蛋鸡退化卵泡衰退的机制及其功能的研究
发布时间：2023-07-01 13:06
蛋鸡的产蛋性能主要取决于卵巢中生殖细胞以及卵泡的生长发育水平,而卵泡发育的调控是蛋禽繁殖的核心问题。家禽卵巢中只有不超过5%的卵泡可完成发育过程,最后成熟排卵。卵母细胞被排出后,遗留下来的组织被称为排卵后卵泡(postovulatory follicle,POF),在完成排卵之后,POF开始逐渐退化。而另外超过95%没有完成发育至成熟排卵的卵泡,最终都发生退化,这部分卵泡称闭锁卵泡(atretic follicle)。POF与闭锁卵泡组成了家禽卵巢中两种退化卵泡(regressed follicle)。本实验以海兰白蛋鸡为研究对象,一方面以研究POF调节蛋鸡卵泡发育的分子机制,另一方面探究延缓卵泡闭锁的方法。利用POF调节成鸡卵泡发育和减缓卵泡闭锁的双重措施,使蛋鸡的生殖细胞得以充分利用,为退化卵泡对蛋鸡产蛋性能调节作用提供理论依据。1.凋亡与自噬活动参与蛋鸡POF的退化哺乳动物成熟卵泡排卵后形成黄体,通过分泌高水平的孕酮(progesterone,P4)来调节子宫内膜的发育、胚胎附植以及早期胚胎的发育。然而,鸟类的卵泡排卵后不形成黄体,仅作为POF而逐渐退化。目前,POF的功能和退化...
【文章页数】：134 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
第一节 家禽卵泡发育的基本过程
1.1 家禽卵巢发育过程
1.2 家禽卵泡的形成
第二节 家禽的退化卵泡
2.1 排卵后卵泡(POF)
2.1.1 POF的形成与退化
2.1.2 POF功能的概况
2.2 POF/黄体的比较生理学
2.2.1 鱼类的POF
2.2.2 两栖类的POF
2.2.3 爬行类的POF
2.2.4 哺乳动物黄体的形成
2.2.5 哺乳动物黄体的退化机制
2.2.6 哺乳动物黄体的功能
2.3 闭锁卵泡
2.3.1 闭锁卵泡的形成及机理
2.3.2 颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要原因
2.3.3 自噬与卵泡闭锁
2.3.4 坏死与卵泡闭锁
第三节 调节家禽卵泡生长发育和闭锁的因素
3.1 胰岛素样生长因子
3.2 表皮生长因子
3.3 转化生长因子β超家族
3.3.1 TGFβ家族
3.3.2 抑制素/激活素家族
3.3.3 BMP家族
3.4 成纤维细胞生长因子家族
3.4.1 FGF1
3.4.2 FGF2/bFGF
3.4.3 FGF7
3.4.4 FGF8
3.4.5 FGF9
3.4.6 FGF10
3.5 其它调节家禽卵泡生长发育和闭锁的因素
第四节 本研究的目的和内容
4.1 研究的目的和意义
4.2 研究的目标和内容
4.3 技术路线
第二章 凋亡与自噬活动参与蛋鸡POF的退化
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 主要器材
2.2.3 主要试剂及配制
2.2.4 组织采集
2.2.5 石蜡切片制作和HE形态学观察
2.2.6 冰冻切片制作
2.2.7 免疫荧光染色
2.2.8 油红O染色
2.2.9 TUNEL检测
2.2.10 透射电镜和细胞超微结构观察
2.2.11 P4水平测定
2.2.12 RNA提取
2.2.13 cDNA合成
2.2.14 RT-PCR和qRT-PCR
2.2.15 WB分析
2.2.16 数据统计分析
2.3 结果
2.3.1 POF的形态学观察
2.3.2 POF颗粒层的鉴定
2.3.3 POF6的空泡样细胞是由脂肪样变性导致
2.3.4 POF的脂肪样变性开始于POF3
2.3.5 POF退化过程中P4合成关键酶在mRNA的表达水平变化
2.3.6 POF退化过程中CYP11A1的表达水平变化
2.3.7 POF退化过程中P4分泌水平变化
2.3.8 POF退化过程中caspase-3表达量的变化
2.3.9 POF退化过程中颗粒层的退化速度慢于膜层的退化速度
2.3.10 GRP78和BCL2主要表达于POF的颗粒细胞之上
2.3.11 POF颗粒细胞退化过程中内质网和线粒体发生不同程度的退行性变化
2.3.12 POF3经历最大程度的内质网应激和线粒体凋亡
2.3.13 POF膜层的退化可能与Beclin1介导的自噬有关
2.4 讨论
第三章 POF通过PGE2-EP2信号促进蛋鸡等级前卵泡生长
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 主要器材
3.2.3 主要试剂及配制
3.2.4 POF的培养
