miR-9-3p与miR-146a-5p在2型糖尿病患者血浆中表达分析及功能研究

发布时间：2017-10-10 17:15

  本文关键词：miR-9-3p与miR-146a-5p在2型糖尿病患者血浆中表达分析及功能研究

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【摘要】：糖尿病(Diabetes Mellitus, DM)是由于体内胰岛素绝对不足或相对不足所引起的以糖、脂代谢紊乱为主要特征的内分泌代谢性疾病,严重影响患者的生活质量。随着社会经济的快速发展,居民体力活动的下降和生活水平的不断提高,糖尿病的患病率逐年升高。据2003年世界卫生组织统计,全球现有超过2亿的糖尿病患者,到2025年预计这一数字将增长一倍。目前糖尿病分型包括1型糖尿病,2型糖尿病(Type 2 Diabetes Mellitus, T2DM),妊娠期糖尿病以及其他特殊类型的糖尿病,其中T2DM患者占糖尿病患者总数的90%-95%。目前研究认为T2DM是一种慢性低度炎症反应(Chronic low-grade i nflammatory disease),大量研究显示,T2DM患者血液中常伴有脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)、C反应蛋白(C-Reactive Protein, CRP)、肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor-α, TNF-α)、白介素-6 (Interleuk in-6, IL-6)等炎性因子水平升高。炎性因子及其效应分子共同产生的细胞毒作用,通过氧化应激反应,激活核因子-1:B (nuclear factor-KB, NF-κB)、蛋白激酶C(protein kinase C, PKC)、丝裂原活化蛋白激酶(Mitoge n-Activated Protein Kinase)、抑制物激酶(Inhibitor of nuclear fa ctor Kappa-B Kinase, IKK)等炎性反应系统,不仅损伤胰岛细胞线粒体,加速胰岛p细胞的凋亡,导致胰岛素分泌不足,还可引起内皮细胞结构和功能的异常,导致胰岛素在组织细胞中转运障碍从而促进胰岛素抵抗的发生。流行病学研究认为,T2DM患者存在独特的血脂情况：甘油三酯(Triglyceride, TG)与低密度脂蛋白胆固醇(Low-Density Lipoprotein Cholesterol, LDL-C)水平的升高、高密度脂蛋白胆固醇(High-Density Lipoprotein Cholesterol, HDL-C)水平的降低,研究认为,形成这种血脂状态的主要原因是由于细胞胆固醇转运受体功能异常。尽管T2DM患者常伴慢性低度炎症反应与脂代谢的紊乱,但慢性炎症反应对细胞胆固醇逆转运调节因子的影响却鲜有研究。小分子核糖核酸(nicroRNA, miRNA)是一类长度约为20-24个核苷骏长度的非编码单链小RNA分子,通过碱基互补配对原则与靶向mRNA阳结合,形成沉默复合体(RNA-Induced Silencing Complex, RISC), RISC对其靶向基因发挥转录后翻译抑制作用。miRNA不仅存在于细胞内也存于循环系统中,研究表明,同一个体在相同状态下血浆miRNA表达谱大致相同,在疾病状态下,miRNA会选择性地从组织细胞释放到外周血中发挥作用[7]或通过血液传递到受体细胞发挥作用,这就使得血浆中niRNA的表达水平发生变化,且血浆中miRNA的变化要早于蛋白类标记物,以上特点使血浆rniRNA具有成为一种全新疾病检测标记物的潜能。人类miR-9-3p是miRNA家族成员之一,其基因定位于15号染色体,首次发现时被认为是一种脑源性miRNA,目前国外研究表明,miR-9-3p具有调节胰岛素分泌、促进胰岛素抵抗的作用,因此niR-9-3p在糖尿病领域的研究颇受重视。miR-146a-5p是第一个被发现具有免疫调节功能的niRNA,研究认为niR-146a-5p参与了慢性炎症的病理过程,其基因位人第5号染色体,目前miR-146a-5p在慢性炎症相关疾病中的研究颇受重视。