WRAP53及其相互作用蛋白在肺腺癌发生发展过程中的作用及机制研究

发布时间：2017-12-25 15:03

本文关键词：WRAP53及其相互作用蛋白在肺腺癌发生发展过程中的作用及机制研究　出处：《浙江大学》2017年博士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：第一部分:WRAP53高表达在肺腺癌发生发展过程中的作用及机制探讨目的:通过临床、细胞生物学及生物信息学探索P53基因WD反义重复序列(WRAP53)蛋白高表达在肺腺癌发生发展过程中的作用。方法:我们检测了本院收集的75对肿瘤组织和对应癌旁组织的临床病理组织中WRAP53表达水平,然后分析了 WRAP53高表达患者的临床特征;我们通过RNAi技术沉默了 WRAP53蛋白的表达,并观察其对肺腺癌增殖能力的影响;通过细胞周期和凋亡检测观察肺腺癌细胞增殖能力减弱的原因;通过细胞周期同步化获得处于S期早期的A549细胞;通过免疫共沉淀(Co-IP)和液相色谱/质谱法(LC/MS)得到在S期早期和WRAP53蛋白发生相互作用的蛋白。结果:荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)结果显示WRAP53表达量在肿瘤组织中较癌旁组织中更高;WRAP53高表达在肿瘤大小超过3cm的患者和小于3cm的患者中存在显著的统计学差异(p0.05),肿瘤超过3cm的患者WRAP53更有可能发生高表达;WRAP53蛋白表达量下降可导致肺腺癌细胞增殖能力减弱,原因为细胞G1/期周期阻滞;Co-IP联用LC/MS发现S期早期A549细胞中和WRAP53发生相互作用的蛋白若干。结论:通过上述研究证实WRAP53在肺腺癌中的临床、细胞生物学和生物信息学的意义,其互作蛋白的进一步研究有助于我们更好的认识其在肺腺癌中扮演的角色。第二部分:RUVBL1蛋白下调通过多种机制抑制肺腺癌肿瘤增殖的研究目的:第一部分研究中发现了细胞S期早期和WRAP53发生相互作用的蛋白Ruvb样ATP酶1(RUVBL1),本部分研究旨在探索RUVBL1蛋白表达下调在肺腺癌细胞中扮演的角色。方法:我们检测了本院收集的72对肿瘤组织和对应癌旁组织的临床病理组织中RUVBL1表达水平,也在肺腺癌细胞系和正常肺细胞系中进行了验证;我们通过RNAi技术沉默了 RUVBL1蛋白的表达,并观察其对肺腺癌增殖能力的影响;通过细胞周期和凋亡检测观察肺腺癌细胞增殖能力减弱的原因;通过免疫印迹实验探索引起细胞周期阻滞出现的机制并通过回复实验进行了验证;借助RUVBL1过表达实验对上述结果进行了验证;最后通过免疫荧光和免疫印迹实验观察RUVBL1下调引发的细胞内质网应激现象。结果:RUVBL1表达在肺腺癌组织较癌旁组织更高;在肺腺癌细胞系比正常肺细胞系高;RUVBL1蛋白表达量下降可导致肺腺癌细胞增殖能力减弱,而出现减弱的原因为细胞G1/期周期阻滞;而RUVBL1下调引发的周期阻滞是由AKT/GSK-3β/cyclin D1通路抑制及细胞内质网应激IRE1α通路激活引发的。肺腺癌细胞中RUVBL1的过表达验证实验结果也验证了上述结果。结论:通过上述研究首次证实RUVBL1在肺腺癌发生发展过程中具有重要作用,其作为有前途的临床诊疗目的蛋白值得更进一步研究。第三部分:HSPA2蛋白下调通过多种机制抑制肺腺癌肿瘤增殖的研究目的:第一部分研究中发现了细胞S期早期和WRAP53发生相互作用的热休克蛋白A2(HSPA2),本部分研究旨在探索HSPA2蛋白表达下调在肺腺癌细胞中扮演的角色。方法:我们检测了本院收集的85对肿瘤组织和对应癌旁组织的临床病理组织中HSPA2表达水平,也在肺腺癌细胞系和正常肺细胞系中进行了验证;我们通过RNAi技术沉默了 HSPA2蛋白的表达,并观察其对肺腺癌增殖能力的影响;通过细胞周期和凋亡检测观察肺腺癌细胞增殖能力减弱的原因;通过免疫印迹实验探索引起细胞周期阻滞出现的机制并通过回复实验进行了验证;最后通过免疫荧光和免疫印迹实验观察HSPA2下调引发的细胞内质网应激现象。结果:HSPA2表达在肺腺癌组织较癌旁组织更高;在肺腺癌细胞系比正常肺细胞系高;HSPA2蛋白表达量下降可导致肺腺癌细胞增殖能力减弱,而出现减弱的原因为细胞G1/期周期阻滞;而HSPA2下调引发的周期阻滞是由磷酸化Erk1/2通路磷酸化及细胞内质网应激IRE1α、PERK通路激活引发的。肺腺癌细胞中RUVBL1的过表达验证实验结果也验证了上述结果。结论:通过上述研究首次证实HSPA2在肺腺癌发生发展过程中具有重要作用,其作为有前途的临床诊疗目的蛋白值得更进一步研究。
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R734.2

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