补肾活血中药对膝骨关节炎免疫微环境的调控作用及其机制研究

发布时间：2018-04-15 02:39

本文选题：骨关节炎 + 免疫微环境　；参考：《广州中医药大学》2017年博士论文

【摘要】：目的:1动物实验建立骨关节炎(Osteoarthritis,OA)模型,分析OA过程中免疫炎症信号表达变化,并通过补肾活血中药干预,探讨中药通过调控免疫微环境治疗OA的机制。2临床研究展开随机对照试验,评价补肾活血中药治疗OA患者的疗效和安全性。方法:1动物实验将24只C57/BL6小鼠随机分为A、B、C三组,对B、C组所有小鼠右侧膝关节腔内注射II型胶原酶溶液,建立OA模型。建模完成后,进行药物干预实验,A组为正常对照组,给予生理盐水灌胃,灌胃量为0.2ml/10g,每日1次,持续4周;B组为造模组,给予生理盐水灌胃,灌胃量为0.2ml/10g,每日1次,持续4周;C组为中药组,按人体推荐剂量进行等效剂量换算,配制龙鳖胶囊溶液,灌胃量为0.2ml/10g,每日1次,持续4周。干预4周后,处死小鼠采集血清及关节组织进行检测。用ELISA检测血清IL-6表达水平,用Western blot检测关节软骨中TLR4、MyD88、IRF-7、MMP-13表达水平。制作关节病理切片,分别使用HE染色观察关节结构变化,Masson染色观察胶原退变程度,番红0-固绿染色结合OARSI实验动物病理学评分评估关节软骨破坏程度。2临床研究招募48名确诊为膝OA的受试者,通过简单随机法将受试者随机分配至试验组和对照组。试验组:予口服龙鳖胶囊,每次4粒,每日3次;口服塞来昔布胶囊,每次1片,每日1次。对照组:予口服龙鳖胶囊安慰剂,每次4粒,每日3次;口服塞来昔布胶囊,每次1片,每日1次。两组除药物治疗外,均采用相同的基础治疗,治疗时间为4周。比较两组受试者治疗前后的WOMAC评分、SF-36评分、中医证候疗效评定以及不良事件,评价龙鳖胶囊治疗膝OA的疗效及安全性。结果:1动物实验1.1血清ELISA结果显示:三组之间IL-6表达差异具有统计学意义,P0.01。造模后,B组血清IL-6表达水平明显高于A组和C组(P0.05)。通过补肾活血中药干预,C组血清IL-6水平明显低于B组(P0.05),而与A组无明显差异(P0.05)。1.2 IRF-7表达水平:各组间IRF-7表达水平有显著差异(P0.05);通过两两比较,B组IRF-7表达水平高于A组、C组,差异有统计学意义(P0.05);C组IRF-7表达水平高于A组,但差异无统计学意义(P0.05)。1.3 TLR4表达水平:各组间TLR4表达水平有显著差异(P0.01);通过两两比较,B、C组TLR4表达水平均高于A组,差异有统计学意义(P0.05);B组TLR4表达水平高于C组,差异有统计学意义(P0.05)。1.4 MyD88表达水平:各组间MyD88表达水平有显著差异(P0.05);通过两两比较,B组MyD88表达水平高于A、C组,差异有统计学意义(P0.05);C组MyD88表达水平高于A组,但差异无统计学意义(P0.05)。1.5 MMP-13表达水平:各组间MMP-13表达水平有显著差异(P0.05);通过两两比较,B组MMP-13表达水平高于A、C组,差异有统计学意义(P0.05);C组MMP-13表达水平高于A组,但差异无统计学意义(P0.05)。1.6 OARSI病理学评分:在股骨侧,各组间OARSI评分有显著差异,差异有统计学意义(P0.01);B组OARSI评分最高,明显高于A、C两组,差异有统计学意义(P0.05);C组评分高于A组,差异有统计学意义(P0.05)。在胫骨侧,各组间OARSI评分有显著差异,差异有统计学意义(P0.01);B、C两组OARSI评分均高于A组,差异有统计学意义(P0.05);B组评分高于C组,但差异无统计学意义(P0.05)。2临床试验2.1 WOMAC疼痛评分:经过4周治疗后,两组WOMAC疼痛评分均比治疗前下降,差异有统计学意义(P0.01)。治疗后两组之间比较,试验组WOMAC疼痛评分低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),说明试验组改善OA疼痛优于对照组。2.2 WOMAC生理功能评分:与治疗前比较,两组WOMAC生理功能评分均有所下降,差异有统计学意义(P0.01)。治疗后两组之间比较,试验组WOMAC生理功能评分低于对照组,差异有统计学意义(P0.05),说明试验组改善OA生理功能方面优于对照组。2.3 WOMAC生理功能评分比较:与治疗前比较,两组WOMAC僵硬评分无明显改善,差异无统计学意义(P0.05)。治疗后两组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),说明试验组和对照组均没有改善僵硬的作用。2.4 SF-36 PCS评分:与治疗前对比,两组PCS评分均有所上升,差异有统计学意义(P0.05)。治疗后两组之间比较,试验组PCS评分高于对照组,差异有统计学意义(P0.05),说明试验组改善PCS评分优于对照组。2.5SF-36MCS评分:与治疗前比较,两组MCS评分均有上升,但差异无统计学意义(P0.05)。治疗后两组之间比较,差异无统计学意义(P0.05),说明试验组和对照均未明显改善MCS。2.6中医证候评分:与治疗前比较,两组中医证候评均有所下降,差异有统计学意义(P0.01)。治疗后两组之间比较,试验组中医证候评分低于对照组,差异有统计学意义(P0.01),说明试验组能明显改善中医证候。2.7疗效评定:试验组总有效率为91.67%,对照组总有效率83.33%,试验组疗效优于对照组,差异有统计学意义(P0.05)。结论:1动物实验造模后,TLR4、IRF-7、MyD88、IL-6、MMP-13均表达上调,免疫炎症反应与OA严重程度呈正相关。通过补肾活血中药干预后,上述蛋白表达均有所下降,说明补肾活血中药可能通过调控TLR4/MyD88信号通路,抑制IRF-7异常表达,使IL-6分泌水平下降,从而减少MMP-13的表达,缓解炎症并延缓关节破坏。2临床试验临床研究结果表明龙鳖胶囊联合塞来昔布胶囊或单纯使用塞来昔布胶囊治疗膝OA,均可有效缓解疼痛、改善膝关节生理功能,同时还可改善患者生活质量,但联合用药的疗效优于单纯使用塞来昔布胶囊;此外,联合应用龙鳖胶囊与单独使用塞来昔布胶囊的安全性相当。本临床研究说明,龙鳖胶囊是治疗膝OA的安全有效药物。
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【学位授予单位】：广州中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R274.9

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