现有文献报道,新发T2DM患者血浆和外周血单个核细胞中检测到miR-9-3p的水平显著升高,T2DM患者外周血单个核细胞中miR-L46a-5p水平显著低于正常对照组,目前国内外对于单纯T2DM患者血浆中miR-9-3p、miR-146a-5p表达水平变化的研究甚少,临床上将miR-9 ·3p、miR-146a-5p血浆表达水平作为T2DM的新型诊断标记物尚缺乏充足的证据。目前关于miR-9-3p的功能性研究显示：胰岛p细胞内niR-9-3p表达含量升高,能够降低p细胞胰岛素分泌的能力,能够抑制沉默信息调节因子1(Sirtuin Type 1,Sirt1)蛋白水平。目前研究认为,Sirt1基因对于提高组织胰岛素敏感性、促进胰岛素分泌和调节脂类代谢的平衡发挥重要作用。Ramachandran D的研究表明,在葡萄糖刺激的胰岛素分泌过程中,胰岛p细胞中rniR-9-3p表达水平会显著升高,而Sirt1蛋白水平显著减少,三体内试验证实Sirt1能够正向促进胰岛素分泌,降低组织胰岛素抵抗水平。Plaisance V于2006年证实,当胰岛p细胞内miR-9-3 P过度表达时,miR-9-3p通过作用于转录调节因子Onecut 2来增加胰岛细胞内Granaphilin-a蛋白的分泌,而Granuphilin-a蛋白的作用就是降低胰岛p细胞外分泌能力。目前国内外关于miR-9-3p对HepG2细胞胰岛素抵抗及脂类代谢调节相关因子Sirt1蛋白表达的影响未见报道。目前关于miR-146a-5p的功能研究认为,rniR-146a-5p可能是炎症反应的关键调节因子,在炎症修复、抑制炎症反应阶段发挥重要作用。研究表明：在LPS所诱导的细胞炎性反应中,miR-146a-5p通过抑制其靶基因白介素受体相关激酶-1(Interleukin receptor-associated kinase-1,IRAK-1)肿瘤坏死因子受体相关因子6(TNF receptor-associated factor, TRAF6)等蛋白的表达,减少下游炎症因子的释放。Taganov等研究显示：LPS诱导单核细胞产生炎性反应,miR-146a-5p通过其3'非编码区(3'Untranslated Regions,3'UTR)与炎性基因IRAK-1和TRAF6结合,通过下调IRAK-1信号途径,抑制炎性因子TNF-α、IL-6的表达,发挥抑制炎症反应的作用。Cie YF等应用LPS诱导人牙龈成纤维细胞产生炎症反应,实验发现niR-146a-5p具有抑制IRAK-1转录水平与蛋白水平的表达。目前关于HepG2细胞炎性反应状态下,细胞炎症反应相关因子IRAK-1、胆固醇代射相关因子ATP结合盒转运蛋白G1 (ATP-Binding Cassette Transporter G1, ABCG 1)与肝X受体α(Liver X Receptors alpha, LXRa)的蛋白表达水平尚未见文献报道；关于HepG2细胞炎性反应状态下,miR-146a-5p发挥的抑制炎症反应,调节胆固醇代谢相关因子的作用尚未见报道。HepG2细胞,是一种表型与肝细胞极为相似的人肝癌细胞株,其表面表达高亲和力的胰岛素受体,并且保留了肝细胞的许多生物学特性,包括葡萄糖摄取、糖原合成酶的活性、脂类生成及RNA的合成等,目前常被用作胰岛素抵抗模型的建立、肝脏能量代谢及胆固醇代谢相关因子研究的细胞模型,如Melin B于1990应用HepG2细胞成功建立肝细胞胰岛素抵抗模型,Park H以及Kamble P分别以HepG2细胞为细胞模型,研究了药物对于肝脏脂质沉积的影响并成功检测了肝细胞胰岛素抵抗相关因子Sirt1的表达水平,Adlakha YK等应用HepG2细胞为模型,成功研究niRNA-128-2调节胆固醇逆转运相关因子ATP结合盒转运蛋白A1ATP-Binding Cassette Transporter Al, ABCA)、ABCG1表达的影响,本实验选用HepG2细胞为细胞模型,进行miR-9-3p以及miR-146a-5p的相关功能学研究。LPS是革兰氏阴性菌外膜的主要组成部分,是牙龈卟啉单胞菌Porphyromonas gingivalis lipopolysaccharide, P.g表面最主要的致病因子,P.gLPS具有很强的抗原性,研究报道P.gLPS能够与血浆中LPS结合蛋白相结合,引起单核细胞、巨噬细胞等宿主细胞的一系列免疫反应。