TBHQ改善压力超负荷小鼠心肌重构的作用及其机制研究

发布时间：2017-12-17 19:10

  本文关键词：TBHQ改善压力超负荷小鼠心肌重构的作用及其机制研究

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【摘要】：研究背景心力衰竭是一种对病人生活质量造成严重影响,大量占用社会医疗资源,致死致残率高,预后差的严重心脏疾病。在持续性超负荷或心肌梗死等应激情况下,心脏发生心肌肥厚,这被认为是一种适应性反应,并对心脏泵功能异常具有代偿作用；然而,应激因素持续存在将导致心脏失代偿,心腔扩大、心肌纤维化、氧化应激、收缩功能异常,最终发生心力衰竭。目前,从代偿性心肌肥厚发展到心力衰竭的具体机制还不是完全清楚。大量证据表明,心肌细胞丢失(凋亡和/或坏死)、细胞内钙稳态失衡、失控的心肌纤维化等在这种病理过程中可能发挥重要作用,这些均可以作为抑制心力衰竭发展的潜在治疗靶点。虽然对此进行了广泛的研究,但是目前我们仍缺乏有效的治疗方法以抑制心肌失代偿和心力衰竭的发生、发展。叔丁基对苯二酚(Tert-butylhydroquinone, TBHQ)是一种合成酚类抗氧化剂,被用于抑制脂质过氧化。目前认为,TBHQ是有效的Nrf2激活剂。Nrf2是一种与哺乳动物细胞的Ⅱ相解毒反应相关的氧化还原敏感的转录因子。在应激情况下,被激活的Nrf2介导一系列细胞保护酶表达,包括：苯醌还原酶(NQO1)、谷胱甘肽过氧化物酶、血红蛋白氧化酶-1(HO-1)、超氧化物歧化酶等等。大量体内研究发现,TBHQ对于各种病理状态下的器官具有显著的细胞保护活性。例如,TBHQ在脑外伤、缺血性中风和蛛网膜下腔出血动物模型中均具有神经保护作用。同样,有证据表明,TBHQ处理可以抑制大鼠缺血再灌注(Ischemia-Reperfusion,I/R)损伤引起的肾脏损害和氧化应激。TBHQ的上述神经保护和肾脏保护作用都是由Nrf2抗氧化系统介导的。新近的一项研究提示TBHQ在病理状况下可能有心肌保护作用。然而,TBHQ对病理性心肌重构的影响,特别是其可能的作用机制,尚缺乏系统的评价研究。因此,在以下的研究中我们检测了TBHQ对压力超负荷引起的心肌重构的影响,并初步探讨了TBHQ在心肌保护作用中的可能机制。研究目的1.研究TBHQ对压力超负荷小鼠心肌重构过程的影响2.研究TBHQ改善压力超负荷心肌重构的可能机制研究方法1.实验动物分组8周龄雄性C57BL/6小鼠购自北京维通利华公司。所有动物实验均符合山东大学齐鲁医院伦理委员会对动物实验的要求和规定。10～12周龄的雄性小鼠被选择进入实验研究,随机分为8组：假手术组(Sham)、主动脉缩窄组(TAC)、Sham+TBHQ组、TAC+TBHQ组、TAC+Rapamycin组、TAC+Rapamycin+TBHQ组、TAC+Ly294002组、TAC+Ly294002+TBHQ组。2.动物模型建立利用改良的主动脉缩窄法建立心脏压力超负荷动物模型。腹腔注射0.8%戊巴比妥钠(60mg/kg)麻醉小鼠,在胸骨上切迹水平做一水平切口,确定气管位置,纵向切口胸骨,暴露主动脉弓。于无名动脉和左颈动脉间,将27号针头与主动脉弓一起结扎后,抽出针头,逐层缝合组织。假手术组的手术步骤同前,但不结扎主动脉弓。3.超声心动图检测分别在建立小鼠TAC模型前1天及术后2周、4周进行心脏超声心动图检测。1～2%异氟烷吸入麻醉,选取频率为35MHz的超声探头进行心脏大小和功能参数的采集,采用高分辨率超声Vevo770系统进行数据分析。左室长轴和短轴切面记录超声图像。M型超声检测左室舒张末内径、左室收缩末内径、舒张末室间隔厚度、舒张末左室后壁厚度。左室短轴缩短率、射血分数和校正的左室质量由超声系统自动计算。4.