CaMKKβ抑制剂STO-609诱导胃腺癌细胞凋亡的机制研究

发布时间：2017-12-15 03:21

  本文关键词：CaMKKβ抑制剂STO-609诱导胃腺癌细胞凋亡的机制研究

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【摘要】：研究背景:胃癌是在世界范围内常见的恶性肿瘤,具有非常高的肿瘤相关的死亡率。胃癌的预后较差,在疾病的早期阶段,病人的临床症状不特异的症状,因此我国大部分的胃癌于临床诊断时已处于进展期,整体的预后及生存率远不如早期病例占多数的日本、韩国。在我国胃癌已经成为重要的卫生负担,虽然临床及基础的研究取得了长足的进步,但总体而言我国胃癌治疗的效果仍不满意。故此,对胃癌的早期诊断及与肿瘤的演进相关的信号通路及激酶等的研究,一直是胃癌基础研究的一个重要的方向。Ca MKKβ是钙调蛋白激酶家族成员,最初的研究多集中在其作为全身及具体的器官能量平衡的调控因子的作用,在诸如自身免疫性疾病、慢性炎症、神经系统退行性变、炎症等系统性疾病等方面;而最近的研究提示包含消化系统肿瘤在内的多种肿瘤,存在了Ca MKKβ的异常,但关于Ca MKKβ与胃癌的研究较少。目前已知的Ca MKKβ的下游激酶主要有AMPK、Ca MK及Akt,但在胃癌发生发展过程中Ca MKKβ究竟扮演着何种的角色,是学者们关心但尚未明确的问题。STO-609是Ca MKKβ的选择性抑制剂,研究已经发现在多种肿瘤,STO-609可以抑制肿瘤细胞的活力等。但STO-609抑制肿瘤的具体机制不详,只有零星的报道探讨了STO-609与Ca MKKβ的下游分子靶标的作用关系,而STO-609能否成为胃癌治疗潜在的药物的前提,则是对其作用机制及耐药机制的探讨。目的:1.探讨Ca MKKβ在胃癌组织及非癌组织中的表达是否存在差异,如果存在差异,则进一步探讨胃癌组织的Ca MKKβ的表达与临床病理学特征及预后的相关性。2.探讨Ca MKKβ的特异性抑制剂STO-609对胃腺癌细胞活力、凋亡及侵袭能力的影响,探讨STO-609对Ca MKKβ的相关下游通路活化的影响。3.利用sh RNA抑制Ca MKKβ和AMPK,探讨STO-609诱导胃腺癌细胞凋亡的作用及与Ca MKKβ下游信号通路的关系。方法:1应用免疫组织化学的方法检测胃癌组织与癌旁组织及正常组织的Ca MKKβ的表达。2应用统计学软件综合分析胃癌的Ca MKKβ表达与胃癌的组织分型、肿瘤直径、Lauren分型及淋巴结转移等临床病理学特征及预后进行分析。3通过台盼兰染色探讨STO-609的对胃腺癌细胞存活率的影响。4通过Western Blot检测STO-609对胃腺癌细胞Ca MKKβ下游AMPK、Akt、ERK的表达水平。5通过凋亡-坏死定量检测试剂盒及Western Blot检测STO-609的对胃腺癌细胞凋亡率的影响。6通过Trans-well侵袭室检测STO-609的对胃腺癌细胞侵袭能力的影响。7通过sh RNA抑制Ca MKKβ和AMPK,检测STO-609对胃腺癌细胞活力、凋亡及侵袭能力的影响,及AMPK、Akt、ERK的表达水平变化。8通过IBM SPSS 24.0对数据进行统计学分析。结果:1.93例胃癌组织中61例Ca MKKβ表达阳性为,21例癌旁组织中10例表达阳性,17例正常组织中6例表达阳性,阳性率分别为81.7%、46.6%、54.5%,差异具有统计学意义;2.在胃腺癌组织的Ca MKKβ表达评分上,T2期及以下肿瘤组织的评分为1.03±0.79,T2期以上肿瘤组织的评分为1.93±1.05,差异有统计学意义。多因素分析显示Ca MKKβ的强阳性表达是预后的独立危险因素,与弱阳性组相比强阳性组在总生存率上的差异有统计学意义;3.STO-609可以抑制胃腺癌SUN-1细胞及N87细胞的活力。4.STO-609对胃腺癌SUN-1细胞及N87细胞的AMPK、Akt、ERK的活化有抑制作用。5.STO-609对胃腺癌SUN-1细胞及N87细胞的凋亡有诱导作用。6.STO-609对胃腺癌SUN-1细胞及N87细胞的侵袭能力有抑制作用。7.与对照组相比,Ca MKKβsh RNA对STO-609引起的胃腺癌SUN-1细胞的凋亡存在抑制作用,但AMPK sh RNA无明显抑制凋亡的作用。8.与对照组相比,AMPK sh RNA对STO-609引起的胃腺癌SUN-1细胞的活力抑制及凋亡诱导无抑制作用;AMPK sh RNA对STO-609引起的SUN-1细胞的Akt及ERK活化无抑制作用。结论:1.胃癌组织的Ca MKKβ的表达明显高于癌旁组织及正常组织,Ca MKKβ的表达与肿瘤的浸润深度相关且强阳性表达提示预后不良,可能成为潜在的分子标志物;2.STO-609抑制胃腺癌细胞活力的作用,可能是与其诱导细胞凋亡有关;STO-609诱导胃腺癌细胞凋亡的作用,与其对Ca MKKβ的下游信号AMPK、Akt、ERK的激活抑制有关。STO-609抑制对胃腺癌细胞的侵袭能力有抑制作用,提示Ca MKKβ抑制剂STO-609可能作为一种新型的抗癌药物。3.我们进一步研究发现,AMPK特异性沉默,并没有影响Ca MKKβ抑制剂STO-609诱导胃癌细胞凋亡作用,提示诱导凋亡的作用可能与Ca MKKβ下游的信号其一的AMPK途径的机制无关。4.最后,结合我们的整体实验结果,我们推测:STO-609诱导胃癌细胞凋亡的机制,可能与抑制Ca MKKβ下游信号Akt、ERK及信号途径之间的交互调控有关。
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.2

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本文编号：1290437