目前关于miR-9-3p对HepG2田胞Sirtl蛋白水平表达的靶向抑制作用未见报道,关于miR-146a-5p对P.gLPS刺激的HepG2细胞炎性反应状态下,细胞炎症反应相关因子IRAK-1蛋白表达水平、胆固醇代谢相关因子ABCG1与LXRα蛋白表达水平的影响尚未见文献报道。本课题首先选取2012年1月至2013年6月我院内分泌科收治住院的符合1999年WHO诊断标准的单纯T2DM患者47例为T2DM组,同时选取年龄、性别等与之相匹配的体检健康人员28例为健康对照组,以miR-423-5p为内参,通过实时荧光定量PCR技术检测miR-9-3p.miR-146a-5p在体检建康人群,T2DM患者血浆中表达水平的变化,应用受试者工作特征曲线(Receiver Operating Characteristic curve,ROC)分析血浆miR-9-3p与miR-146a-5p对于2型糖尿病的诊断价值,本研究证实T2DM组血浆miR-9-3p的表达水平显著高于健康对照组,T2DM组血浆rniR-146a-5p的表达水平显著低于健康对照组,差异均具有统计学意义,血浆miR-9-3p. niR-146a-5p有望成为T2DM诊断潜在分子标记物。第二部分,本课题以HepG2细胞为切入点,进一步通过体外细胞培养技术、转染技术及蛋白印迹技术对miR-9-3p进行功能性研究。本实验通过miR-9-3p mimics转染技术研究miR-9-3p对HepG2细胞胰岛素抵抗及胆固醇代谢相关蛋白Sirtl的靶向抑制作用,研究证实,在HepG2田胞中,miR-9-3p在转录水平上对Sirt1的表达无影响,miR-9-3p能够显著抑制Sirt1蛋白的表达,表明miR-9-3p通过转录后水平调节Sirt1基因表达,发挥促进细胞胰岛素抵抗的作用。第三部分,本课题以HepG2细胞为切入点,从炎症以及胆固醇代谢的角度,应用体外细胞培养技术、转染技术和蛋白印迹技术以P.gLP S刺敷以及miR-146a-5p mimics转染为干预手段,研究P.gLPS刺激、miR-1 16a-5p转染以及miR-146a-5p转染+P.gLPS刺激三种处理方法分别对HepG2细胞炎症相关因子IRAK-1、胆固醇逆转运相关因子ABCG1、胆固醇与炎症调节相关因子LXRα蛋白水平的表达影响,研究证实,P.gLPS刺激能够显著升高HepG2田胞IRAK-1蛋白与ABCG1蛋白水平；转染miR-146a-5p模拟物显著下调HepG2田胞IRAK-1蛋白水平；转染miR-146a-5p模拟物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2田胞IRAK-1蛋白的上调；转染niR-146a-5p模拟物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2细胞ABCG1蛋白的上凋。通过本研究确定T2DM患者血浆miR-9-3p和miR-146a-5p表达水平；深入探讨miR-9-3p促进细胞胰岛素抵抗的作用；检测慢性炎症反应状态HepG2细胞炎性因子以及胆固醇代谢调控因子的蛋白水平表达情况；以及miR-146a-5p发挥的抑制细胞炎症、调节胆固醇代谢的作用,以期从细胞层面阐述miRNA对于胰岛素抵抗、炎性反应、胆固醇逆转运的调节作用。为阐明T2DM相关的细胞炎性反应、胰岛素抵抗、脂代谢异常的病因学基础和治疗领域的探索提供新的思路。第一部分miR-9-3p与miR-146a-5p在2型糖尿病患者血浆中表达分析目的：确定miR-9-3p.miR-146a-5p在体检健康人群、T2DM患者血浆中的表达变化。方法：本实验选取2012年1月至2013年6月我院内分泌科收治住院的单纯T2DM患者47例其中男性27例,女性20例为T2DM组；我院体险中心的体检健康人员28例其中男性14例,女性14例为对照组。所有研究对象禁食12小时,清晨空腹肘静脉采血6 mL,分别置于EDTA抗凝采血管3mL,普通生化管3mL,普通生化管静脉血用于测定空腹血糖(Fasting Plasma Glueose, FPG)、餐后2小时血糖(TWO hours Plasma Glueose,2hPG).血脂(TC、TG、LDL-C、HDL-C)等临床指标。