组织病理学和免疫组织化学检测实验小鼠心脏灌注固定5分钟,留取实验小鼠心脏标本,4%多聚甲醛固定过夜,脱水,石蜡包埋。于心脏短轴切面乳头肌水平,制作5μm厚组织切片。组织切片进行苏木素-伊红染色法(hematoxylin-eosin staining), Masson染色及天狼猩红染色。采用免多克隆抗体进行4-HNE的特异性免疫组织化学染色。5.羟脯氨酸检测用羟脯氨酸法检测小鼠左室组织的胶原含量,按照南京建成生物公司的羟脯氨酸检测试剂盒所提供的实验步骤进行。6.蛋白质免疫印迹用裂解液裂解左室组织并提取总蛋白,SDS-PAGE电泳恒压分离蛋白样品,以湿式转膜法将蛋白转移至硝酸纤维素膜上,5%脱脂奶粉封闭后用特异性一抗4℃孵育过夜,随后室温孵育二抗2小时。ECL化学发光液使目的蛋白条带显影,并用LAS-4000化学发光仪检测。7.蛋白质羰基化检测按照既往文献报道的实验步骤并加以改进,检测左室组织的蛋白质羰基化水平。8. TUNEL染色使用TUNEL染色检测心肌组织内细胞凋亡,每张切片随机选取10个400×视野计数TUNEL阳性的细胞和总细胞数。9.实时定量PCR反应依照Taqman Gene Expression primer-probe试剂盒提供的方法进行Real-timePCR,以18S RNA作为管家基因,相对定量的方法进行数据分析。10.Akt酶活性和Nrf2活性检测Akt酶活性检测按照Akt酶检测试剂盒(CST)提供的步骤进行。按照AM Nrf2试剂盒提供的实验步骤检测心室组织核蛋白的Nrf2-ARE结合水平。11.肝脏组织血红蛋白含量检测肝脏组织血红蛋白含量检测按照Drabkin's试剂盒(Sigma)提供的实验操作步骤进行。12.统计学分析定量数据均采用均数±标准误表示,选用SPSS13.0软件以独立样本t检验或单因素方差分析及Newman-Keuls检验分析数据,P0.05被认为有统计学意义。研究结果1.TBHQ降低TAC导致的死亡率TBHQ处理降低了TAC导致的死亡率2. TBHQ抑制TAC诱导的小鼠左室扩张和收缩功能异常我们首先描述了压力超负荷诱导的心肌重构的发生、发展过程。依据心脏超声检测结果,TAC术后2周小鼠的左心室壁显著增厚,但左心室腔维持正常,即发生代偿性心肌肥厚。TAC术后4周发生失代偿性心肌肥厚、心力衰竭,左心室腔扩张,心室壁变薄。我们观察到,TBHQ处理抑制了TAC引起的左心室扩张及心室壁变薄。2周时TAC组和Sham组小鼠的射血分数(EF)和短轴缩短率(FS)无显著差异,然而,4周时TAC组的EF和FS显著降低。TBHQ处理逆转了TAC引起的EF和FS的损害。另外,我们发现4周时TAC组的肺脏重量较Sham组显著增加,这表明TAC组发生了充血性心力衰竭的体征,而TBHQ处理显著改善了肺淤血。利用Drabkin's试剂检测了实验小鼠肝脏血红蛋白含量即肝淤血指征,TAC组肝脏血红蛋白含量较Sham组显著升高,而TBHQ处理显著降低肝脏血红蛋白含量。3. TBHQ对TAC诱导的心肌肥厚和纤维化无显著影响组织形态学分析表明TAC导致典型的心肌肥厚。然而,TBHQ处理对于TAC诱导的心肌细胞肥厚无显著影响。与此相一致,心脏超声数据表明TBHQ处理维持了TAC术后小鼠的心肌肥厚表型。TAC术后4周,TAC组心脏重量/体重比值、心脏重量/胫骨长度比值以及超声测量计算的左室重量/胫骨长度比值较Sham组均显著增加。然而,TBHQ处理并未影响心脏重量/胫骨长度比值和超声测量计算的左室重量/胫骨长度比值,仅仅使心脏重量/体重比值轻度降低。TAC组的ANP和BNP的mRNA表达水平显著升高,而TBHQ处理显著增加了这两者的表达水平。利用Masson染色、天狼猩红染色和羟脯氨酸检测,我们对心肌纤维化的程度也进行了评价。结果显示,TBHQ处理并不影响TAC引起的心肌纤维化程度。