卵。而关于雌激素分泌波和LH峰调控卵母细胞减数分裂的具体机制及其二者之间的调控关系尚不十分明确。雌激素通过激活其核受体(ERs)和其膜受体(GPR30),进而通过受体发挥不同的生物学效应。不同的雌激素受体与雌激素的亲和力不同,ERs与雌激素的亲和力较高,较低浓度雌激素即可激活ERs;而GPR30与雌激素亲和力较低,激活GPR30需要更高的雌激素浓度。本论文作者所在研究团队的前期研究显示,低浓度雌激素能够通过激活ERs信号通路增强CNP维持卵母细胞减数分裂的作用,而高浓度雌激素却能通过激活GPR30信号通路促进减数分裂恢复。因此,本研究主要聚焦于排卵前雌激素分泌波和LH峰调控卵丘-卵母细胞复合体卵丘细胞扩展的具体...
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
第一章 哺乳动物卵母细胞生长发育与成熟研究进展
1.1 卵子发生与卵泡发育
1.1.1 卵子发生
1.1.2 卵泡发育
1.2 减数分裂阻滞的维持与相关分子机制
1.2.1 哺乳动物第一次减数分裂阻滞
1.2.2 维持卵母细胞减数分裂阻滞的分子机制
1.3 卵母细胞减数分裂恢复与后续发育潜能的获得
1.3.1 卵母细胞减数分裂恢复
1.3.2 卵母细胞的后续发育潜能
1.4 卵丘扩展
1.4.1 卵丘细胞
1.4.2 卵丘细胞与卵母细胞的互作调控
1.4.3 卵丘细胞扩展
1.5 小结
第二章 雌激素及其受体在卵巢中的功能研究进展
2.1 雌激素
2.1.1 雌激素的定义、生物合成与代谢
2.1.2 雌激素的生理功能
2.2 雌激素核受体与雌激素的基因组效应
2.2.1 雌激素核受体的分子结构
2.2.2 雌激素核受体信号的调控机制
2.3 雌激素膜受体与雌激素的非基因组效应
2.3.1 雌激素膜受体的分子结构
2.3.2 雌激素膜受体的定位与表达
2.3.3 雌激素膜受体功能预测
2.4 雌激素对卵丘扩展的调控作用
2.5 小结
第三章 表皮生长因子信号通路参与调控卵母细胞成熟过程的机制研究进展
3.1 表皮生长因子与受体概述
3.1.1 表皮生长因子与受体
3.1.2 表皮生长因子信号通路的功能
3.2 表皮因子受体信号通路在卵母细胞成熟过程中的作用
3.2.1 LH上调颗粒细胞中类表皮样生长因子表达
3.2.2 EGFR信号通路在卵母细胞成熟过程中的作用
3.3 小结
3.4 本研究的目的和意义
试验研究
第四章 促黄体素对卵丘卵母细胞复合体中GPR30水平的调控作用及其作用机制研究
4.1 材料和方法
4.1.1 研究对象
4.1.2 试验材料
4.1.3 液体配制
4.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养
4.1.5 表皮生长因子受体抑制小鼠模型的制备与超数排卵处理
4.1.6 山羊卵泡与COCs的回收与体外培养
4.1.7 实时荧光定量聚合酶链式反应
4.1.8 蛋白免疫印迹试验(Western blot)
4.1.9 免疫荧光染色
4.1.10 数据统计
4.2 试验结果
4.2.1 LH/h CG对小鼠COC中 GPR30 基因表达的调控作用
4.2.2 LH/h CG对小鼠COC中 GPR30 蛋白水平的调控作用
4.2.3 LH/h CG诱导类表皮样生长因子表达调控小鼠COCs中 GPR30 水平
4.2.4 EGF下调体外培养的小鼠COCs中 GPR30 基因表达水平
4.2.5 EGF上调体外培养的小鼠COCs中 GPR30 蛋白水平
4.2.6 EGF通过激活小鼠卵丘细胞上的EGF受体上调GPR30 蛋白水平
4.2.7 LH对山羊卵泡COC中GPR30基因表达的调控作用
4.2.8 LH对山羊卵泡COC中GPR30蛋白水平的调控作用研究
4.2.9 LH诱导山羊卵泡壁颗粒细胞表达类表皮样生长因子,进而上调山羊COCs中 GPR30 的水平