EDTA吭凝的采血管采用4℃、3000r/min离心20分钟,分离血浆及血细胞分别置于1.5mL无酶EP管内,进一步将血浆EP管于4℃、12000g离心10min,轻轻吸取上层血浆置于1.5mL无酶EP管内,提取血浆总RNA,应用raqMan探针miRNA实时荧光定量PCR技术,以miR-423-5p为内参检测丙组血浆中miR-9-3p与miR-146a-5p含量的表达水平,进一步应用ROC曲线分析血浆miR-9-3p与miR-146a-5p对于T2DM的诊断价值,以期为T2DM的早期预防、早期诊断提供可靠的分子标记物。临床计数资料使用n(%)表示,计量资料使用均数士标准差表示；丙组间数据比较计数资料采用卡方检验,计量数据两组间比较采用t检验。实验数据采用2-△CT法进行分析,应用均数士标准差或中位数(四分位间距)来表示,两组数据比较采用非参数t检验。P0.05表示差异有统计学意义,应用SPSS160统计软件对实验结果进行分析,GraphPAD Prism 5.0软件对实验数据进行作图。结果：1 研究人群基本特征本实验共入选单纯T2DM患者47名其中男性27名女性20名,健康体检人员28名其中男性14名女性14名,两组间平均年龄分别为54±10岁、55±7岁。基本特征：性别、年龄、BMI、吸烟、高血压两组间比较未见显著性差异(P0.05)。实验室检查：TC、TG、LDL-C、HDL-C两组间比较无显著性差异(P0.05)；两组间FPG、2hPG、HbA1C水平存在显著性差异(P0.05)(Table1)2 血浆中miR-9-3p 与 miR-146a-5p表达水平2.1T2DM组血浆miR-9-3p的表达水平为0.033(0.004,0.209),对照组血浆niR-9-3p的表达水平为0.004(0.002,0.006)(Table2)。与对照组相比,T2DM组血浆niR-9-3p的表达水平显著升高,差异具有统计学意义(P=0.0005) (Fig.1)2.2T2DM组血浆miR-146a-5p的表达水平为0.016(0.003,0.153),对照组血浆miR-146a-5p的表达水平为0.823±0.478 (Table2)。与对照组相比,T2DM组血浆niR-146a-5p的表达水平显著下降,差异具有统计学意义(P0.0001) (Fig.2)。3 ROC曲线分析血浆miR-9-3p与miR-146a-5p对于T2DM的诊断价值3.1 以体检健康人群为对照组,评价miR-9-3p对于T2DM的诊断价值,3.OC曲线分析显示：AUC=0.742,介于0.7-0.9之间,说明niR-9-3p对于2型糖尿病精准诊断有一定准确性(95%CI,0.628-0.857, P=0.0005)(Fig.3)3.2 以体检健康人群为对照组,评价miR-146a-5p对于T2DM的诊断价值,ROC曲线分析显示：AUC=0.947在0.9以上,说明miR-146a-5p对于2型糖尿病精准诊断具有较高准确性(95%CI,0.901-0.993,P0.0001)(Fig.4)。小结：1 T2DM组血浆rniR-9-3p的表达水平与对照组相比显著升高,差异具有统计学意义。2 T2DM组血浆rniR-146a-5p的表达水平与对照组相比显著降低,差异具有统计学意义。3血浆rniR-9-3p与miR-146a-5p有望成为T2DM精准诊断潜在分子标记物,其真正的临床意义有待于进一步研究。第二部分miR-9-3p对HepG2细胞Sirtl蛋白表达的影响目的：探讨rniR-9-3p是否影响HepG2细胞Sirt1表达水平。方法：以HepG2田胞为体外细胞模型,HepG2细胞体外转染rniR-9-3p nimics为转染组；阴性对照组未转染miR-9-3p mimics,其它培养条件与转染组相同。应用转染技术、实时荧光定量PCR法及蛋白印迹,从转录水平和蛋白水平检测miR-9-3p是否影响HepG2细胞Sirtl的表达。qRT-PCR数据采用2-△CT进行分析,两个独立样本采用t检验或Mann-Whitney U检验,P0.05为差异有统计学意义,应用SPSS160统计软件对实验结果进行分析,GraphPAD Prism 5.0软件对实验数据进行作图。结果：1 miR-9-3p 对 HepG2细胞Sirt1转录水平的影响通过实时定量PCR技术,检测阴性对照组和miR-9-3p转染组Sirt1基因在转录水平的表达变化。