NEDD9在膀胱癌转移中的作用研究

发布时间：2016-11-24 04:43

  本文关键词：NEDD9在膀胱癌转移中的作用研究，由笔耕文化传播整理发布。

《浙江大学》 2015年

NEDD9在膀胱癌转移中的作用研究

饶大庞  

【摘要】：背景：膀胱癌是泌尿生殖系统最常见的恶性肿瘤之一,其临床特点是肿瘤多发和复发率高。目前,已在世界范围的认可的治疗方法是根治性手术为主的综合疗法,但并未给患者生存期带来突破性改善。膀胱癌的发病机制尚未完全阐明,目前引发膀胱癌死亡的主要原因是演进期膀胱癌的转移和复发,认为与多基因、多层次的细胞信号网络紊乱有关,而膀胱癌转移的分子机理尚不完全明了。因此,寻找能够作为膀胱癌早期诊断的新治疗靶点的生物分子和标记物,明确膀胱癌发生、发展及浸润转移的分子机制具有重要的意义。NEDD9 (Neural precursor cell Expressed Developmentally Down-regulated 9)是一种细胞骨架蛋白,在多种常见恶性肿瘤组织中呈现高表达状态,并已证实其是一种与肿瘤发生、侵袭转移相关的分子,在肿瘤的发展过程中发挥重要的作用。然而对NEDD9在膀胱癌中所发挥作用的研究在国内外鲜有文献报道。NEDD9和膀胱癌的发生发展是否有相关性是本研究需要探讨的核心。目的：检测膀胱癌组织和正常正常膀胱组织中NEDD9 mRNA及蛋白的表达,并分析其与膀胱癌浸润转移的关系。上调或下调膀胱癌细胞株中NEDD9的表达,观察NEDD9表达水平改变对膀胱癌细胞生长、凋亡、转移及侵袭力的影响。方法：1. NEDD9在膀胱癌组织及癌旁组织中的表达差别及意义收集24对配对的组织标本,采用荧光定量RT-PCR、免疫组化SP法及Western blot检测各组组织中NEDD9mRNA及蛋白的相对表达量；并统计分析NEDD9在膀胱癌及癌旁膀胱黏膜组织中的表达差异,以及NEDD9表达量与膀胱癌分化程度的相关性。2. NEDD9对膀胱癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响采用荧光定量RT-PCR及western blot法分析膀胱癌细胞株EJ,T24,5637,RT-4中NEDD9本底表达水平,利用NEDD9过表达腺病毒及NEDD9 siRNA,上调或下调膀胱癌细胞株中NEDD9的表达,运用MTT法,流式细胞技术,单层细胞划痕实验,transwell小室迁移及侵袭实验,观察NEDD9表达水平改变对膀胱癌细胞生长、凋亡、转移及侵袭力的影响。结果：1. NEDD9在膀胱癌组织中及癌旁组织中的表达差别及意义在收集的24例膀胱癌组织标本中,免疫组化结果显示与正常膀胱组织相比,高、低分化膀胱癌组织中NEDD9的染色均升高,低分化膀胱癌组织中NEDD9的升高尤为明显；荧光定量RT-PCR结果显示与癌旁组织相比,低分化膀胱癌组织中NEDD9 mRNA表达水平显著升高,而高分化膀胱癌组织中NEDD9 mRNA表达水平无显著差异；Western Blot结果显示与癌旁组织相比,低分化膀胱癌组织中NEDD9蛋白表达量也表现为明显升高。2. NEDD9膀胱癌细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响荧光定量RT-PCR及western blot检测显示NEDD9在膀胱癌细胞株EJ,5637,T24,RT-4均有表达,其中EJ细胞中表达水平最低,而5637细胞中表达水平最高。敲低5637细胞中NEDD9后培养84h后,可观察到其生长与对照组相比收到显著抑制,而流式细胞凋亡检测显示5637-NEDD9 siRNA组的凋亡比例比5637-NC组提高近10%,提示敲低NEDD9可抑制5637细胞增殖并诱导凋亡。NEDD9过表达促进EJ细胞划痕愈合,可以提高transwell小室迁移及侵袭实验中的穿膜细胞数,反之5637-NEDD9 siRNA组的划痕愈合能力减弱,且穿过基底膜的细胞数量显著下降。结论：1. NEDD9蛋白及其mRNA在膀胱癌组织中呈高表达,其表达量与膀胱癌的分化程度密切相关。提示NEDD9有望成为膀胱癌侵袭转移的预测指标,且可望成为膀胱癌靶向治疗的有效靶点。2. NEDD9 siRNA能显著下调膀胱癌5637细胞中NEDD9的表达,抑制细胞增值,并诱导细胞凋亡,降低细胞的迁移及侵袭力。NEDD9过表达腺病毒可显著提高膀胱癌EJ细胞中NEDD9的表达水平,可促进EJ细胞的迁移及侵袭。提示NEDD9在膀胱癌细胞增殖、凋亡及侵袭力方面发挥着重要作用。

【关键词】：
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.14
【目录】：

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