4. TBHQ并未激活Nrf2、AMPK,也未抑制ER应激检测左室组织中的Nrf2蛋白表达水平后,我们惊奇地发现,在本实验中TBHQ组小鼠心肌组织内的Nrf2蛋白并没有增加。为了证实这一结果,我们又检测了左心室组织核蛋白中的Nrf2 DNA结合活性,其在各实验组间也没有差异。另外,我们检测了Nrf2靶基因NQO1、HO-1、glutathione peroxidase-1、和thioredoxin的mRNA表达水平,结果显示,TBHQ未能显著改变左心室组织Nrf2靶基因的表达水平。但是,TBHQ却使小鼠肝肾组织的Nrf2靶基因表达水平显著升高。另外,我们还发现心脏组织AMPKa的磷酸化水平未受TBHQ影响。而且,TBHQ处理亦未显著影响ER应激标志CHOP和GRP78的mRNA表达水平。5. TBHQ抑制心肌细胞凋亡通过心脏左室组织切片的TUNEL染色,我们观察到,TAC组心肌细胞凋亡水平较Sham组显著增加了近10倍。TBHQ处理显著抑制TAC导致的心肌细胞凋亡水平近60%。6. TBHQ激活Akt信号通路通过蛋白质免疫印迹法,我们发现TBHQ处理组Akt磷酸化水平较Sham组和TAC组显著升高。与此相一致,TBHQ处理显著升高Bad磷酸化水平。相反,ERK1/2磷酸化水平并未受TBHQ影响。我们直接检测了心肌组织中的Akt酶活性,TBHQ处理组的Akt酶活性较TAC组显著增高。而且,TBHQ处理组的Akt底物GSK-3β和mTOR蛋白磷酸化水平亦显著增高。为了阐明TBHQ激活Akt是否具有亚型特异性,我们又检测了Akt1和Akt2的磷酸化水平,结果显示TBHQ处理组的Akt1和Akt2的磷酸化水平均显著增高。7.阻断Akt通路后TBHQ对心肌重构的影响TAC术后2周,TAC+LY294002组的左室收缩功能显著降低,心肌肥厚被显著抑制。但是,TBHQ并不能改善TAC+LY294002组的心功能异常。TAC组心肌组织中的p-Akt水平较Sham组显著升高。另外,Sham组和TAC组的心肌细胞凋亡水平无显著差异。与TAC组比较, TAC+LY294002组心肌组织的p-Akt水平显著降低,细胞凋亡水平显著增加。而TBHQ并未能逆转这一变化。TAC术后2周, TAC+Rapamycin组的心肌肥厚指标较TAC组显著降低。TAC术后4周,TAC+Rapamycin组的FS和EF值较TAC组有所改善。同时,TBHQ可以进一步改善TAC+Rapamycin组的左室收缩功能。8. TBHQ抑制心肌细胞中4-HNE和蛋白质羰基化水平为了证明TBHQ是否具有抗氧化效应,我们进行了免疫组化染色,TAC显著增加心肌组织中活性醛类4-HNE的表达,而TBHQ处理使其表达水平显著降低。通过蛋白质免疫印迹法,我们发现TAC组心肌组织中的羰基化蛋白丰度显著升高,而TBHQ处理显著抑制TAC诱导的蛋白质羰基化水平。结论1.TBHQ显著改善压力超负荷诱导的心肌重构2. TBHQ可能通过减少心肌细胞凋亡并抑制活性醛产生,从而抑制心力衰竭进展,但与Nrf2抗氧化系统无关3. TBHQ抑制心肌细胞凋亡作用可能由Akt磷酸化介导研究背景我们之前的研究表明,叔丁基对苯二酚(tert-butylhydroquinone, TBHQ)在心肌重构过程中可通过抑制心肌细胞凋亡发挥心脏保护作用,并且Akt通路的激活可能参与介导这种作用。但是其细胞水平的具体机制尚待阐明。TBHQ是一种合成酚类抗氧化剂,由于其具有强抗脂质过氧化活性而被广泛用于食物存储。大量研究证实,TBHQ通过抗氧化、抗炎症和抗凋亡等发挥细胞保护作用。4-羟基壬烯醛(4-Hydroxynonenal)是一种主要的脂质过氧化终末产物。4-HNE做为一种氧化应激(oxidative stress)的诱导剂,与包括阿尔茨海默氏病、动脉粥样硬化、缺血再灌注、肥胖、糖尿病等多种氧化应激相关疾病的病理过程相关。