microRNAs调控运动性心脏肥大相关信号通路的研究
发布时间：2020-12-21 13:38
运动性心脏肥大是运动员心脏的主要形态变化,左右心室均可发生肥大,但通常以左心室的肥大为主,其肥大程度与运动方式、强度和持续时间有关。运动员心脏的机能改变通常表现为：静息心动徐缓、每搏输出量增加、心力储备增大。运动性心脏肥大组织结构的重塑主要表现为心肌纤维增粗肥大,心脏毛细血管新生,这构成了运动性心脏收缩性和有氧代谢功能的增强。运动性心脏超微结构的重塑主要表现为心肌细胞内高尔基复合体及其功能结构增多,粗面内质网增多,心房特殊颗粒增多且功能活性增强,线粒体及其功能结构多,肌原纤维增多,肌质网和横管系统发达,核糖体和糖原增多。超微结构的重塑性改变构成了运动性心脏内分泌功能变化,心肌有氧氧化和能量产生增多,心肌收缩能力增强,心力储备增强的结构基础。但是运动性心脏肥大究竟如何形成,其发生的分子信号机制和调节机制是什么,相关信号通路中各信号分子的表达究竟如何变化,目前尚有待研究。miRNA是一种内源性、单链、由18-25个单核苷酸组成的非编码小RNA。专家预测在人类基因组中,miRNA基因不少于1000条,同时miRNA能够对超过三分之一的人类蛋白编码基因的表达进行调控。miRNA与多种疾病及发育...
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
符号说明
前言综述
1. 运动性心脏肥大的运动生理学研究进展
1.1 运动引起心脏左室肥大的生理学研究进展
1.1.1 向心性心脏肥大
1.1.2 离心性心脏肥大
1.1.3 肥大心脏的功能变化
1.2 运动引起心脏右室肥大的生理学研究进展
1.3 运动引起左心房肥大的生理学研究进展
2. 心脏肥大机制的究进展
2.1 内分泌激素在心脏肥大中作用的研究进展
2.1.1 肾素-血管紧张素系统对心脏肥大的调节作用
2.1.2 儿茶酚胺对心脏肥大的调节作用
2.1.3 心钠素对心脏肥大的调节作用
2.1.4 心肌内皮素对心脏肥大的调节作用
2.1.5 胰岛素样生长因子对心脏肥大的调节作用
2.1.6 血管内皮生长因子对心脏肥大的调节作用
2.2 G蛋白偶联受体在心脏肥大中作用的研究进展
2.3 心脏肥大相关信号通路的研究进展
2.3.1 ERK信号通路在运动性心脏肥大中的作用
2.3.2 PI3K/AKT/mTOR信号通路在运动性心脏肥大中的作用
3. miRNA参与心脏肥大调节的研究进展
4. 心脏肥大大鼠模型
5. 展望
实验部分
1. 引言
2. 材料与方法
2.1 试剂与仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 动物饲养与分组
2.3 运动训练方案
2.4 体重测定
2.5 血压和心率测定
2.6 样本采集
2.7 苏木素伊红染色（HE染色）
2.7.1 苏木素染液配制
2.7.2 伊红染液配制
2.7.3 冰冻切片机切片
2.7.4 HE染色步骤
2.8 心肌组织HE染色图片镜下观察及图像分析
2.9 心肌组织总RNA的提取
2.9.1 准备工作
2.9.2 提取总RNA
2.9.3 RNA质量和浓度检测
2.10 miRNA芯片
2.10.1 RNA标记
2.10.2 芯片杂交
2.10.3 芯片结果分析
2.11 使用microRNA TaqMan Assay试剂盒检测miRNA的表达量
2.11.1 miRNA反转录
2.11.2 miRNA实时荧光定量PCR
2.12 实时荧光定量PCR测定目的基因mRNA的表达量
2.12.1 引物设计
2.12.2 实时荧光定量反应体系
2.12.3 实时荧光定量反应条件
2.12.4 引物扩增效率的计算
2.12.5 实时荧光定量结果的计算
2.13 蛋白印迹法检测
2.13.1 提取心室组织蛋白
2.13.2 考马斯亮蓝法检测蛋白含量
2.13.3 制胶
2.13.4 电泳
2.13.5 转膜
2.13.6 免疫杂交与显色
2.14 统计与分析
3. 结果
3.1 大鼠体重变化
3.2 8周游泳运动对大鼠血压和心率的影响
