抗EV71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究

发布时间：2017-11-21 13:23

  本文关键词：抗EV71病毒单克隆抗体及柯萨奇病毒病毒样颗粒的制备研究

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【摘要】：手足口病(Hand foot and mouth disease,HFMD)是一种多见于婴幼儿的病毒流行性传染疾病,其流行疫情主要集中于亚太地区,2008年被纳入我国丙类传染病。手足口病流行范围广,是一种自愈性疾病,然而少数患儿伴有急性弛缓麻痹、脑干脑炎和脑膜脑炎等神经系统疾病,重症死亡率高,并呈逐年增长趋势,作为新发传染病,手足口病严重影响着我国婴幼儿的生命健康。手足口病的主要致病病原体包括肠道病毒71型(Enterovirus 71)与柯萨奇病毒A16型(Coxsackievirus A16,CVA16),其中EV71病毒是造成的HFMD重症及死亡的主要病原体。目前,手足口病还没有有效的治疗方法。为了开发具有临床应用潜能的手足口病重症治疗药物,本课题展开了相关的研究工作,包括以下两个部分。第一,利用噬菌体展示技术分离制备可识别EV71病毒衣壳蛋白VP4高度保守多肽(VP4N20)的人鼠嵌合单克隆抗体。免疫学实验结果显示其中一株抗体A-M001在体外既可以中和EV71病毒亦可以中和CVA16病毒,具有广谱中和病毒活性。第二,本研究利用单细胞基因扩增技术尝试从感染EV71病毒患儿体内分离具有中和EV71病毒活性的全人源单克隆抗体。共分离得到137株单克隆抗体,有4株抗体在体外表现出不同程度的中和EV71病毒活性。其中,单克隆抗体hm Ab136在体外表现出最强的中和EV71病毒活性。该抗体在体外既可以中和EV71-A亚型病毒亦可以中和EV71-C4亚型病毒。针对EV71-A和EV71-C4亚型病毒的体外半数抑制浓度分别是:IC50=0.071μg/m L和IC50=0.040μg/m L。体内中和实验显示单克隆抗体hm Ab136在300 ng/g剂量条件下可以完全保护小鼠抵抗致死剂量EV71病毒攻击,其IC50=0.053μg/m L。实验结果显示该抗体在体内外均具有理想的中和EV71病毒活性,但该抗体不具有中和CVA16病毒的能力。我们还利用Western-blot初步鉴定了该抗体的潜在识别表位,结果显示抗体无法识别EV71病毒的线性表位,提示该抗体是通过识别EV71病毒的空间表位来中和EV71病毒的。相关研究国际上尚无类似报道。柯萨奇病毒B组3型(Coxsackievirus B3,CVB3)属于肠道病毒属,能引起手足口病重症并发症类似病理症状,导致中枢神经系统感染,诱发无菌性脑膜炎、脑炎,另外还能引起病毒性心肌炎及由病毒性胰腺炎引起的I型糖尿病等多种疾病,CVB3病毒持续感染能够诱发扩张性心肌病,具有较高的致死率,因此倍受关注,目前还没有开发出有效的抗病毒疫苗。为此,本课题展开了第三部分研究内容,研制抗CVB3病毒新型疫苗。第三,利用酵母系统制备CVB3病毒样颗粒(Virus-Like Particle,VLP)新型疫苗。研究结果显示在酵母细胞中共表达CVB3P1蛋白和3CD蛋白或共表达CVB3 VP1、VP2、VP3和VP4蛋白可有效制备CVB3 VLPs。VLP是具有完整的病毒衣壳蛋白,无病毒核酸的病毒空颗粒,兼具免疫原性与安全性,已成为抗病毒疫苗研究热点。采用酿酒酵母表达系统,通过两种不同的技术路线分别成功制备了CVB3病毒VLP。为研制CVB3预防性疫苗探索了新的技术策略。
【学位授予单位】：北京工业大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R943

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