目前,越来越多的证据表明,4-HNE是一种重要的信号小分子,在细胞周期、基因表达、细胞过程调控的信号通路中发挥重要作用。最近研究表明,4-HNE还可以通过多种信号通路诱导细胞凋亡。受体酪氨酸激酶(RTKs)是配体结合的跨膜蛋白,可以将细胞外环境信号传递至细胞内,激活信号通路,导致粘附、迁移,增殖、分化,存活、凋亡各种反应。进而,RTKs的活性、丰度、细胞分布及调节异常导致众多疾病的发生。胰岛素样生长因子-1受体(IGF-1R)属于RTKs。IGF-1R与其配体胰岛素样生长因子-1(IGF-1)结合后激活包括PI3K/AKT信号通路在内的众多细胞磷酸化级联通路,在生物体内发挥重要的生物功能。我们在此部分研究TBHQ是否可能通过IGF-1R/PI3K/AKT信号通路参与调控心肌细胞的凋亡作用。蛋白酪氨酸磷酸酶(PTPs)是生物体内广泛存在的催化磷酸化酪氨酸残基(pTyr)脱磷酸的酶,PTP可作为RTK的负性调控因子与RTKs共同作用精细调控细胞的内蛋白酪氨酸磷酸化水平。PTPlB是经典的蛋白酪氨酸特异PTP,是一种重要的胰岛素信号负调控蛋白。PTEN是另一种重要的Akt通路负性调控因子,与PI3K/Akt、MAPK、FAK等多种细胞信号转导通路调控有关。在本研究中,我们还试图探究TBHQ是否可能通过PTP1B或PTEN参与对RTKs的调控。研究目的1.研究TBHQ在心肌细胞水平对凋亡的调节作用2.研究PI3K/Akt信号通路在TBHQ抗心肌细胞凋亡中的作用3.探索TBHQ激活PI3K/Akt信号通路的机制,明确RTK信号通路是否参与其中研究方法1.细胞培养H9c2心肌细胞系购自于ATCC公司,培养于含有10%胎牛血清的DMEM培养基中,置于37℃细胞培养箱中,在5%CO2的环境下培养细胞。当细胞生长至融合时,用适量胰酶(0.25%)消化细胞进行传代,第3到6代之间的H9c2用于后续实验。依据既往文献报道的方法,选取1～2天的SD大鼠乳鼠提取原代心肌细胞。用胶原酶消化心脏组织。离心后收集细胞,种板培养基重悬细胞沉淀。置于细胞孵育箱内孵育2小时,弃去贴壁的成纤维细胞,种板培养基重悬上层心肌细胞,置于胶原涂层的细胞培养瓶中培养2～3天后,更换培养基为维持培养基继而进行后续实验。2.细胞活力检测用MTT法检测TBHQ和4-HNE对H9c2细胞活力的影响。以24孔细胞培养板培养H9c2细胞,每孔加入1ml含TBHQ和4-HNE的培养基。细胞培养箱内培养24小时后,每孔加入200μl MTT (5mg/ml)孵育2小时后再加入200μlDMSO。24孔培养板离心1800×g,5min,4℃。酶标仪测各孔540nm吸光度值。以DMSO处理细胞为对照(100%)计算细胞活力(%)。3.蛋白质免疫印迹经裂解液裂解细胞后迅速提取细胞总蛋白,SDS-PAGE电泳恒压分离蛋白样品,以湿式转膜法将分离的蛋白转移至硝酸纤维素膜上,经5%脱脂奶粉封闭后以特异性一抗4℃孵育过夜,随后室温孵育二抗2小时。用ECL化学发光液使目的蛋白条带显影,并用LAS-4000化学发光仪检测。4. Caspase3/7活性测定经药物处理后的细胞内加入Caspase-Glo 3/7试剂以检测细胞的Caspase3/7活性。继而将加入检测试剂的样品迅速转移至白色96孔板中,读板测定发光。5. TUNEL法检测细胞凋亡使用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡,每张切片随机选取10个视野计数TUNEL阳性细胞和总细胞数。6.统计学分析定量数据均采用均数±标准误表示,选用SPSS13.0软件以独立样本t检验或单因素方差分析及Newman-Keuls检验分析数据,P0.05被认为有统计学意义。