miR-17在乳腺癌中表达的临床意义及其促进乳腺癌细胞增殖的实验研究

发布时间：2017-12-22 12:14

  本文关键词：miR-17在乳腺癌中表达的临床意义及其促进乳腺癌细胞增殖的实验研究　出处：《南京医科大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：背景乳腺癌是我国女性最常见的恶性肿瘤之一。乳腺癌的发生伴随着基因、表观遗传以及各种各样分子机制的变化。随着乳腺癌的早期诊断的进步,以及放射治疗、各种辅助治疗的发展,乳腺癌的预后已经有了很大的提高,但是乳腺癌仍然是威胁广大女性生命的最常见恶性肿瘤。患者的年龄、肿瘤大小、淋巴结转移状态、组织病理学类型、病理学分级、激素受体状态常常被用来评估患者的预后以指导临床决策。然而,由于乳腺癌基因背景以及对治疗反应的多样性,这些评价乳腺癌的指标还远远不够,我们需要更多更好的生物标记物来指导早期诊断,选择合适的治疗手段以及精准的预测预后。MicroRNAs(miRNAs)是包含约20-25个核苷酸的小分子非编码RNA,它通过对目标mRNA降解和翻译抑制起着转录后调控的作用。大量研究表明,miRNAs的异常表达和包括肿瘤在内的许多疾病息息相关。一些miRNA可以作为抑癌基因或促癌基因在乳腺癌的形成过程中起着极为重要的作用,它们可以调控细胞增殖、分化、肿瘤转移以及肿瘤血管形成。现今用它作为肿瘤诊断、预后、预测治疗反应的生物标记物已经越来越得到学者们的一致认同。近年来,研究表明miR-17在多种肿瘤的形成中的发挥着重要作用。而关于miR-17在乳腺癌中的表达模式及临床意义方面尚未有最新报道。目的本实验我们主要研究miR-17表达水平和乳腺癌患者临床病理特征的关系,探讨miR-17表达水平对乳腺癌总生存率(OS)的影响。同时通过实验明确miR-17的表达情况对乳腺癌细胞系的影响,为miR-17可能作为乳腺癌诊断、预后的生物学指标奠定基础。方法我们收集了 2008年1月至2009年12月期间在南京医科大学附属常州市第二人民医院住院手术的乳腺癌患者标本132例。通过qRT-PCR检测miR-17在乳腺癌组织与癌旁组织中的表达情况。比较乳腺癌组织和癌旁正常组织miR-17表达的差异,并且观察了不同病理分期的乳腺癌表达miR-17的差异。同时我们通过miR-17表达水平高低的不同,将患者分成miR-17高表达组和miR-17低表达组,分析两组病人ER、PR、HER-2、CD44、COX-2、EGFR、PGP状态以及淋巴结转移情况的差异。对于临床资料,我们还通过Kaplan-Meier法和log-rank检验来计算分析了 miR-17高表达组和miR-17低表达组从手术确定乳腺癌开始到随访期结束的总生存期的差异。我们假设miR-17在乳腺癌中扮演着癌基因的角色,为了验证这个假设,我们检测了 miR-17在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-435S、MDA-MB-231和正常乳腺细胞系MCF10A中表达差异。在乳腺癌细胞MCF-7、MDA-MB-231中转染miR-17 mimics或miR-17 inhibitor,通过MTT的方法观察其对乳腺癌细胞增殖的影响。另外,我们还通过流式细胞检测技术检测了 miR-17对细胞周期的影响。最后通过裸鼠移植瘤实验,验证miR-17的体内成瘤能力。将20只小鼠随机分成两组,建立稳定的移植瘤模型,每7天测量肿瘤体积,42天后处死小鼠,评估肿瘤。结果乳腺癌组织和癌旁正常组织相比,miR-17的表达显著增高(p0.0001,n=40)。另外,病理分期越高,miR-17 的表达越高(Stage1 and Stage 2,p =0.5612;Stage 1 and Stage 3,p0.05;Stage 1 and Stage 4,p0.05)。数据显示,miR-17 高表达组和低表达组ER表达水平和Her-2表达水平有差异(p0.05)。年龄、PR、CD44、COX-2、EGFR、PGP状态以及淋巴结转移情况未见明显差异。miR-17低表达组和高表达组相比总生存期较长,两者有统计学差异(P0.05,n=36)。体外实验发现,与正常乳腺细胞系MCF10A相比,miR-17在乳腺癌细胞系MCF-7、MDA-MB-435S、MDA-MB-231 中表达水平更高。miR-17 mimics 促进乳腺癌细胞增殖,而miR-17 inhibitor抑制乳腺癌细胞增殖。同时发现miR17 inhibitor将乳腺癌细胞阻滞在细胞周期S期。通过移植瘤实验,我们发现,agomiR-17组小鼠的肿瘤更大,表明miR-17可以在体内诱导肿瘤增长。结论本研究表明,miR-17在乳腺癌组织和乳腺癌细胞系中表达上调,miR-17上调可以促进乳腺癌细胞增殖。在乳腺癌患者中miR-17高表达,总生存率较低。提示miR-17可能可以成为乳腺癌诊断和治疗的新的生物标记物。
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9

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本文编号：1319475