4.2.10 山羊COCs体外成熟培养过程中GPR30 基因表达变化趋势检测
4.2.11 EGF上调体外培养的山羊COCs中 GPR30 蛋白水平
4.2.12 EGF通过激活山羊COCs的 EGF受体上调GPR30 蛋白水平
4.2.13 EGF通过非基因组途径调控山羊COCs中的GPR30 蛋白水平变化
4.2.14 EGF激活EGFR上调GPR30 蛋白水平的作用发生在卵丘细胞上
4.3 讨论
4.3.1 EGFR信号通路介导了LH上调COCs中 GPR30 蛋白水平的作用
4.3.2 LH/EGF通过非基因组途径调控COCs中 GPR30 的蛋白水平
4.3.3 LH信号上调COCs中 GPR30 蛋白水平的作用发生在卵丘细胞上
4.4 小结
第五章 表皮生长因子受体信号通路调控颗粒细胞中GPR30蛋白降解的机制研究
5.1 材料和方法
5.1.1 研究对象
5.1.2 试验材料
5.1.3 液体配制
5.1.4 小鼠原代卵泡颗粒细胞的收集与培养
5.1.5 实时荧光定量聚合酶链式反应
5.1.6 蛋白免疫印迹试验(Western blot)
5.1.7 免疫荧光染色
5.1.8 细胞溶酶体活性检测
5.1.9 数据统计
5.2 试验结果
5.2.1 EGF通过激活EGFR上调原代卵泡颗粒细胞中GPR30 蛋白水平
5.2.2 EGFR激活延长了卵泡颗粒细胞中GPR30 蛋白的半衰期
5.2.3 卵泡颗粒细胞中GPR30蛋白降解途径检测
5.2.4 EGFR激活降低了卵泡颗粒细胞中的溶酶体活性
5.2.5 EGFR激活减少了卵泡颗粒细胞中溶酶体的数量
5.3 讨论
5.4 小结
第六章 雌激素通过GPR30信号通路调节卵丘细胞中表皮生长因子受体水平的机制研究
6.1 材料和方法
6.1.1 研究对象
6.1.2 试验材料
6.1.3 液体配制
6.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养
6.1.5 山羊卵泡与COCs的回收与体外培养
6.1.6 蛋白免疫印迹试验
6.1.7 数据统计
6.2 试验结果
6.2.1 体内成熟过程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.2 体外成熟培养过程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.3 17β-E2 激活GPR30 信号通路上调小鼠COCs中 EGFR蛋白水平
6.2.4 在卵泡中成熟的山羊COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.5 体外成熟培养的山羊COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.6 17β-E2 激活GPR30 信号通路上调山羊COCs中 EGFR蛋白水平
6.3 讨论
6.3.1 17β-E2 激活GPR30 信号通路上调COCs中 EGFR蛋白水平
6.3.2 较高的EGFR蛋白水平有助于维持EGFR的持续激活
6.4 小结
第七章 雌激素通过激活GPR30 通路增强LH/EGF信号促进卵丘扩展的研究
7.1 材料和方法
7.1.1 研究对象
7.1.2 试验材料
7.1.3 液体配制
7.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养
7.1.5 山羊COCs的回收与体外培养
7.1.6 实时荧光定量聚合酶链式反应
7.1.7 卵丘扩展分级与扩展指数统计
7.1.8 数据统计
7.2 试验结果
7.2.1 GPR30信号通路激活加强了EGF促进小鼠卵丘扩展的作用
7.2.2 17β-E2通过GPR30信号通路促进小鼠卵丘扩展相关基因表达
7.2.3 GPR30信号通路激活加强了EGF促进山羊卵丘扩展的作用
