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口腔白斑及鳞癌中PCNA、p27、PTEN基因的表达

发布时间：2014-09-23 20:34

【摘要】 （一）中文摘要【目的】通过免疫组化二步法研究PCNA、p27、PTEN蛋白在人口腔正常黏膜、白斑、鳞状细胞癌及大鼠口腔正常黏膜、增生组织、鳞状细胞癌中的表达变化，探讨PCNA、p27、PTEN蛋白在口腔正常黏膜、癌前病变、鳞状细胞癌发生发展过程中的作用并将其表达情况与大鼠癌变模型中PCNA、p27蛋白的表达情况比较，为临床上检测口腔白斑癌变提供分子学上的依据，为抑癌药物在临床中的应用，提供参考。【方法】1.采用免疫组化二步法检测10例正常口腔黏膜、15例单纯增生白斑、10例不典型增生白斑、20例鳞癌中PCNA、p27、PTEN蛋白表达情况并通过统计软件对实验结果进行统计学分析。2.采用免疫组化二步法检测大鼠癌变模型中10例大鼠正常口腔黏膜、10例单纯增生黏膜、15例异常增生黏膜、15例鳞癌中PCNA、p27蛋白的表达情况,并通过统计软件对实验结果进行统计学分析。【结果】1.PCNA蛋白在人口腔正常黏膜、单纯增生白斑、不典型增生白斑及鳞状细胞癌中的表达量逐渐增加，经统计学分析，口腔正常粘膜及单纯增生白斑、不典型增生白斑、鳞状细胞癌组织中PCNA蛋白表达差异具有统计学意义（P<0.05）。2.p27、PTEN蛋白在人口腔正常黏膜、单纯增生白斑、不典型增生白斑及鳞状细胞癌中表达量逐渐降低。经统计学分析，口腔正常粘膜及单纯增生白斑、不典型增生白斑、鳞状细胞癌组织中p27、PTEN蛋白表达差异具有统计学意义（P<0.05）。3.PCNA、p27、PTEN蛋白表达的相关性：利用Spearman统计方法分析，人不典型增生白斑、鳞状细胞癌中PCNA蛋白与p27蛋白、PTEN蛋白的表达呈负相关，PTEN蛋白的表达与p27蛋白表达呈正相关。4.大鼠口腔正常粘膜、单纯增生组织、异型增生组织至鳞状细胞癌的病变过程中，PCNA蛋白表达量逐渐增加，经统计学分析，差异具有统计学意义；p27蛋白表达量逐渐降低，差异具有统计学意义；利用Spearman统计方法分析，在异常增生组织中PCNA蛋白表达与p27蛋白表达呈负相关，在鳞状细胞癌组织中PCNA蛋白表达与p27蛋白表达呈负相关。【结论】1.从口腔单纯增生白斑到口腔鳞状细胞癌的癌变过程中PCNA蛋白表达呈上升趋势，而p27和PTEN蛋白表达则呈下降趋势，说明在口腔癌前病变至口腔癌的发展过程中PCNA蛋白正调节功能亢进，加速了细胞的增殖；而p27、PTEN蛋白的负调节功能受抑制或缺失，不能有效抑制细胞的增殖，促进肿瘤的发生。2.PCNA、p27蛋白在人口腔正常黏膜、不典型增生白斑及鳞状细胞癌中的表达与大鼠癌变模型中这两个蛋白的表达情况相似，说明人和动物在致癌机理上有着相似之处，为今后药物抑癌抗癌研究提供实验依据。3.PCNA、p27蛋白较为准确的反应口腔癌变过程中组织学上的变化，可考虑作为临床检测口腔癌前病变的“标志分子”，为临床上靶向分子治疗提供依据。 