结果1.TBHQ对心肌细胞活力无影响我们观察到,5、10、20、40μM TBHQ对心肌细胞活力无影响2. TBHQ引起H9c2细胞的Akt磷酸化用不同浓度的TBHQ处理H9c2细胞24小时,发现TBHQ在10μM到40μM浓度范围内引起明显的Akt活性增加,而1μM TBHQ对Akt并无影响。用20μM的TBHQ刺激H9c2细胞不同时间,发现TBHQ自1小时开始就显著增加Akt磷酸化水平,但随TBHQ作用时间延长,Akt的磷酸化水平并无增高趋势。3.4-HNE抑制心肌细胞活性并诱导心肌细胞凋亡我们观察到,与对照比较,10μM或20μM的4-HNE对细胞活力无显著影响,自40μM以上的4-HNE呈剂量依赖性显著降低细胞活力。我们还观察到,与对照比较,10μM的4-HNE对caspase 3/7活性无显著影响,自20μM以上的4-HNE呈剂量依赖性显著增强caspase 3/7活性。4. TBHQ抑制4-HNE引起的心肌细胞凋亡我们用TUNEL染色的方法观察到,TBHQ能显著抑制4-HNE引起的H9c2细胞凋亡。5. TBHQ通过激活PI3K/Akt信号通路抑制4-HNE引起的细胞凋亡我们发现,TBHQ抑制4-HNE诱导的caspase 3裂解,同时伴有Akt磷酸化增强。TBHQ的抗凋亡效应可以被PI3K的抑制剂wortmannin或Akt的抑制剂Akti抑制。为了验证蛋白质免疫印迹的结果,我们又检测了caspase3/7活性,并发现TBHQ可以抑制4-HNE引起的caspase3/7激活,TBHQ的这一效应同样可以被wortmannin或Akti抑制。6. TBHQ抑制4-HNE引起的原代心肌细胞凋亡Western blot结果显示,4-HNE存在与否并不影响TBHQ对原代心肌细胞激活Akt的效应。TBHQ也可以抑制4-HNE诱导的原代心肌细胞caspase 3/7激活。而且,在促心肌肥厚因子内皮素-1存在的情况下,TBHQ仍然对原代心肌细胞具有抗凋亡作用。7. PTP1B和PTEN抑制剂对TBHQ磷酸化Akt的影响我们发现,PTP1B抑制剂显著增加H9c2细胞的Akt磷酸化水平,然而,存在PTP1B制剂的条件下,TBHQ并没有进一步增加Akt磷酸化水平。我们还发现,PTEN抑制剂显著增加H9c2细胞的Akt磷酸化水平,然而,存在PTEN抑制剂的条件下,TBHQ仍可以进一步增加Akt磷酸化水平。8. TBHQ对蛋白酪氨酸磷酸化水平的影响我们发现,在5μM到40μM浓度范围内,TBHQ显著增加H9c2细胞的蛋白酪氨酸磷酸化水平。9. TBHQ对IGF-1R磷酸化水平的影响我们发现,在10μM到40μM浓度范围内,TBHQ显著增加H9c2细胞的IGF-1R磷酸化水平。结论1.TBHQ具有抗心肌细胞凋亡的作用,这种作用是PI3K/Akt通路介导的2.我们的结果提示TBHQ对PI3K/Akt信号通路的激活作用可能与PTP1B的抑制和IGF-1R信号通路活性增加有关研究背景在前两章的研究中,我们发现叔丁基对苯二酚(Tert-butylhydroquinone, TBHQ)在心肌组织和细胞中显著激活了PI3K/Akt信号系统,并在压力超负荷引起的心肌重构中发挥心脏保护作用。Akt是一种多功能的丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,亦被称为蛋白激酶B (protein kinase B, PKB),与细胞代谢、存活、迁移和基因表达等多种细胞功能相关。研究证明,Akt功能失调与多种人类疾病相关,包括：癌症、糖尿病、心血管和神经系统疾病等。Akt的活化在不同的组织中可能造成相反的结果。在某些情况下激活Akt可以起到细胞保护作用,而在另外一些情况下Akt的过度或长期激活也可以导致肿瘤细胞形成。因此,搞清楚TBHQ在不同组织中对Akt活性调节的药理作用十分必要。