西达本胺单药或联合地西他滨对白血病细胞株（HL60、NB4）的作用研究

发布时间：2018-03-30 15:19

本文选题：西达本胺　切入点：地西他滨　出处：《南京医科大学》2017年博士论文

【摘要】：目的:探讨西达本胺、地西他滨以及两药联合对白血病细胞株HL60及NB4的增殖抑制作用及其可能的相关分子机制。方法:以不同浓度的西达本胺、地西他滨单药及两药联合处理HL60和NB4细胞,采用CCK-8法测定HL60、NB4细胞的增殖抑制情况,并用CompuSyn软件分析两药协同效果;采用倒置显微镜观察药物处理后细胞形态变化;AnnexinV/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡情况;DNA Ladder法检测细胞凋亡条带;PI染色流式细胞仪检测细胞周期变化;实时定量PCR(RT-PCR)技术来检测凋亡相关基因(Bax、Bcl-2、Caspase-3)mRNA表达水平;Western Blot检测p21、Procaspase-3、Bax及Bcl-2蛋白的表达情况;ELISA法测定西达本胺对组蛋白去乙酰化酶的抑制作用以及Western Blot检测西达本胺干预后组蛋白H3(Histone H3)的表达情况。所有实验均重复3次,结果以均数±标准差((?)±s,%)表示,P0.05认为有统计学意义。结果:1.西达本胺能明显抑制白血病细胞株HL60及NB4的增殖,在0.25-8 μmol/L的浓度范围内,其抑制作用可呈剂量和时间依赖性(P0.05);地西他滨在0.5-100μmol/L的浓度范围内,其对白血病细胞株HL60及NB4的增殖抑制作用也呈剂量及时间依赖性(P0.05);西达本胺联合地西他滨能明显增加对白血病细胞株HL60及NB4的抑制作用,两药联合作用强于单药(P0.05),CompuSyn软件分析表明两个药物之间有显著的协同抗白血病效果。2.西达本胺、地西他滨单药或两药联合处理后,倒置显微镜下观察可见HL60、NB4细胞出现的细胞死亡形态改变。3.西达本胺有效地抑制组蛋白去乙酰化酶活性,诱导乙酰化组蛋白H3表达水平升高。4.西达本胺可使HL60和NB4细胞阻滞于G0/G1期,而地西他滨使HL60和NB4细胞的G2/M期细胞比例明显增加,两药联合组以G2/M期增加为主。Western Blot检测细胞周期调节蛋白p21表达水平明显提高。5.西达本胺、地西他滨单药或联合用药后,HL60及NB4白血病细胞的凋亡率明显增高(P0.05),联合用药组细胞凋亡率显著高于单独用药组(P0.05)。单药组和联合用药组均可引起Bax、Caspase-3蛋白表达水平增加、Bcl-2蛋白表达水平下降。结论:1.西达本胺、地西他滨单药均能明显抑制白血病细胞株HL60、NB4的增殖,并呈剂量及时间依赖性;两药联合则能显著抑制HL60、NB4细胞的增殖,两药具有协同性。2.西达本胺、地西他滨单药及两药联合对HL60、NB4细胞增殖抑制作用是通过诱导凋亡及周期阻滞来实现的。3.西达本胺是通过抑制组蛋白去乙酰化酶活性,上调乙酰化组蛋白H3水平发挥作用的。4.促进HL60、NB4细胞凋亡的可能机制为直接或间接增加p21、Caspase-3蛋白的表达,调控Bcl-2家族蛋白。
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【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R733.7

【参考文献】