【关键词】 口腔白斑； 口腔癌； 免疫组化； PCNA； p27； PTEN； 

前言

近年来我国口腔黏膜病科的就诊疾病谱发生了明显的改变，口腔癌前病变及癌前状态所占病例相比以往有了较大幅度增加。根据 WHO 定义，口腔癌前病变是指一种已有形态学上改变的组织，它较其外观相对正常的组织具有更大的发癌可能，癌前病变疾病包括口腔白斑、红斑等；而癌前状态是指一种显著增加发癌危险的一般状态[1]，包括口腔扁平苔藓、口腔黏膜下纤维性变、盘状红斑狼疮、上皮过角化、先天性角化不良及梅毒、着色性干皮病。关于白斑的癌变率，相关文献的报道不等，最高者甚至达到 50%以上，但一般都认为在 5%以上；临床上的研究发现，10%～20%的上皮异型增生白斑会发展为口腔癌，20%～30%发展成上皮重度异型增生，而这些伴重度异型增生的白斑 43%会发展成口腔癌。而红斑的癌变率则会更高，临床上发现，80%的红斑病例病理切片为侵润癌或原位癌。在口腔癌前状态中糜烂型及萎缩型扁平苔藓癌变率较高，有报道达 10%。口腔癌前损害具有较高的癌变率，国内外的研究发现 90%以上的口腔鳞状细胞癌是由口腔癌前损害发展而来。因此，提高口腔癌前损害的诊疗水平具有重要意义，研究口腔白斑及口腔扁平苔藓的发病机制也成为欧美国家口腔医学界的重点之一。
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二、材料与方法

（一）实验材料
1.病例选择
1.1 人实验标本选择
1.1.1 标原来自 2010-2012 年厦门市口腔医院粘膜科就诊白斑及鳞癌患者，均为初诊病人，无体系疾病及其他免疫性疾病，未担当过免疫和体系治疗。选择 15例单纯增生白斑、10 例不典范增生白斑、20 例鳞状细胞癌，别的选择 10 例口腔正常粘膜作为比较组。上述取材均得到福建医科大学伦理委员会答应和研究工具同意。
1.1.2 标本的采集：切取适当大小的病变处粘膜组织块，组织经 10%福尔马林液固定，常规石蜡包埋连续切片 5μm 厚，根据临床表现结合 HE 染色，确诊为口腔白斑及口腔鳞状细胞癌，白斑诊断标准参照口腔黏膜病学第三版[13]，鳞状细胞癌诊断标准参照口腔颌面外科第二版[1]；对标本进行分级诊断确定组织学类型，所有诊断均采用双盲法，未作染色的组织用于免疫组化。
1.2 动物实验标本选择
1.2.1 选择 09 年大鼠癌变模子白腊包埋构造，包罗 15 例大鼠口腔鳞状细胞癌构造，15 例大鼠口腔异型增生构造，大鼠口腔正常黏膜构造及单纯增生粘膜各 10例。
1.2.2 标本收罗：通例白腊包埋一连切片 5μm 厚，HE 染色确诊为口腔白斑单纯、异型增生及口腔鳞状细胞癌，凭据 WHO 口腔癌前病变协作中央 12 项诊断尺度（1978）[14]对标本举行分级诊断确定构造学范例，全部诊断均接纳双盲法。未作染色的构造用于免疫组化。
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（二）实验方法
2.1 组织病理学诊断-HE 染色
白腊构造块一连切 5μm 厚度，摊片至载玻片→将构造切片放入 55℃烤箱烘烤40 分钟（时间凭据切片的干燥水平决定）→将烤干后的切片浸入二甲苯第一缸、第二缸中各脱蜡 15 分钟→浸入无水酒精第一缸、第二缸各 5 分钟→95%酒精第一缸、第二缸各 5 分钟→80%酒精 5 分钟脱水→将切片从 80%酒精取出后放入蒸馏水中水化→切片浸入苏木素染色液中染色 10 分钟→0.5%盐酸酒精分解 10-20秒→稀氨水（1%）返蓝数秒→自来水冲洗一小时后放入蒸馏水半晌→入 70%和90%酒精中脱水各 10 分钟→切片浸入 0.5%伊红染色 2 分钟→切片浸入 85%酒精5 分钟→95%酒精第一、第二缸各 5 分钟→100%酒精第一、第二缸各 5 分钟→二甲苯第一、第二缸各 15 分钟→在干燥情况中，中性树胶封片。
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三、实验结果 ....................16-44 
（一）人实验结果 .....................16-34 
（二）大鼠实验结果 ....................34-44 