3.2.5 POF与SWF共培养
3.2.6 POF颗粒细胞的分离培养
3.2.7 POF的颗粒细胞与SWF共培养
3.2.8 SWF的培养与药物的处理
3.2.9 石蜡切片制作和HE形态学观察
3.2.10 免疫组织化学染色
3.2.11 BrdU的染色方法
3.2.12 RNA提取、cDNA合成及RT-PCR和qRT-PCR
3.2.13 WB分析
3.2.14 ELISA的方法检测PGE2和PGF2α水平
3.2.15 数据分析
3.3 结果
3.3.1 POF体外培养模型的建立
3.3.2 POF1促进SWF外膜层的增殖
3.3.3 POF颗粒细胞的分离与鉴定
3.3.4 POF1颗粒细胞能促进SWF外膜层增殖
3.3.5 POF具有分泌前列腺素的能力
3.3.6 PGE2能促进SWF外膜层的增殖
3.3.7 POF1通过分泌PGE2促进SWF外膜层的增殖
3.3.8 POF通过PGE2-EP2信号促进SWF外膜层的增殖
3.4 讨论
第四章 蛋鸡等级前卵泡生长发育和闭锁相关基因的初筛
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 主要器材
4.2.3 主要试剂及配制
4.2.4 组织采集
4.2.5 石蜡切片制作和形态学观察
4.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR
4.2.7 数据分析
4.3 结果
4.3.1 等级前卵泡与闭锁的等级前卵泡形态学观察
4.3.2 SYF与ASYF凋亡和抗凋亡基因表达的变化
4.3.3 SYF与ASYF紧密连接相关基因表达的变化
4.3.4 SYF与ASYF类固醇激素和前列腺素合成酶相关基因表达的变化
4.3.5 SYF与ASYF激素受体相关基因表达的变化
4.3.6 SYF与ASYF细胞因子受体相关基因表达的变化
4.3.7 SWF与SYF细胞因子受体相关基因表达的变化
4.4 讨论
第五章 bFGF促进蛋鸡等级前卵泡生长发育与卵黄沉积机制的研究
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验动物
5.2.2 主要器材
5.2.3 主要试剂及配制
5.2.4 SWF的培养与药物的处理
5.2.5 石蜡切片制作和免疫荧光染色
5.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR
5.2.7 BrdU掺入及检测
5.2.8 WB分析
5.2.9 数据分析
5.3 结果
5.3.1 VLDLR在蛋鸡等级前卵泡与等级卵泡中表达的变化
5.3.2 bFGF通过FGFR1-AKT信号促进SWF外膜层增殖
5.3.3 bFGF通过促进卵泡膜层的血管生成调节等级前卵泡卵黄沉积
5.3.4 bFGF通过抑制卵泡颗粒层VLDLR的表达调节等级前卵泡卵黄沉积
5.4 讨论
第六章 提示和创新点
参考文献
致谢
个人简介
本文编号：3836302
【文章页数】：134 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
缩略词表
第一章 文献综述
第一节 家禽卵泡发育的基本过程
1.1 家禽卵巢发育过程
1.2 家禽卵泡的形成
第二节 家禽的退化卵泡
2.1 排卵后卵泡(POF)
2.1.1 POF的形成与退化
2.1.2 POF功能的概况
2.2 POF/黄体的比较生理学
2.2.1 鱼类的POF
2.2.2 两栖类的POF
2.2.3 爬行类的POF
2.2.4 哺乳动物黄体的形成
2.2.5 哺乳动物黄体的退化机制
2.2.6 哺乳动物黄体的功能
2.3 闭锁卵泡
2.3.1 闭锁卵泡的形成及机理
2.3.2 颗粒细胞凋亡是卵泡闭锁的主要原因
2.3.3 自噬与卵泡闭锁
2.3.4 坏死与卵泡闭锁
第三节 调节家禽卵泡生长发育和闭锁的因素
3.1 胰岛素样生长因子
3.2 表皮生长因子
3.3 转化生长因子β超家族
3.3.1 TGFβ家族
3.3.2 抑制素/激活素家族
3.3.3 BMP家族
3.4 成纤维细胞生长因子家族
3.4.1 FGF1
3.4.2 FGF2/bFGF
3.4.3 FGF7
3.4.4 FGF8
3.4.5 FGF9
3.4.6 FGF10
3.5 其它调节家禽卵泡生长发育和闭锁的因素
第四节 本研究的目的和内容
4.1 研究的目的和意义
4.2 研究的目标和内容
4.3 技术路线
第二章 凋亡与自噬活动参与蛋鸡POF的退化
2.1 引言
2.2 材料与方法
2.2.1 实验动物
2.2.2 主要器材
2.2.3 主要试剂及配制
2.2.4 组织采集