3.3 提取总RNA的纯度与完整性
3.4 引物扩增效率的检测
3.5 荧光定量PCR的溶解曲线
3.6 8周游泳运动后大鼠心脏肥大的评价
3.7 8周游泳运动对大鼠心肌病理性标志物mRNA表达的影响
3.8 生物芯片分析microRNA表达
3.9 介导运动性心脏肥大的信号通路相关蛋白的表达
Thr202/Tyr204-ERK1/2的蛋白表达量"> 3.9.1 EKR和phosphoThr202/Tyr204-ERK1/2的蛋白表达量
Ser473-AKT的蛋白表达量"> 3.9.2 AKT1和phosphoSer473-AKT的蛋白表达量
Ser2448-mTOR的蛋白表达量"> 3.9.3 mTOR和phosphoSer2448-mTOR的蛋白表达量
3.10 miRNA靶点及表达分析
3.10.1 miRNA靶点的生物信息学预测
3.10.2 miRNA表达的芯片分析
3.10.3 miRNA表达的实时荧光定量PCR分析
3.11 miRNA靶点的表达分析
3.11.1 PI3K（p110α）的表达
3.11.2 PTEN的表达
3.11.3 TSC2的表达
4. 讨论
5. 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]运动性心脏重塑过程中胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因的表达[J]. 祁永梅,常芸. 中国运动医学杂志. 2002(06)
[2]运动与心脏的重塑[J]. 张平. 中国运动医学杂志. 2000(01)
[3]三种训练对大鼠循环系统内分泌的影响[J]. 洪长青,邓树勋. 中国运动医学杂志. 2000(01)
[4]运动性和高血压性肥大心脏心肌内皮素及其基因表达的研究[J]. 李昭波,高云秋,李维根,杨萍,唐朝枢. 中国运动医学杂志. 2000(01)
[5]运动心脏结构可复性的研究[J]. 常芸,林福美,陈小同,罗安明. 中国运动医学杂志. 1999(03)
[6]不同运动强度对心肌 β 肾上腺素受体密度的影响[J]. 侯香玉,张宝慧,高云秋,谢振华,唐朝枢. 中国运动医学杂志. 1997(02)
[7]心脏肾素－血管紧张素系统在游泳引起的生理性心肌肥大中的作用[J]. 田斌,高广道,刘健,曹治平,卢兴. 生理学报. 1994(05)
[8]耐力训练与心脏内分泌研究之二——不同强度、不同量耐力训练后大鼠心房超微结构的改变[J]. 常芸,林福美. 中国运动医学杂志. 1993(02)
[9]游泳训练对大鼠心肌α1肾上腺素受体及其亚型的影响[J]. 侯香玉,高云秋,韩启德. 中国运动医学杂志. 1992(02)
本文编号：2929919
【文章来源】：扬州大学江苏省
【文章页数】：96 页
【学位级别】：博士
【文章目录】：
摘要
ABSTRACT
目录
符号说明
前言综述
1. 运动性心脏肥大的运动生理学研究进展
1.1 运动引起心脏左室肥大的生理学研究进展
1.1.1 向心性心脏肥大
1.1.2 离心性心脏肥大
1.1.3 肥大心脏的功能变化
1.2 运动引起心脏右室肥大的生理学研究进展
1.3 运动引起左心房肥大的生理学研究进展
2. 心脏肥大机制的究进展
2.1 内分泌激素在心脏肥大中作用的研究进展
2.1.1 肾素-血管紧张素系统对心脏肥大的调节作用
2.1.2 儿茶酚胺对心脏肥大的调节作用
2.1.3 心钠素对心脏肥大的调节作用
2.1.4 心肌内皮素对心脏肥大的调节作用
2.1.5 胰岛素样生长因子对心脏肥大的调节作用
2.1.6 血管内皮生长因子对心脏肥大的调节作用
2.2 G蛋白偶联受体在心脏肥大中作用的研究进展
2.3 心脏肥大相关信号通路的研究进展
2.3.1 ERK信号通路在运动性心脏肥大中的作用
2.3.2 PI3K/AKT/mTOR信号通路在运动性心脏肥大中的作用
3. miRNA参与心脏肥大调节的研究进展
4. 心脏肥大大鼠模型
5. 展望
实验部分
1. 引言
2. 材料与方法
2.1 试剂与仪器
2.1.1 主要试剂
2.1.3 主要仪器
2.2 动物饲养与分组