7.2.4 17β-E2通过GPR30信号通路促进山羊卵丘扩展相关基因表达
7.3 讨论
7.3.1 E2/GPR30信号通路激活加强了EGF促进卵丘扩展的作用
7.3.2 E2/GPR30信号通路激活加强了EGF上调卵丘扩展相关基因的作用
7.4 小结
结论
创新点
缩略词
参考文献
致谢
个人简历
本文编号：3834848
【文章页数】：138 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
文献综述
第一章 哺乳动物卵母细胞生长发育与成熟研究进展
1.1 卵子发生与卵泡发育
1.1.1 卵子发生
1.1.2 卵泡发育
1.2 减数分裂阻滞的维持与相关分子机制
1.2.1 哺乳动物第一次减数分裂阻滞
1.2.2 维持卵母细胞减数分裂阻滞的分子机制
1.3 卵母细胞减数分裂恢复与后续发育潜能的获得
1.3.1 卵母细胞减数分裂恢复
1.3.2 卵母细胞的后续发育潜能
1.4 卵丘扩展
1.4.1 卵丘细胞
1.4.2 卵丘细胞与卵母细胞的互作调控
1.4.3 卵丘细胞扩展
1.5 小结
第二章 雌激素及其受体在卵巢中的功能研究进展
2.1 雌激素
2.1.1 雌激素的定义、生物合成与代谢
2.1.2 雌激素的生理功能
2.2 雌激素核受体与雌激素的基因组效应
2.2.1 雌激素核受体的分子结构
2.2.2 雌激素核受体信号的调控机制
2.3 雌激素膜受体与雌激素的非基因组效应
2.3.1 雌激素膜受体的分子结构
2.3.2 雌激素膜受体的定位与表达
2.3.3 雌激素膜受体功能预测
2.4 雌激素对卵丘扩展的调控作用
2.5 小结
第三章 表皮生长因子信号通路参与调控卵母细胞成熟过程的机制研究进展
3.1 表皮生长因子与受体概述
3.1.1 表皮生长因子与受体
3.1.2 表皮生长因子信号通路的功能
3.2 表皮因子受体信号通路在卵母细胞成熟过程中的作用
3.2.1 LH上调颗粒细胞中类表皮样生长因子表达
3.2.2 EGFR信号通路在卵母细胞成熟过程中的作用
3.3 小结
3.4 本研究的目的和意义
试验研究
第四章 促黄体素对卵丘卵母细胞复合体中GPR30水平的调控作用及其作用机制研究
4.1 材料和方法
4.1.1 研究对象
4.1.2 试验材料
4.1.3 液体配制
4.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养
4.1.5 表皮生长因子受体抑制小鼠模型的制备与超数排卵处理
4.1.6 山羊卵泡与COCs的回收与体外培养
4.1.7 实时荧光定量聚合酶链式反应
4.1.8 蛋白免疫印迹试验(Western blot)
4.1.9 免疫荧光染色
4.1.10 数据统计
4.2 试验结果
4.2.1 LH/h CG对小鼠COC中 GPR30 基因表达的调控作用
4.2.2 LH/h CG对小鼠COC中 GPR30 蛋白水平的调控作用
4.2.3 LH/h CG诱导类表皮样生长因子表达调控小鼠COCs中 GPR30 水平
4.2.4 EGF下调体外培养的小鼠COCs中 GPR30 基因表达水平
4.2.5 EGF上调体外培养的小鼠COCs中 GPR30 蛋白水平
4.2.6 EGF通过激活小鼠卵丘细胞上的EGF受体上调GPR30 蛋白水平
4.2.7 LH对山羊卵泡COC中GPR30基因表达的调控作用
4.2.8 LH对山羊卵泡COC中GPR30蛋白水平的调控作用研究
4.2.9 LH诱导山羊卵泡壁颗粒细胞表达类表皮样生长因子,进而上调山羊COCs中 GPR30 的水平
4.2.10 山羊COCs体外成熟培养过程中GPR30 基因表达变化趋势检测
4.2.11 EGF上调体外培养的山羊COCs中 GPR30 蛋白水平
4.2.12 EGF通过激活山羊COCs的 EGF受体上调GPR30 蛋白水平
4.2.13 EGF通过非基因组途径调控山羊COCs中的GPR30 蛋白水平变化