2.2.5 石蜡切片制作和HE形态学观察
2.2.6 冰冻切片制作
2.2.7 免疫荧光染色
2.2.8 油红O染色
2.2.9 TUNEL检测
2.2.10 透射电镜和细胞超微结构观察
2.2.11 P4水平测定
2.2.12 RNA提取
2.2.13 cDNA合成
2.2.14 RT-PCR和qRT-PCR
2.2.15 WB分析
2.2.16 数据统计分析
2.3 结果
2.3.1 POF的形态学观察
2.3.2 POF颗粒层的鉴定
2.3.3 POF6的空泡样细胞是由脂肪样变性导致
2.3.4 POF的脂肪样变性开始于POF3
2.3.5 POF退化过程中P4合成关键酶在mRNA的表达水平变化
2.3.6 POF退化过程中CYP11A1的表达水平变化
2.3.7 POF退化过程中P4分泌水平变化
2.3.8 POF退化过程中caspase-3表达量的变化
2.3.9 POF退化过程中颗粒层的退化速度慢于膜层的退化速度
2.3.10 GRP78和BCL2主要表达于POF的颗粒细胞之上
2.3.11 POF颗粒细胞退化过程中内质网和线粒体发生不同程度的退行性变化
2.3.12 POF3经历最大程度的内质网应激和线粒体凋亡
2.3.13 POF膜层的退化可能与Beclin1介导的自噬有关
2.4 讨论
第三章 POF通过PGE2-EP2信号促进蛋鸡等级前卵泡生长
3.1 引言
3.2 材料与方法
3.2.1 实验动物
3.2.2 主要器材
3.2.3 主要试剂及配制
3.2.4 POF的培养
3.2.5 POF与SWF共培养
3.2.6 POF颗粒细胞的分离培养
3.2.7 POF的颗粒细胞与SWF共培养
3.2.8 SWF的培养与药物的处理
3.2.9 石蜡切片制作和HE形态学观察
3.2.10 免疫组织化学染色
3.2.11 BrdU的染色方法
3.2.12 RNA提取、cDNA合成及RT-PCR和qRT-PCR
3.2.13 WB分析
3.2.14 ELISA的方法检测PGE2和PGF2α水平
3.2.15 数据分析
3.3 结果
3.3.1 POF体外培养模型的建立
3.3.2 POF1促进SWF外膜层的增殖
3.3.3 POF颗粒细胞的分离与鉴定
3.3.4 POF1颗粒细胞能促进SWF外膜层增殖
3.3.5 POF具有分泌前列腺素的能力
3.3.6 PGE2能促进SWF外膜层的增殖
3.3.7 POF1通过分泌PGE2促进SWF外膜层的增殖
3.3.8 POF通过PGE2-EP2信号促进SWF外膜层的增殖
3.4 讨论
第四章 蛋鸡等级前卵泡生长发育和闭锁相关基因的初筛
4.1 前言
4.2 材料与方法
4.2.1 实验动物
4.2.2 主要器材
4.2.3 主要试剂及配制
4.2.4 组织采集
4.2.5 石蜡切片制作和形态学观察
4.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR
4.2.7 数据分析
4.3 结果
4.3.1 等级前卵泡与闭锁的等级前卵泡形态学观察
4.3.2 SYF与ASYF凋亡和抗凋亡基因表达的变化
4.3.3 SYF与ASYF紧密连接相关基因表达的变化
4.3.4 SYF与ASYF类固醇激素和前列腺素合成酶相关基因表达的变化
4.3.5 SYF与ASYF激素受体相关基因表达的变化
4.3.6 SYF与ASYF细胞因子受体相关基因表达的变化
4.3.7 SWF与SYF细胞因子受体相关基因表达的变化
4.4 讨论
第五章 bFGF促进蛋鸡等级前卵泡生长发育与卵黄沉积机制的研究
5.1 前言
5.2 材料与方法
5.2.1 实验动物
5.2.2 主要器材
5.2.3 主要试剂及配制
5.2.4 SWF的培养与药物的处理
5.2.5 石蜡切片制作和免疫荧光染色
5.2.6 RNA提取、cDNA合成及qRT-PCR
5.2.7 BrdU掺入及检测
5.2.8 WB分析
5.2.9 数据分析
5.3 结果
5.3.1 VLDLR在蛋鸡等级前卵泡与等级卵泡中表达的变化
5.3.2 bFGF通过FGFR1-AKT信号促进SWF外膜层增殖
5.3.3 bFGF通过促进卵泡膜层的血管生成调节等级前卵泡卵黄沉积
5.3.4 bFGF通过抑制卵泡颗粒层VLDLR的表达调节等级前卵泡卵黄沉积
5.4 讨论
第六章 提示和创新点
参考文献
致谢
个人简介
本文编号：3836302
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/nykjbs/3836302.html
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