三物白散通过周期检查点信号通路抑制HER2阳性人乳腺癌细胞SKBR3增殖研究

发布时间：2017-12-05 19:28

  本文关键词：三物白散通过周期检查点信号通路抑制HER2阳性人乳腺癌细胞SKBR3增殖研究

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【摘要】：HER2阳性乳腺癌病势凶猛,易于复发转移,预后较差,具有明显"痰毒凝滞"的特性。三物白散原本用于峻下逐水,治疗寒实结胸,现代研究证明其在多种层面对人恶性肿瘤具有抑制作用,在祛痰逐饮的同时使得毒邪有退路,理论上契合对痰毒互结的乳腺癌的治疗需求。细胞周期检查点通路是真核细胞内抑制异常细胞增殖的关卡,其主要作用是接受DNA损伤信号,并将其传导至效应器,阻滞异常细胞周期运行,等待后期DNA修复,若失败则通过一系列机制诱导凋亡。这一机制在防止恶性肿瘤生成和发展上起到重要作用。而在HER2阳性乳腺癌细胞中,HER2/AKT1通路异常活化,会进显著抑制周期检查点通路的功能,使癌细胞免于细胞周期阻滞,大量增殖,促进恶性肿瘤的进一步发展甚至复发转移。因此,此条交叉通路非常值得研究。本课题通过MTT、流式细胞检测技术,Western blot,realtime-PCR的试验方法,从体外细胞实验研究三物白散对HER2阳性乳腺癌细胞SKBR3的抑制作用,并将HER2-AKT1通路与细胞周期检查点通路CHK1/CHK2-CDC25A-CDK2作为具体研究对象,探讨三物白散对SKBR3细胞周期阻滞作用的内在机制。同时选用了 HER2阴性的人乳腺癌细胞MCF-7用于对照。研究结果显示,三物白散中高浓度可以明显抑制HER2阳性乳腺癌细胞SKBR3增殖,呈时间和浓度相关。内在机制或许与诱导细胞于G1/S和G2/M期阻滞,以及早期凋亡有关。通过进一步研究发现,其引起细胞周期阻滞的机制一为直接抑制HER2蛋白表达,从而抑制AKT1蛋白活性,解除其对细胞周期检查点通路具有正相调节作用的CHK1/CHK2的抑制作用。后继可见CDC25A蛋白表达减少,CDK2蛋白活性降低等一系列提高细胞周期检查点功能的改变。二为直接抑制原癌基因CDC25A在mRNA水平的表达,同时也可见其蛋白水平的降低。而对HER2阴性的MCF7细胞,三物白散抑制作用较低,高浓度药物作用48小时可见G2/M周期阻滞,然而随后并没有出现促进细胞早期凋亡的作用,对周期检查点蛋白活性影响也较少。因此,本课题通过体外实验证明了三物白散对HER2阳性乳腺癌细胞具有明确的抑制增殖,诱导凋亡,阻滞周期的作用,其内在机制与影响细胞周期检查点相关;从三物白散祛痰逐饮的角度看,HER2阳性乳腺癌具有一定的痰饮特性。可用于指导临床,也可用于进一步开发新型药物。
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285

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本文编号：1255941