结果表明,Sirt1基因mRNA水平在转染组和阴性对照组无显著性差异(P=0.30) (Fig.5),表明miR-9-3p在转录水平对Sirt1的表达没有影响。2 miR-9-3p 对 HepG2田胞Sirtl蛋白水平的影响通过细胞转染技术和Western blot技术,检测miR-9-3p对HepG2田胞Sirt1基因蛋白水平的表达变化。Western blot结果显示,miR-9-3p转染组Sirt1蛋白水平显著低于阴性对照组(Fig.6、Fig.7),差异具有统计学意义(P=0.017),表明miR-9-3p在蛋白水平调节Sirtl的表达。小结：1在HepG2田胞中,miR-9-3p在转录水平上对Sirt1的表达无影响。2在HepG2细胞中,miR-9-3p能够抑制Sirt1蛋白的表达,表明miR-9-3p通过转录后水平调节Sirt1基因表达。第三部分miR-146a-5p对P.gLPS刺激的HepG2田胞IRAK-1、ABCG1与LXRα蛋白表达的影响目的：探讨miR-146a-5p是否影响P.gLPS刺激的HepG2细胞IRAK-1、 ABCG1 与LXRα蛋白水平的表达。方法：以HepG2田胞为体外细胞模型,应用体外细胞培养技术、转染技术和蛋白印迹技术,分别以P.gLPS刺激、miR-146a-5p mimics转染为干预手段,实验分为四组：(1)HepG2细胞体外P.gLPS刺激为P.gLPS刺激组；(2)HepG2细胞体外转染rniR-146a-5p mimics为miR-146a-5p转染组；(3) HepG2田胞体外转染rniR-146a-5p mimics后经P.gLPS刺激为miR-146a-5p转染+P.gLPS刺激组；(4)阴性对照组未经P.gLPS刺激未转染rniR-146a-5p mimics,其它培养条件与各组相同。本部分实验从蛋白水平检测P.gLPS刺激组、miR-146a-5p转染组、miR-146a-5p转染+P.gLPS束0激组、阴性对照组四组HepG2细胞炎症相关蛋白IRAK-1、胆固醇逆转运相关蛋白ABCG1、胆固醇与炎症调节相关蛋白LXRa蛋白水平的表达变化。实验数据两个独立样本采用t检验或Mann-Whitney U检验,P0.05为差异有统计学意义,SPSS16.0软件进行统计学分析,GraphPAD Prism 5.0软件对实验数据作图。结果：1 P.gLPS对HepG2田胞IRAK-1蛋白水平的影响应用Western blot技术检测P.gLPS刺激对HepG2田胞IRAK-1蛋白水平的变化情况。结果显示,P.gLPS刺激组IRAK-1蛋白水平显著高于阴性对照组(Fig.8、Fig.12、Fig.15),差异具有统计学意义(P＝0.026)证实P.gLVS在蛋白水平对IRAK-1进行调节。2 P.gLPS对HepG2细胞ABCG1蛋白水平的影响应用Western blot技术检测P.gLPS刺激对HepG2田胞ABCG1在蛋白水平的变化情况。结果显示,P.gLPS刺激组ABCG1蛋白水平显著高于阴性对照组(Fig.9、Fig.13、Fig.16),差异具有统计学意义(P=0.020)说明P.gLPS在蛋白水平对ABC G1进行调节。3 P.gLPS对HepG2细胞LXRa蛋白水平的影响通过Western blot技术检测P.gLPS激对HepG2细胞LXRα上蛋日水平的变化情况。结果显示,P.gLPS刺激组LXRα蛋白水平与阴性对照组相比,差异无统计学意义(Fig.10、Fig.14) (P0.05)。4 miR-146a-5p对HepG2细胞IRAK-1蛋白水平的影响通过Western blot技术检测rniR-146a-5p模拟物转染对HepG2细胞IRAK-1在蛋白水平的变化情况。结果显示,miR-146a-5p转染组IRAK-1蛋白水平显著低于阴性对照组(Fig.11、Fig.12、Fig.15),差异具有统计学意义(P=0.028),说明miR-146a-5p在蛋白水平对IRAK-1进行调节。5miR-146a-5p对 HepG2细胞ABCG1蛋白水平的影响通过Western blot技术检测niR-146a-5p模拟物转染对HepG2细胞ABCG1在蛋白水平的变化情况。