讨论

（一）口腔黏膜中 PCNA、p27、PTEN 表达意义
1、 口腔黏膜癌变过程中 PCNA、p27 及 PTEN 蛋白表达特点及其意义：
 PCNA 卵白是 DNA 多聚酶 δ 帮助卵白，与 DNA 复制和细胞增殖亲昵相干[15]，其通过调治 DNA 聚合酶的活性，在合成 DNA 时促使 DNA 链延伸，对 DNA 的合成有催化作用。PCNA 卵白遍及存在于多种泉源的种种增生细胞中，一样通常在增殖细胞中表达，而在静止细胞中缺乏[16]，不停以来是评价细胞增殖状态的可靠标记物。PCNA 卵白量的变革反应了细胞的增殖状态变革，在正常环境下，机体细胞增殖和凋亡连结肯定的均衡，PCNA 卵白的表达量也相对恒定。然而，当机体受到外界物理、化学或其他因素的连续刺激，PCNA 基因产生缺失或突变，或生长因子非常表达导致 PCNA 基因转化，PCNA 的 mRNA 程度非常增高，PCNA卵白就会出现相较于正常构造细胞中不可比例的增高。而本实行效果恰恰验证这一点，本文研究效果表现：PCNA 卵白在生齿腔正常粘膜及单纯增生白斑中均表达阳性；上皮细胞阳性率均匀为 37.9%，在口腔不典范增生白斑中 PCNA 卵白表达量增长，异型细胞的阳性率均匀达 61.9%；而在鳞状细胞癌中 PCNA 卵白的表达增长更明显，癌细胞阳性率均匀达 80.5%，PCNA 卵白在鳞状细胞癌细胞中遍及表达。PCNA 卵白的表达在正常口腔黏膜、口腔单纯白斑，不典范增生白斑，鳞状细胞癌中随病变程度加重，阳性表达呈递增趋向，且差别有统计学意义(P<0.01)，这一效果评释：随着病变加重，细胞增殖活泼，PCNA 卵白表达上调明显，而且很多研究证明，PCNA 卵白的表达能反应肿瘤的恶性程度。
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结论

本文采用了免疫组化二步法检测了 10 例正常口腔黏膜、15 例单纯增生白斑、10 例不典型增生白斑、20 例口腔鳞状细胞癌组织中 PCNA、p27 蛋白、PTEN 蛋白的表达，并检测大鼠癌变模型中 10 例正常口腔黏膜、10 例单纯增生粘膜、15例不典型增生粘膜、15 例口腔鳞状细胞癌中 PCNA 蛋白、p27 蛋白的表达情况，实验结果表明：
1.从口腔癌前病变到口腔鳞状细胞癌组织，PCNA 蛋白的表达呈逐渐上升趋势，且经统计学分析发现单纯增生白斑、口腔白斑不典型增生、口腔鳞癌中蛋白表达量增加差异具有统计学意义，说明在口腔粘膜癌变过程中 PCNA 蛋白对细胞增殖的正调节功能亢进，从而加速了细胞增殖，最后导致细胞无限增殖，肿瘤发生。而在口腔单纯增生白斑、口腔白斑不典型增生、口腔鳞癌组织中 p27、PTEN 蛋白表达则呈逐渐下降趋势，统计学分析三者差异具有统计学意义，说明在口腔癌前病变至口腔癌的发生过程中 p27 蛋白、PTEN 蛋白对细胞增殖的负调节功能受到抑制或失去代偿，不能有效的抑制细胞的增殖，因而促使了癌前病变向癌的转变和发展。
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参考文献:


本文编号：9172

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