2.3 运动训练方案
2.4 体重测定
2.5 血压和心率测定
2.6 样本采集
2.7 苏木素伊红染色（HE染色）
2.7.1 苏木素染液配制
2.7.2 伊红染液配制
2.7.3 冰冻切片机切片
2.7.4 HE染色步骤
2.8 心肌组织HE染色图片镜下观察及图像分析
2.9 心肌组织总RNA的提取
2.9.1 准备工作
2.9.2 提取总RNA
2.9.3 RNA质量和浓度检测
2.10 miRNA芯片
2.10.1 RNA标记
2.10.2 芯片杂交
2.10.3 芯片结果分析
2.11 使用microRNA TaqMan Assay试剂盒检测miRNA的表达量
2.11.1 miRNA反转录
2.11.2 miRNA实时荧光定量PCR
2.12 实时荧光定量PCR测定目的基因mRNA的表达量
2.12.1 引物设计
2.12.2 实时荧光定量反应体系
2.12.3 实时荧光定量反应条件
2.12.4 引物扩增效率的计算
2.12.5 实时荧光定量结果的计算
2.13 蛋白印迹法检测
2.13.1 提取心室组织蛋白
2.13.2 考马斯亮蓝法检测蛋白含量
2.13.3 制胶
2.13.4 电泳
2.13.5 转膜
2.13.6 免疫杂交与显色
2.14 统计与分析
3. 结果
3.1 大鼠体重变化
3.2 8周游泳运动对大鼠血压和心率的影响
3.3 提取总RNA的纯度与完整性
3.4 引物扩增效率的检测
3.5 荧光定量PCR的溶解曲线
3.6 8周游泳运动后大鼠心脏肥大的评价
3.7 8周游泳运动对大鼠心肌病理性标志物mRNA表达的影响
3.8 生物芯片分析microRNA表达
3.9 介导运动性心脏肥大的信号通路相关蛋白的表达
Thr202/Tyr204-ERK1/2的蛋白表达量"> 3.9.1 EKR和phosphoThr202/Tyr204-ERK1/2的蛋白表达量
Ser473-AKT的蛋白表达量"> 3.9.2 AKT1和phosphoSer473-AKT的蛋白表达量
Ser2448-mTOR的蛋白表达量"> 3.9.3 mTOR和phosphoSer2448-mTOR的蛋白表达量
3.10 miRNA靶点及表达分析
3.10.1 miRNA靶点的生物信息学预测
3.10.2 miRNA表达的芯片分析
3.10.3 miRNA表达的实时荧光定量PCR分析
3.11 miRNA靶点的表达分析
3.11.1 PI3K（p110α）的表达
3.11.2 PTEN的表达
3.11.3 TSC2的表达
4. 讨论
5. 结论
参考文献
致谢
攻读学位期间发表的学术论文
【参考文献】：
期刊论文
[1]运动性心脏重塑过程中胰岛素样生长因子IGF-Ⅰ基因的表达[J]. 祁永梅,常芸. 中国运动医学杂志. 2002(06)
[2]运动与心脏的重塑[J]. 张平. 中国运动医学杂志. 2000(01)
[3]三种训练对大鼠循环系统内分泌的影响[J]. 洪长青,邓树勋. 中国运动医学杂志. 2000(01)
[4]运动性和高血压性肥大心脏心肌内皮素及其基因表达的研究[J]. 李昭波,高云秋,李维根,杨萍,唐朝枢. 中国运动医学杂志. 2000(01)
[5]运动心脏结构可复性的研究[J]. 常芸,林福美,陈小同,罗安明. 中国运动医学杂志. 1999(03)
[6]不同运动强度对心肌 β 肾上腺素受体密度的影响[J]. 侯香玉,张宝慧,高云秋,谢振华,唐朝枢. 中国运动医学杂志. 1997(02)
[7]心脏肾素－血管紧张素系统在游泳引起的生理性心肌肥大中的作用[J]. 田斌,高广道,刘健,曹治平,卢兴. 生理学报. 1994(05)
[8]耐力训练与心脏内分泌研究之二——不同强度、不同量耐力训练后大鼠心房超微结构的改变[J]. 常芸,林福美. 中国运动医学杂志. 1993(02)
[9]游泳训练对大鼠心肌α1肾上腺素受体及其亚型的影响[J]. 侯香玉,高云秋,韩启德. 中国运动医学杂志. 1992(02)
本文编号：2929919
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