蒙药那如-3味丸对CCI大鼠miR-125a及P38MAPK机制研究

发布时间：2017-12-14 20:22

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【摘要】：坐骨神经痛由多种病变引起沿坐骨神经痛路及其分布的疼痛综合征。疼痛多为钝痛、麻痛、灼痛,腰痛伴放射性下肢痛为特点的一种常见病、多发病。属于蒙医学下肢白"脉病"的范畴。主要是赫依和血相搏入下肢白脉,表现为下肢麻木、肿胀、疼痛、萎缩、挛缩等症状,又名白"乎杨"。多发生肿胀、萎缩、挛缩、僵直等病变。发病年龄常在2060岁,其中40岁左右最多见。疼痛是身体对正在进行或即将发生的组织损伤做出的警告,是机体的一种保护性机制。目前,治疗坐骨神经痛,西医多选择药物、手术治疗和介入治疗。药物主要选用非甾体类镇痛药。临床上这些药物只能缓解或部分缓解疼痛症状,腰部功能的康复是不大容易凑效,骨质修复亦无法完成。因此,长期使用药物会引发副作用和手术带来的损伤也对患者有一定的影响。手术治疗只适用于诊断明确,病程半年以上,非手术治疗无疗效或症状日益加重或疼痛难以忍受的患者。据统计80～90%的坐骨神经痛患者,可经由非手术治疗方式得到缓解。关于坐骨神经痛蒙医药治疗方面,多用扎冲-13,额尔敦乌日勒,石决明-25,水银-18及对寒性协日乌素病用那如-3味丸等,并根据病情结合拔罐,温针,艾灸等。临床文献报道,蒙药那如-3味丸治疗协日乌素病的总有效率达到97.7%,腰椎痛,颈椎病止痛率93.5%,缓解症状率达到94.7%。是组方数量少,配伍合理,临床疗效可靠的治疗首选于寒性协日乌素病的温性制剂。还有那如-3味丸不同给药途径能够改变血药浓度,疗效不一;在大鼠佐剂性关节炎大鼠的治疗作用和部分机制中不同剂量的那如-3味丸能让肿胀度和炎性细胞因子等明显下降并证实了镇痛,抗炎等作用。由此,通过本课题阐明止痛、杀粘、燥协日乌素功效的那如-3味丸对坐骨神经痛的止痛作用机理。[目的]观察蒙药那如-3味丸对慢性压迫损伤坐骨神经痛CCI大鼠模型的影响,探讨蒙药那如-3味丸缓解坐骨神经痛的止痛和杀"粘"功效及抗损伤的作用机制。[研究方法]将SD雄性大鼠,随机分为CCI模型组,Sham组,那如-3味丸组和阳性对照组,每组15只。采用Bennett Xie方法制作CCI动物模型,造模成功后连续给药15d。阳性对照组给予尼美舒利(0.2g.kg-1),那如-3味丸(0.4g.kg-1),Sham组只暴露坐骨神经而不结扎,CCI组对大鼠右侧坐骨神经进行结扎,分别于术后1、3、5、7、15、21及30天观察大鼠体重增长和一般行为表现并测定机械刺激阈值(mechanical withdrawal threshold,MWT)和热缩腿反射潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL)、旷场实验(open-field test)、高架十字迷宫(Elevated plus maze,EPM)来进行行为学评价;用酶联免疫法(ELISA)检测大鼠血清白介素-6(IL-6)、白介素-10(IL-10)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和一氧化氮(NO)的含量;通过HE染色对脊髓和坐骨神经的结构进行评价;Q-PCR、RT-PCR、Western blot方法检测miR-125a及P38MAPK在坐骨神经组织中的表达。[结果]一般行为学检测中各组间无自残现象,于15d自发运动减少,经常静躺;30d蒙药那如—3味丸组术侧右后腿能够着地,舔脚减少,行走基本正常,与Sham组比较有显著差异(P0.05);术后各时间点MWT和TWL,与CCI组比较有显著差异(P0.05)。CCI组大鼠在手术后出现损伤侧爪内收,后足轻度外翻和跛行,而 Sham组和给药组大鼠术后未出现上述情况。OFT和EPM实验中,与CCI组比较总运动时间、运动距离、OT%和OE%有显著差异(P0.05),运动总距离没有改变(P0.05);与Sham组比较,蒙药那如-3味丸和阳性对照组无显著性差异(P0.05)。即表明蒙药那如-3味丸对慢性压迫坐骨神经痛有一定的止痛作用。给药后IL-6、IL-10、TNF-α、NO的含量比较中,经方差分析sig=0.02,P0.05,L-S-D分析,与CCI组比较较,Sham组、那如-3味丸组和阳性对照组的含量明显降低(P0.01);与Sham组比较那如-3味丸和阳性对照组无显著性差异(P0.05)。病理切片HE染色结果显示,CCI模型组神经纤维肿胀、体积变大,胞浆淡染,神经纤维束膜间见炎性细胞浸润,周围纤维组织增生少,可见雪旺细胞(Schwanncell,Sc)再生。Sham组和蒙药那如-3味丸组坐骨神经纤维排列基本正常,但可见神经纤维不同程度肿胀,可见少许炎性细胞浸润,轴突及雪旺氏细胞体积变大。各组脊髓神经纤维束清晰可见,可见假单极神经元(pseudounipolar neuron)胞体,神经细胞呈小群状分布于平行排列的神经纤维之间。神经髓鞘可见,神经节细胞胞体外卫星细胞。microRNA芯片结果显示,CCI组与Sham组和那如-3味丸组比交,表达水平上调的有miR-125a。Q-PCR,RT-PCR,Western blot分析显示,Sham组大鼠坐骨神经有一定量的P38MAPK蛋白的基础表达。与Sham组相比,CCI组使P38 MAPK蛋白的表达均明显上调(P0.05);那如-3味丸组无明显差异(P0.05)。[结论]1.本研究证实了蒙药那如-3味丸对慢性压迫损伤的坐骨神经痛CCI大鼠模型具有止痛、抗炎作用;能够抑制血清中炎性细胞因子IL-6、IL-10、TNF-α和NO的含量。那如-3味丸的止痛作用可能与降低血清炎性细胞因子有关。2.CCI组神经病理性疼痛可导致大鼠脊髓背角microRNA的表达发生变化。这些microRNA及其调控的靶基因P38MAPK可能在抑制慢性疼痛的炎性细胞因子。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R29

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