MicroRNA-761在乳腺癌中的表达及生物学功能研究
本文选题：乳腺癌 切入点：microRNA-761 出处：《郑州大学》2017年博士论文 论文类型：学位论文
【摘要】：第一部分MicroRNA-761在乳腺癌中的表达及生物学功能研究目的MicroRNA(miRNA)是小的内源性非编码单链RNA,它们调控许多生理和病理过程。本部分旨在研究miR-761在乳腺癌中的表达及功能。方法收集56例原发性乳腺癌的病人肿瘤及癌旁组织标本(19例TNBC与37例非TNBC),提取RNA,定量PCR法检测miR-761的表达。构建miR-761表达质粒,建立miR-761稳定表达细胞系。应用增殖,集落形成,迁移和侵袭实验检测miR-761在体外对乳腺癌细胞行为的影响。建立皮下移植瘤模型分析miR-761对乳腺癌细胞成瘤的影响。经尾静脉注射乳腺癌细胞建立肺转移模型,研究miR-761对肺转移的影响。结果miR-761在原发性乳腺癌组织中表达显著上调(P=0.0098)。与非TNBC组织相比较,TNBC组织中miR-761表达显著上调(P=0.0136)。相比于非恶性MCF10A乳腺上皮细胞中miR-761的表达情况,在乳腺癌细胞中观察到miR-761表达显著增加(P0.05),特别是在MDA-MB-453和MDA-MB-468细胞中。较非TNBC细胞MCF-7和T-47D,这些细胞miR-761表达水平呈显著增加的趋势(P0.05)。与未转染的对照细胞相比较,外源性过表达miR-761能够增强MDA-MB-231细胞的增殖和集落形成的能力。相反,miR-761表达下调则导致MDA-MB-231细增殖能力和集落形成显著下降。外源性过表达miR-761显著(P0.05)增加MDA-MB-453细胞迁移和侵袭能力,而miR-761表达下调导致这些细胞的迁移和侵袭能力有明显的降低。在MDA-MB-231细胞中得到的结果非常相似。这些结果表明,miR-761具有促进对TNBC细胞侵袭活性的能力。过度表达miR-761的MDA-MB-231裸鼠移植瘤的体积显著(P0.05)高于对照组肿瘤体积。与对照组相比,被接种4周后miR-761过表达组的肿瘤平均重量平均增加85%(P=0.0241)。我们也把miR-761或空载体转染MDA-MB-231细胞注射裸鼠尾静脉。在接种5周后评估肺部转移性病变的发生情况。我们发现miR-761过表达组的肺转移结节数比对照空载体组明显增加(P=0.0019)。结论miR-761在乳腺癌尤其是TNBC中表达显著增加。miR-761可以增强乳腺癌细胞增殖和侵袭能力并可以促进乳腺癌移植瘤生长和肺转移。第二部分MicroRNA-761通过抑制TRIM29表达促进乳腺癌生长和转移的机制研究目的MicroRNA-761通过抑制TRIM29表达促进乳腺癌生长和转移的机制研究。方法基于miRDB(http://mirdb.org/miRDB/)算法预测miR-761的靶基因。构建TRIM29表达质粒,并与miR-761共转至乳腺癌细胞中,观察其逆转效应。克隆野生型或突变型TRIM29的3’-UTR到荧光素酶基因的下游从而产生对应的3’-UTR报告基因。转染0.2μg各种不同3’-UTR报告克隆,0.02μg p RL-TK和50 nm miR-761模拟物或对照miRNA进入293T细胞。用表达Renilla荧光酶的p RL-TK载体作为荧光素酶活性的内部对照。应用Western blot法检测miR-761对TRIM29蛋白表达的影响。结果TRIM293’-UTR上含有一个miR-761的结合位点。miR-761表达水平与TRIM29蛋白表达水平呈显著负相关(r=-0.452,P=0.0126)。外源性表达的miR-761显著(P0.05)降低携带野生型TRIM293’-UTR的报告基因的活性,外源性表达的miR-761对携带突变型TRIM293’-UTR的报告基因的活性并没有影响。在报告基因检测法一致,我们发现在MDA-MB-231细胞中过表达miR-761模拟物之后,内源性TRIM29表达明显减少,而转染anti-miR-761后,TRIM29表达显著增高。另外,在小鼠模型中,过表达miR-761的肿瘤中TRIM29的表达水平显著下降。当该质粒与miR-761模仿物共转染进入MDA-MB-231细胞时,miR-761-介导的TRIM29表达下调的作用完全消失。在MDA-MB-231细胞中过表达TRIM29能够降低过表达miR-761模仿物所诱导的人乳腺癌细胞的增殖和浸润。结论TRIM29是一个miR-761的靶基因,miR-761与TRIM29在乳腺癌标本中的表达水平呈负相关。miR-761通过靶向抑制TRIM29促进乳腺癌生长和转移。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R737.9
【相似文献】
相关期刊论文 前10条
1 刘红;乳腺癌骨转移中西医结合治疗20例报告[J];江西中医学院学报;2000年S1期
2 刘燕,权瑞;乳腺癌骨转移的放射治疗35例[J];中国肿瘤临床与康复;2000年03期
3 陈辉利,赵青梅,杜光祖;乳腺癌骨转移3年以上存活病例分析[J];华南国防医学杂志;2000年01期
4 巨爱平;乳腺癌骨转移12例综合治疗临床观察[J];临床肿瘤学杂志;2001年01期
5 蒋国勤;乳腺癌骨转移模型的建立[J];中国普外基础与临床杂志;2001年05期
6 王跃珍,孙晓江,刘林林,孙宝胜,吕鹏;208例乳腺癌骨转移相关因素分析[J];中国实验诊断学;2004年04期
7 柴枫;;乳腺癌骨转移86例回顾性分析[J];实用医药杂志;2006年05期
8 徐海滨;胡祖健;胡望华;史红仙;何俊玲;黄建;;乳腺癌骨转移综合治疗初探[J];中华乳腺病杂志(电子版);2007年01期
9 叶谦;;100例乳腺癌患者核素骨显像结果分析[J];实用医技杂志;2007年09期
10 周围;周恩相;王泽强;郭琼;;乳腺癌骨转移57例回顾性分析[J];实用医药杂志;2007年05期
相关会议论文 前10条
1 魏志真;董峰;;乳腺癌骨转移的临床特点分析[A];中华医学会放射医学与防护学分会第三次全中国青年学术交流会论文摘要汇编[C];2001年
2 魏志真;董峰;;乳腺癌骨转移的临床特点分析[A];中华医学会放射医学与防护学分会第三次全国中青年学术交流会论文汇编[C];2001年
3 徐海滨;胡祖健;胡望华;史红仙;何俊玲;黄建;;乳腺癌骨转移综合治疗初探[A];2005年浙江省外科学术会议论文汇编[C];2005年
4 蔡钢;陈佳艺;朱骥;俞晓立;章真;郭小毛;胡超苏;;乳腺癌骨转移的放射治疗和预后因素[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年
5 蔡钢;陈佳艺;朱骥;俞晓立;章真;郭小毛;胡超苏;;乳腺癌骨转移的放射治疗和预后因素[A];2007第六届全国放射肿瘤学学术年会论文集[C];2007年
6 刘兆U，
本文编号：1639613
本文链接：https://www.wllwen.com/shoufeilunwen/yxlbs/1639613.html
