趋化因子CXCL13在肝细胞癌中的表达及作用机制研究

发布时间：2018-04-18 21:43

  本文选题：肝细胞癌 + 趋化因子　； 参考：《吉林大学》2017年博士论文

【摘要】：肝细胞癌(HCC)是原发于肝脏的恶性肿瘤,居全球恶性肿瘤死因的第3位,全世界范围内平均每年有750,000新增病例,且发病率仍逐年上升。因此,HCC发病机制的研究及诊治手段的改进是最重要的全球公共卫生问题之一。目前已确认了许多HCC的主要危险因素,包括肝炎病毒感染、酗酒及其他慢性肝脏疾病等,无论何种启动因素,慢性炎症均是HCC发生发展过程中最为重要的环节,从炎症到肿瘤,其中涉及到各种免疫组分的相互作用及精细调控,肿瘤所生长的微环境改变及重要信号通路的异常活化都是HCC发生发展的重要因素,而整个调控网络中涉及到的关键因子一直是肿瘤研究的热点,同时有望为HCC的诊断和治疗提供新的靶点。趋化因子是机体内一类结构功能相似、能够趋化靶细胞定向移动的小分子蛋白多肽,因其对血管生成、免疫调节及炎症过程具有重要调控作用而参与肿瘤的发生发展。CXCL13是CXC趋化因子家族中的一员,主要分布于肝脏、血清、淋巴结和胃中,其中肝脏占近50%。CXCL13主要对B细胞具有趋化作用,同时对部分T细胞也有一定的调控作用,从而参与免疫调节。近年来发现,CXCL13及其受体CXCR5参与了许多恶性肿瘤的发生发展,包括肺癌、乳腺癌、结肠癌、前列腺癌等,机制涉及JNK、ERK等多个信号通路的异常活化及诱导淋巴结转移等。同时,许多研究也发现CXCL13与肝脏疾病有着密切关联,如丙型肝炎、肝纤维化及原发性胆汁淤积性肝硬化的病人均有CXCL13的高表达,提示其可能参与慢性肝损伤、炎症及纤维化过程,而CXCL13是否、并如何参与HCC的疾病进程尚无报道,本研究拟对CXCL13在人HCC组织及外周血中的表达及相关作用机制进行探讨。目的:(1)分析CXCL13在人HCC组织及外周血中的表达情况,并探讨其与相关实验室指标间的联系;(2)研究CXCL13对T细胞分泌细胞因子及B细胞分泌IgG亚类的影响,探讨其对HCC肿瘤微环境的调控作用;(3)研究CXCL13及其受体CXCR5与Wnt/β-catenin信号通路之间的相互调控关系。方法:(1)选取32例临床不同分期的HCC病人及12例健康对照者,分别应用RT-PCR及Western blot方法检测HCC手术切除标本中CXCL13的m RNA及蛋白表达水平,应用ELISA方法检测HCC病人及健康对照者外周血中CXCL13浓度,同时探讨其与HCC临床分期及与相关实验室指标之间的关系;(2)分离健康对照者外周血中PBMC,加入肝癌细胞系Hep G2培养上清进行培养,并分别于体外刺激T、B淋巴细胞活化,应用ELISA方法检测CXCL13及其抑制剂地塞米松对上清中细胞因子IL-4、IL-6、IL-12、IL-17及四种IgG亚类(IgG1、IgG2、IgG3、IgG4)水平的影响;(3)体外培养Hep G2细胞,分别应用Wnt/β-catenin通路激活剂Li Cl、阻断剂DKK-1、CXCL13及地塞米松处理细胞,Western blot方法检测CXCL13/CXCR5与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β的相互调控表达情况。结果:(1)RT-PCR和Westernblot方法检测肝癌组织中CXCL13的表达水平,发现CXCL13的m RNA及蛋白表达水平均随着临床分期进展而增高;ELISA方法检测外周血中CXCL13的浓度,结果显示肝癌患者外周血中CXCL13水平明显高于健康对照组,且肝癌患者随着临床分期的进展,血清中CXCL13的浓度呈逐渐上升趋势,CXCL13水平与ALT及AST浓度之间分别呈正相关;(2)健康对照组中分离纯化出的PBMC细胞加入Hep G2细胞培养液上清进行培养,加入CXCL13可以增加细胞因子IL-12及IL-17的分泌,而地塞米松组则可以降低IL-12及IL-17的分泌,加入CXCL13还可以增加IgG4亚类的分泌;(3)Western blot方法检测CXCL13/CXCR5与Wnt/β-catenin信号通路关键分子β-catenin、GSK-3β、p-GSK-3β的相互调控表达情况,应用Wnt/β-catenin通路激活剂Li Cl能够明显提高CXCL13及CXCR5的表达水平,而阻断剂DKK-1则导致CXCL13及CXCR5的表达水平下降;CXCL13处理细胞后,p-GSK-3β表达下调,β-catenin的表达明显增加,Wnt通路活化,而地塞米松处理细胞后,p-GSK-3β表达升高,而β-catenin表达明显下降,Wnt通路受抑。结论:CXCL13在人HCC组织的表达及外周血中的浓度随肝癌进展而增高,且与ALT、AST呈正相关,其可能通过诱导IL-12、IL-17及IgG4的分泌而影响肿瘤微环境,并与Wnt/β-catenin通路正反馈相互调控表达来促进HCC的发生发展,有望为HCC的诊断及治疗提供一个新的靶点。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R735.7

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本文编号：1770212