瓜子金皂苷己在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌损伤中的保护作用及机制研究

发布时间：2017-12-10 17:10

  本文关键词：瓜子金皂苷己在缺氧缺血性脑损伤新生大鼠心肌损伤中的保护作用及机制研究

  更多相关文章： 瓜子金皂苷己 缺氧缺血性脑损伤 心肌损伤 新生大鼠 凋亡

【摘要】：HIE是新生儿期的一种严重疾病,中重度病例死亡率高,严重威胁新生儿的生命。缺氧后可引起脑、心脏、肾脏、肝脏及肺等多脏器脏器损伤,其中心肌组织需氧量极高,对缺氧非常敏感,因此心肌损伤尤为严重。心肌细胞缺氧再灌注后,心肌损伤进一步加重。因此,探索新生儿缺氧缺血性脑损伤后防治心肌损伤的药物是目前的研究热点之一。瓜子金为远志科远志属植物,是我国常用的传统中药,具有祛痰止咳,宁心安神等功效。PGSF是从瓜子金中提取的齐墩果烷型三萜皂苷。已有研究显示PGSF对神经系统具有广泛的保护作用,但对缺氧缺血脑损伤的心肌影响的研究较少。本研究通过体外建立心肌细胞缺氧后复氧损伤模型和新生大鼠HIBD模型,探讨PGSF对HIBD新生大鼠心肌损伤的保护作用。(1)PGSF对大鼠心肌细胞的毒性作用。本实验利用1-3天清洁级Sprague-Dawley(SD)乳鼠,原代培养心肌细胞。利用抗α-actin免疫荧光法鉴定心肌细胞。检测PGSF是否对原代心肌细胞和H9C2细胞有毒性作用。PGSF(0.1μM、1μM、10μM、100μM、1000μM)给药处理后,观察心肌细胞的形态,检测细胞活性、细胞凋亡率、丙二醛(MDA)和乳酸脱氢酶(LDH)活性。结果如下:1)PGSF对原代心肌细胞和H9C2细胞形态没有明显影响。2)PGSF对原代心肌细胞和H9C2细胞的细胞活性没有明显的毒性作用。3)PGSF(0.1μM、1μM、10μM、100μM)没有引起原代心肌细胞明显的细胞凋亡,1000μM时有少量凋亡;设置浓度范围内H9C2细胞无明显凋亡。4)PGSF对原代心肌细胞和H9C2细胞的LDH和MDA水平没有明显的影响。本部分实验证明了PGSF对原代心肌细胞和H9C2细胞没有明显的毒性作用,可以用于心肌保护作用的研究。(2)PGSF对缺氧大鼠心肌细胞的保护作用体外建立原代心肌细胞和H9C2心肌细胞缺氧后复氧细胞模型,给予PGSF(1μg/m L、10μg/m L、100μg/m L),观察PGSF对缺氧后复氧心肌细胞形态的影响,检测细胞存活率、细胞凋亡率、MDA、LDH、活性氧自由基(ROS)、Bcl-2和Bax m RNA和蛋白的表达。结果如下:1)PGSF可增加心肌细胞存活率、改善损伤细胞的形态学改变、减少LDH的释放,减轻缺氧后复氧心肌细胞损伤。2)PGSF可降低心肌细胞内MDA含量和ROS的生成量,增强缺氧后复氧心肌细胞抗氧化能力。3)PGSF可降低心肌细胞的凋亡率、增加Bcl-2蛋白的表达、增加Bcl-2/Bax的值,增强缺氧后复氧心肌细胞抗凋亡能力。(3)PGSF对HIBD新生大鼠心肌损伤的保护作用本实验通过Rice法建立新生大鼠HIBD模型。在模型制备后腹腔注射PGSF 5mg/kg、10mg/kg、50mg/kg,以及1,6-二磷酸果糖(FDP)25 mg/kg。检测应用PGSF后HIBD新生大鼠体重,TTC染色检测脑梗死面积和心肌梗死面积,Tunel法检测脑细胞和心肌细胞凋亡,HE染色观察脑组织细胞和心肌细胞形态,检测肌酸激酶同工酶(CK-Mb)活性、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性评估PGSF对心肌损伤的影响,检测丙氨酸氨基转移酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)的活性评价PGSF对肝功能的作用,检测血清中肌酐(Cr)和尿素氮(Bun)的含量评价PGSF对肾功能的作用,检测血清中MDA、超氧化物歧化酶(SOD)、ROS水平,利用RT-PCR及Western Blot法检测PGSF对HIBD新生大鼠Bcl-2和Bax m RNA及其蛋白表达的影响。实验结果如下:(1)PGSF可减少脑梗死面积及脑细胞凋亡率,减轻脑缺氧缺血引起的脑损伤;(2)PGSF可减少心肌梗死面积及心肌细胞凋亡率,降低血清中CK-Mb的水平,减轻脑缺氧缺血引起的心肌损伤;(3)PGSF可降低血清中AST、ALT和ALP的水平,减轻脑缺氧缺血引起的肝脏损伤;(4)PGSF可降低血清中Cr和Bun的水平,减轻脑缺氧缺血引起的肾脏损伤;(5)PGSF可增加SOD的活性,降低MDA和ROS的含量,增强心肌抗氧化能力;(6)PGSF可增加Bcl-2m RNA表达量以及Bcl-2/Bax蛋白比值,减少细胞凋亡,增强心肌抗凋亡能力。本研究首次在细胞水平和动物水平上,证实了PGSF对HIBD新生大鼠心肌损伤具有保护作用,为临床应用PGSF治疗HIBD后心肌损伤奠定了实验基础。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R722.1

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 ;某些因素对大鼠胃肌电的影响[J];基础医学与临床;2001年S1期

2 陈同度,张昌颖;素食大鼠的贫血现象[J];营养学报;1957年04期

3 陈伟强;赵善广;;自制注射用大鼠固定装置[J];上海实验动物科学;1992年04期

4 肖柳英,林培英,冯昭明,张丹;不同周龄的SD大鼠生理、生化及体重的正常值测定[J];中药新药与临床药理;1996年03期

5 李淑云;简易大鼠灌胃器的制作[J];锦州医学院学报;2001年04期

6 杨明智,陈积圣;一种大鼠抓取与固定的新工具介绍[J];上海实验动物科学;2001年03期

7 戴英,陆群;复方H_(505)对Wistar大鼠外周血的血液流变学指标的影响[J];中国血液流变学杂志;2001年01期

8 韦应波,孙喜庆,曹新生,姚永杰,冯岱雅,杨长斌;+Gz暴露时间对大鼠记忆功能和行为的影响[J];航天医学与医学工程;2003年01期

9 吕学军,郭俊生,李敏,周利梅,张永娟;晕船大鼠体内铁含量的变化[J];中国职业医学;2003年04期

10 汤仁仙,王迎伟,王慧,周峰;201A中药合剂对大鼠抗肾小球基底膜肾炎病变的影响[J];徐州医学院学报;2003年06期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 尹音;孙振宇;胡敏;李冬霞;;持续性高正加速度对大鼠颞颌关节损伤的作用[A];第八届全国颞下颌关节病学及（牙合）学大会论文汇编[C];2011年

2 祝~=骧;iJ梊霞;洃克琴;崔素英;文允摪;，

本文编号：1275240