P物质快速激活经典Wnt通路调控MC3T3-E1细胞凋亡
本文关键词：P物质快速激活经典Wnt通路调控MC3T3-E1细胞凋亡 出处：《南方医科大学》2017年博士论文 论文类型：学位论文
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【摘要】：创伤、感染等多种原因造成的骨折延迟愈合及骨折不愈合一直是严重影响患者临床预后及生存质量的医学难题。一方面,骨组织工程及外固定架等技术的快速发展,极大地改善了此类患者的预后;另一方面,对骨折再生与重建过程中多种因素调控机制的深入研究,不仅全面阐释了骨再生过程中的复杂病理生理学机制,更为临床治疗该类疾患提供了全新的思路和坚实的理论基础。大量研究已证实:神经因素对骨折愈合、骨组织再生修复具有确切的生物调控作用。其中,以降钙素基因相关肽(Calcitonin gene-related peptide,CGRP)和P物质(Substance P,SP)为代表的神经肽类物质是神经因素发挥调控作用的关键因素。本课题通过检测P物质对小鼠MC3T3-E1成骨细胞去血清诱导凋亡的影响,以阐明P物质在去血清诱导凋亡过程中的生物学效应,并进一步探讨P物质激活经典wnt信号通路发挥调控作用的机制。目的:(1)培养小鼠MC3T3-E1成骨细胞,检测去血清诱导凋亡中NK-1受体表达的变化;(2)探讨去血清凋亡对小鼠MC3T3-E1成骨细胞经典wnt信号通路的影响;(3)探讨P物质在小鼠MC3T3-E1成骨细胞去血清诱导凋亡过程中的生物学效应;(4)探讨去血清诱导凋亡过程中,P物质通过经典Wnt信号通路调控小鼠MC3T3-E1成骨细胞生物学效应的作用机制。方法:小鼠MC3T3-E1成骨细胞的细胞培养、小鼠MC3T3-E1成骨细胞的化学染色鉴定、PCR检测目的基因表达、Western Blot检测目的蛋白表达、免疫荧光标记相关抗体-FITC染色等。实验设计分组:对照组、P物质组、P物质+NK-1受体拮抗剂组、P物质+Wnt通路拮抗剂DKK组。结果:(1)本实验所采用的小鼠MC3T3-E1细胞具有成骨特性并可以稳定表达NK-1受体,成骨类细胞持续表达NK-1受体是神经肽类物质发挥调控作用的基础;(2)去血清处理可以诱导小鼠MC3T3-E1细胞发生凋亡改变。去血清处理诱导MC3T3-E1细胞凋亡的同时激活经经典Wnt信号通路。(3)P物质抑制小鼠MC3T3-E1细胞去血清诱导凋亡过程中Bax/Bcl-2和凋亡蛋白3等凋亡相关蛋白的表达,P物质具有明显的抗凋亡作用;(4)P物质可快速激活小鼠MC3T3-E1细胞去血清诱导凋亡过程中ββ-cantenin的表达,并促进该蛋白进入细胞核,其速率明显快于去血清诱导凋亡激活经典Wnt信号通路的速率。结论:P物质可在去血清诱导小鼠MC3T3-E1细胞凋亡激活经典Wnt信号通路的基础上,更快以及更大程度地激活经典Wnt信号通路。本研究发现神经肽P物质可通过快速激活小鼠MC3T3-E1成骨细胞的经典Wnt信号通路,拮抗去血清诱导的成骨细胞凋亡。本研究通过初步探讨“P物质—去血清—凋亡—经典Wnt信号通路”轴线中各因素的相互作用关系,进一步揭示P物质在骨再生过程中的作用机制。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R683
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，本文编号：1348599
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