结果显示,miR-146a-5p转染组ABCG1蛋白水平与阴性对照组相比,差异不具有统计学意义(P0.05) (Fig.13、 Fig.16),说明miR-146-5p在蛋白水平对ABCG1未产生显著影响。6miR-146a-5p对HepG2细胞LXRa蛋白水平的影响通过Western blot技术检测niR-146a-5p模拟物转染对HepG2田胞LXRa在蛋白水平的变化情况。结果显示,niR-146a-5p转染组LXRa蛋白水平与阴性对照组相比未见显著性差异(P0.05) (Fig.14),说明miR-146-5p在蛋白水平对LXRa未产生显著影响。7 miR-146a-5p对P.gLPS刺激的HepG2细胞IRAK-1蛋白水平的影响通过Western blot技术检测rniR-146a-5p模拟物转染对P.gLPS刺激的HepG2细胞IRAK-1在蛋白水平的变化情况。结果显示,与单纯P.gLPS刺激组相比miR-146a-5p转染+P.gLPS刺激组能够显著下调HepG2细胞IRAK-1蛋白水平(Fig.12、Fig.15),差异具有统计学意义(P=0.002)8 miR-146a-5p对P.gLPS刺激的HepG2细田胞ABCG1蛋白水平的影响通过Western blot技术检测rniR-146a-5 P模拟物转染对P.gLPS刺激的HepG2细胞ABCG1在蛋白水平的变化情况。结果显示,与单纯P.gLPS刺激组相比miR-146a-5p转染+P.gLP S刺激组显著下调HepG2田胞ABCG1蛋白水平(Fig.13、Fig.16),差异具有统计学意义(P=0.008)9 miR-146a-5p对P.gLPS刺激的HepG2细胞LXRa蛋白水平的影响通过Western blot技术检测rmiR-146a-5p模拟物转染对P.gLPS刺激的HepG2细胞LXRa在蛋白水平的变化情况。结果显示,miR-146a-5p转染+P.gLPS刺激组HepG2细胞LXRa蛋白水平与单纯P.gLPS刺激组相比,差异不具有统计学意义(Fig.14)(P0.05)小结：1 P.gLPS刺激能够显著升高HepG2细胞IRAK-1蛋白水平。2 P.gLPS刺激能够显著升高HepG2细胞ABCG1蛋白水平。3转染miR-146a-5p模拟物显著下调HepG2细胞IRAK-1蛋白水平。4转染miR-146a-5p模拟物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2细胞IRAK-1蛋白的上调。5转染miR-146a-5 P模拟物拮抗了P.gLPS刺激的HepG2细胞ABCG1蛋白的上调。
【关键词】：microRNA 2型糖尿病 HepG2细胞 Sirt1 P.gLPS IRAK-1 ABCG1 LXRα
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R587.1
【目录】：

• 中文摘要5-15
• 英文摘要15-24
• 英文缩写24-27
• 引言27-29
• 第一部分 mi R93p与miR-146a-5p在2型糖尿病患者血浆中表达分析29-54
• 前言29-31
• 材料与方法31-35
• 结果35-37
• 附图37-41
• 附表41-43
• 讨论43-47
• 小结47
• 参考文献47-54
• 第二部分 mi R93p对HepG2 细胞Sirt1 蛋白表达的影响54-75
• 前言54-55
• 材料与方法55-63
• 结果63-65
• 附图65-67
• 讨论67-70
• 小结70-71
• 参考文献71-75
• 第三部分 miR-146a-5p对P.gLPS刺激的HepG2细胞IRAK-1、ABCG1与LXRα 蛋白表达的影响75-106
• 前言75-77
• 材料与方法77-84
• 结果84-86
• 附图86-91
• 讨论91-97
• 小结97
• 参考文献97-106
• 结论106-107
• 综述一 microRNA在2型糖尿病中的作用107-122
• 参考文献115-122
• 综述二 microRNA在高糖状态下对心血管的作用122-138
• 参考文献131-138
• 致谢138-139
• 个人简历139

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本文编号：1007588