4.2.14 EGF激活EGFR上调GPR30 蛋白水平的作用发生在卵丘细胞上
4.3 讨论
4.3.1 EGFR信号通路介导了LH上调COCs中 GPR30 蛋白水平的作用
4.3.2 LH/EGF通过非基因组途径调控COCs中 GPR30 的蛋白水平
4.3.3 LH信号上调COCs中 GPR30 蛋白水平的作用发生在卵丘细胞上
4.4 小结
第五章 表皮生长因子受体信号通路调控颗粒细胞中GPR30蛋白降解的机制研究
5.1 材料和方法
5.1.1 研究对象
5.1.2 试验材料
5.1.3 液体配制
5.1.4 小鼠原代卵泡颗粒细胞的收集与培养
5.1.5 实时荧光定量聚合酶链式反应
5.1.6 蛋白免疫印迹试验(Western blot)
5.1.7 免疫荧光染色
5.1.8 细胞溶酶体活性检测
5.1.9 数据统计
5.2 试验结果
5.2.1 EGF通过激活EGFR上调原代卵泡颗粒细胞中GPR30 蛋白水平
5.2.2 EGFR激活延长了卵泡颗粒细胞中GPR30 蛋白的半衰期
5.2.3 卵泡颗粒细胞中GPR30蛋白降解途径检测
5.2.4 EGFR激活降低了卵泡颗粒细胞中的溶酶体活性
5.2.5 EGFR激活减少了卵泡颗粒细胞中溶酶体的数量
5.3 讨论
5.4 小结
第六章 雌激素通过GPR30信号通路调节卵丘细胞中表皮生长因子受体水平的机制研究
6.1 材料和方法
6.1.1 研究对象
6.1.2 试验材料
6.1.3 液体配制
6.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养
6.1.5 山羊卵泡与COCs的回收与体外培养
6.1.6 蛋白免疫印迹试验
6.1.7 数据统计
6.2 试验结果
6.2.1 体内成熟过程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.2 体外成熟培养过程中小鼠COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.3 17β-E2 激活GPR30 信号通路上调小鼠COCs中 EGFR蛋白水平
6.2.4 在卵泡中成熟的山羊COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.5 体外成熟培养的山羊COCs中 EGFR蛋白水平检测
6.2.6 17β-E2 激活GPR30 信号通路上调山羊COCs中 EGFR蛋白水平
6.3 讨论
6.3.1 17β-E2 激活GPR30 信号通路上调COCs中 EGFR蛋白水平
6.3.2 较高的EGFR蛋白水平有助于维持EGFR的持续激活
6.4 小结
第七章 雌激素通过激活GPR30 通路增强LH/EGF信号促进卵丘扩展的研究
7.1 材料和方法
7.1.1 研究对象
7.1.2 试验材料
7.1.3 液体配制
7.1.4 小鼠COCs的回收与体外培养
7.1.5 山羊COCs的回收与体外培养
7.1.6 实时荧光定量聚合酶链式反应
7.1.7 卵丘扩展分级与扩展指数统计
7.1.8 数据统计
7.2 试验结果
7.2.1 GPR30信号通路激活加强了EGF促进小鼠卵丘扩展的作用
7.2.2 17β-E2通过GPR30信号通路促进小鼠卵丘扩展相关基因表达
7.2.3 GPR30信号通路激活加强了EGF促进山羊卵丘扩展的作用
7.2.4 17β-E2通过GPR30信号通路促进山羊卵丘扩展相关基因表达
7.3 讨论
7.3.1 E2/GPR30信号通路激活加强了EGF促进卵丘扩展的作用
7.3.2 E2/GPR30信号通路激活加强了EGF上调卵丘扩展相关基因的作用
7.4 小结
结论
创新点
缩略词
参考文献
致谢
个人简历
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