而这方面尚缺乏系统的比较研究。因此,在以下研究中,我们给予小鼠TBHQ整体干预后,比较了TBHQ在不同组织中对Akt的药理作用,发现TBHQ的药理作用具有组织差异性。同时在体外观察TBHQ在非心肌细胞中对Akt的影响。研究目的1. TBHQ对体外培养的人脐静脉内皮细胞和3T3成纤维细胞中Akt活性的影响2. TBHQ在整体水平对正常肝脏、肾脏、脑和主动脉组织中Akt活性的影响研究方法1.人脐静脉内皮细胞和3T3细胞的培养人脐静脉内皮细胞和3T3成纤维细胞购自于ATCC公司。分别培养于含有10%胎牛血清的完全内皮细胞培养基和DMEM培养基中,置于37℃细胞培养箱中,在5%CO2的环境下培养细胞。当人脐静脉内皮细胞和3T3成纤维细胞生长至融合时,用胰酶(0.25%)消化细胞进行传代,第3至6代的人脐静脉内皮细胞和3T3成纤维细胞用于后续实验。2.动物分组8周龄雄性C57BL/6小鼠购自于北京维通利华公司。全部动物实验均符合山东大学齐鲁医院伦理委员会对动物实验的要求和规定。选择10～12周龄的雄性小鼠进入实验研究,随机分为2组：对照组、TBHQ组。3.蛋白质免疫印迹经裂解液分别裂解组织和细胞后,迅速提取组织和细胞总蛋白,SDS-PAGE电泳分离蛋白样品,以电转移法将分离的蛋白转移至硝酸纤维素膜上,经5%脱脂奶粉封闭后以特异性一抗孵育过夜,随后室温孵育二抗。用ECL化学发光液使目的蛋白条带显影,并用LAS-4000化学发光仪检测。4.统计学分析定量数据均采用均数±标准误表示,选用SPSS13.0软件以独立样本t检验或单因素方差分析及Newman-Keuls检验分析数据,P0.05被认为有统计学意义。研究结果1. TBHQ对人脐静脉内皮细胞Akt磷酸化的影响用浓度为1、10、50μM的TBHQ分别处理人脐静脉内皮细胞24小时,用TBHQ的溶剂DMSO作为对照处理细胞,用western blot的方法检测TBHQ对人脐静脉内皮细胞Akt磷酸化的影响。我们发现,随TBHQ药物浓度增加,人脐静脉内皮细胞的磷酸化Akt表达水平逐渐升高。2. TBHQ对3T3细胞Akt磷酸化的影响用浓度为1、10、50μM的TBHQ分别处理3T3成纤维细胞24小时,用TBHQ的溶剂DMSO作为对照处理细胞,用western blot的方法检测TBHQ对3T3成纤维细胞Akt磷酸化的影响。我们发现,随TBHQ药物浓度增加,3T3细胞的磷酸化Akt表达水平逐渐升高。3. TBHQ对肝脏组织Akt磷酸化的影响用western blot的方法检测TBHQ对肝脏组织Akt磷酸化的影响。我们发现,TBHQ使肝脏组织中的磷酸化Akt水平显著增加。4. TBHQ对肾脏组织Akt磷酸化的影响用western blot的方法检测TBHQ对肾脏组织Akt磷酸化的影响。我们发现,TBHQ使肾脏组织中的磷酸化Akt水平显著增加。5. TBHQ对主动脉组织Akt磷酸化的影响用western blot的方法检测TBHQ对主动脉组织Akt磷酸化的影响。我们发现,TBHQ使主动脉组织中的磷酸化Akt水平显著增加。6. TBHQ对脑组织Akt磷酸化的影响用western blot的方法检测TBHQ对脑组织Akt磷酸化的影响。我们发现,TBHQ并未影响脑组织中的Akt磷酸化水平。结论1. TBHQ可以激活人脐静脉内皮细胞和3T3成纤维细胞中的Akt2. TBHQ整体干预可以激活小鼠肝脏、肾脏、主动脉组织中的Akt3. TBHQ整体干预未能激活小鼠脑组织中的Akt
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R541.6

【共引文献】

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本文编号：1301232