以CD146为靶点的胃癌早期诊断多功能纳米探针的相关研究

发布时间：2017-10-28 22:11

  本文关键词：以CD146为靶点的胃癌早期诊断多功能纳米探针的相关研究

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【摘要】：研究证明,膜蛋白CD146可以作为胃癌的早期诊断标志物。早在2012年,在美国PNAS杂志一篇名为“CD146,三阴乳腺癌上皮-基质转化的启动因子”对CD146蛋白的研究推向了另一个高峰。这篇论文指出,CD146启动了上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)机制,加速了肿瘤的转移形成,是一新的诊断以EMT转移机制为基础的恶性肿瘤的标志物。但是这篇文章中涉及的抗CD146单克隆抗体不能直接识别三阴乳腺癌的肿瘤细胞株MB-231,只能识别外在转入质粒后表达CD146的阴性细胞株MCF-7。这样的抗体是很难识别活体内肿瘤天然表达的CD146,更难以达到对活体肿瘤的早期诊断。因此我们设想以真核表达的CD146蛋白为抗原,免疫小鼠获得抗CD146单克隆抗体,以磁性纳米材料为载体,研发具有自主知识产权的能识别活体肿瘤的靶向探针,实现恶性肿瘤的早期诊断与靶向治疗。主要的研究内容和结果:1.以真核CD146蛋白免疫小鼠获得高效抗CD146单克隆抗体;我们通过购买的真核CD146蛋白免疫小鼠,并以此作为筛选源,完成四次clone化和Elisa体外筛选实验后获得五株抗CD146单克隆抗体,经过FACS,confocal等一些列体外鉴定实验,确定第五株为靶向性最好的一株,并命名为YY146。2.磁性纳米材料的制备与鉴定;采用微乳液法,在表面活性剂NP-5与环己烷的体系中加入10-15nm的四氧化三铁超顺磁纳米颗粒,再体系中加入30%氨水,使体系呈弱碱性,再往体系中引入正硅酸乙酯TEOS以形成二氧化硅包裹的四氧化三铁超顺磁颗粒,接着构建具有靶向CD146特性的磁性二氧化硅纳米颗粒,并体外通过激光共聚焦显微镜观察、流式细胞术等方法检测分子探针的活性、特异性,为下一步分析该分子探针在MR/NIR活体成像的研究奠定基础。3.靶向CD146磁性纳米颗粒的体外初步研究;经过流式细胞术、免疫荧光检测,透射显微镜扫描等技术检测证实所构建的分子探针可特异地与肿瘤细胞CD146抗原相结合,并保持良好的生物学活性;4.靶向CD146磁性纳米颗粒的活体内初步研究;体内实验研究证实在裸鼠尾静脉注射探针4h后的MR扫描可以显著降低肿瘤组织在T2W1的信号,近红外显影与6小时后能靶向显影肿瘤,说明构建的探针在体内实验中获得不错的靶向性,有望其作为一种新的分子影像学诊断技术应用于临床进行肿瘤早期或转移的诊断。结论:本研究构建的分子探针技术上操作简便,更重要的是具有较好的免疫活性,可以显著的降低以胃癌CD146为靶点的信号,大大提高了MR/NIR成像的敏感性,如果能进一步对探针进行分子修饰,以降低其在网状内皮系统的吞噬,则有望成为一种肿瘤分子影像诊断的良好的分子探针。
【关键词】：核磁共振成像 近红外成像 胃癌 四氧化三铁磁颗粒 单克隆抗体
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 英文缩写索引5-8
• 英文摘要8-11
• 中文摘要11-13
• 第一章 前言13-16
• 第二章 靶向CD146磁性二氧化硅纳米颗粒分子探针的构建16-49
• 2.1 鼠抗人CD146单克隆抗体的制备、鉴定和筛选18-35
• 2.1.1 实验材料18-23
• 2.1.2 实验方法23-29
• 2.1.3 实验结果29-35
• 2.2 纳米磁性二氧化硅的构建及其活性、特异性的检测35-42
• 2.2.1 实验材料36-37
• 2.2.2 实验方法37-39
• 2.2.3 结果39-42
• 2.3 讨论42-44
• 参考文献44-49
• 第三章 磁性二氧化硅纳米微粒分子探针体外MR/NIR成像实验研究49-66
• 3.1 磁性二氧化硅纳米颗粒分子探针体外细胞MR/NIR成像研究50-58
• 3.1.1 实验材料50-52
• 3.1.2 实验方法52-55
• 3.1.3 实验结果55-58
• 3.2 磁性二氧化硅纳米颗粒分子探针体内动物模型MR/NIR成像研究58-63
• 3.2.1 实验材料58-59
• 3.2.2 实验方法59-61
• 3.2.3 实验结果61-63
• 3.3 讨论63-66
• 全文结论66-67
• 参考文献67-80
• 文献综述一 近红外分子成像在胃癌早期诊断中的研究进展80-94
• 参考文献88-94
• 文献综述二 上皮-间质转化在胃癌研究中的进展94-105
• 参考文献101-105
• 博士期间发表论文105
• 博士期间发表专利105-106
• 致谢106

【参考文献】

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1 Chun-Hui Wei;Li-Xiu Wei;Ming-Yu Lai;Jia-Zhuang Chen;Xi-Jing Mo;;Effect of silencing of high mobility group A2 gene on gastric cancer MKN-45 cells[J];World Journal of Gastroenterology;2013年08期

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本文编号：1110146