二妙丸干预湿热体质的临床试验及其血浆代谢组学机制研究

发布时间：2018-06-22 15:35

  本文选题：二妙丸 + 湿热体质　； 参考：《南方医科大学》2015年博士论文

【摘要】：背景：中医学认为,中医体质与健康状态密切相关,体质类型决定对某些致病因子的易感性及所产生疾病类型的倾向性。湿热体质是目前公认的体质九分法中偏颇体质的一种,是以湿热内蕴为主要特征的体质状态,其常表现为面垢油光,易生痤疮,口苦口干,身重困倦,大便黏滞不畅或燥结,小便短黄,男性易阴囊潮湿,女性易带下色黄或异味,舌质偏红,苔黄腻,脉滑数等。一项全国的调查表明,湿热体质占9.08%,现患率居8种偏颇体质的第二位,与消化、呼吸、泌尿等多系统疾病有相关性。因此,了解湿热体质的发生机制,以及如何改变湿热体质,防止疾病的发生具有重要意义。湿热体质的发生原因多来源于中医辨证分析或横断面流行病学调查,结果表明,除因气候等而外感湿热外,与现代人生活、学习压力大,忧愁思虑,饮食不调,久坐、缺乏运动,导致耗伤心神,脾气郁结,肝疏泄失常。进而销铄肾阴,相火妄动,遏制脾阳,生痰化热有很大关系。对湿热体质的干预方面,目前主要从饮食调养、生活起居、体育锻炼、情志调摄、药物调理5个方面进行,但都仅停留于中医辨证论治,缺乏随访,并未进行临床试验研究,各种干预效果也均缺乏客观的依据。因此,从客观的评价依据出发,进行湿热体质中药干预的随机、对照临床研究,同时进行湿热体质形成及其干预的机制进行研究,是十分有必要的。二妙丸为元·补阴派朱丹溪所著《丹溪心法》治疗湿热之证的常用方药,由黄柏、苍术组成,功效清热燥湿,坚阴补肾,健脾升阳,肾水足则心火降,心火降则肺金不热,肺金不热自可制约肝木,肝木得制即不得乘脾土,紧合湿热体质的病因病机。现代药理学研究表明,二妙丸主要含小檗碱、黄柏、木兰碱、倍半萜类和聚乙烯炔类成分,全方具有抗菌、抗氧化、降血糖、调节免疫、调节中枢神经系统、心血管系统、消化系统等作用。用于改善湿热体质的临床表现非常适合。代谢组学通过组群指标分析,进行高通量检测和数据处理,研究生物体或组织细胞系统的动态代谢变化,特别是对内源代谢、遗传变异、环境变化乃至各种物质进入代谢系统的特征和影响的学科。本课题组应用代谢组学方法初步探讨了湿热体质的尿液代谢物组变化,结果表明,在疲劳型亚健康人群中,与平和质比较,湿热质的代谢产物有明显差异的有：表达升高的有肌酸酐、α-酮戊二酸、辅酶Q、三磷酸甘油酸、丙氨酸,表达降低的有腺苷、香草基杏仁酸。这些代谢产物与三羧酸循环、糖、脂质、氨基酸循环等多个代谢相关。因此,本论文拟选用二妙丸对广东地区大学生人群湿热体质者进行干预,进行随机、对照的临床试验研究,并运用1H-NMR技术探讨湿热体质及其干预的代谢机制,为湿热体质的临床干预提供一定的客观依据。目的：评价二妙丸干预湿热体质的临床疗效,探讨湿热体质及其用二妙丸干预的代谢组学机制。方法：通过本课题组研制的自测健康量表《亚健康评定量表》和《中医体质分类和判定表》、临床体检报告进行健康状况判断,纳入符合标准的健康或亚健康人平和体质、单纯湿热体质大学生,将湿热体质人群随机分为对照组和药物干预组,对照组不给任何干预药物,仅给予生活方式指导,干预组除给予生活方式指导外,给予二妙丸口服,一次6克,一日2次,连续服用28天。试验观察时间点为干预前(0月)、干预后1月、干预后6月、干预后12月。(1)二妙丸干预湿热体质的临床试验研究：试验以湿热体质转化分为主要评价指标,以其他体质量表转化分、湿热体质条目得分为次要疗效指标,同时评价自测健康状况,于0月、1月、6月、12月分别进行一次评价。进行统计分析,以明确应用中药调理湿热质的临床疗效,为应用中医药手段干预中医偏颇体质提供科学依据。(2)湿热体质形成及其干预的代谢组学机制：选用平和体质人群和湿热体质干预前人群(对照组和干预组),湿热体质对照组干预前后人群,湿热体质干预组干预前后人群,清晨空腹抽血后提取血浆-20℃冻存。血浆室温下解冻,离心(14000×g, 10min,4℃),取上清液0.3m1,加入0.1ml的重水和0.2ml PBS缓冲溶液,混匀后转入5mm核磁管进行代谢组学测试。应用核磁共振氢谱技术(1H-NMR),获取平和体质、湿热体质干预前后的原始代谢指纹图谱信息,采用MestReNova 5.3软件进行代谢图谱预处理,对各分段积分值进行归一化处理。所得数据输出并转换到Excel格式并导入软件Simca-P 12.0.1.0 (Umetrics AB, Sweden)中进行多元统计分析。通过主成分分析(PCA)、偏最小二乘法判别分析(PLS-DA)、正交偏最小二乘判别分析(OPLS-DA)等模式识别方法进行数据处理,得到两组血浆代谢物概况,进行比较。在OPLS-DA模型中提取VIP值,再结合归一化积分值筛选出平和体质组合湿热体质组、湿热体质干预前后血浆有差异的代谢物(VIP值1,两组归一化分值统计学比较P0.05的变量作为差异性代谢产物,即潜在分子标志物),然后结合临床症状、体检报告、数据库(人类代谢产物数据库http://www.hmdb.ca)和文献进行代谢物鉴定,并分析相关代谢途径变化,从而揭示湿热体质的形成机制、二妙丸干预湿热体质的疗效作用机制。统计分析采用SPSS 13.0,归一化积分值(均数±标准差表示)比较采取两独立样本t检验。结果：本研究共纳入单纯湿热体质88例(随机分为干预组和对照组各44例),脱失或者剔除9人,共79例完成研究,男30人,女49人,平均年龄(19.51±1.49)岁。其中湿热干预组42例,对照组37人,两组纳入对象在年龄、性别组成、身体质量指数(BMI)、健康和亚健康比例上比较均无显著性差异(P0.625)。1.二妙丸干预湿热体质的临床试验研究(1)不同时间点健康促进生活方式得分经重复测量方差分析,结果显示健康促进生活方式得分组间无显著性差异(F=0.863,P=0.356),而不同时间点之间的差异有显著性(F=11.421,P=0.000),分组和时间之间无交互效应(F=0.613,P=0.607),随着时间的推移,对照组和干预组健康促进生活方式得分均好转。各时间点两组健康促进生活方式得分之间的差异均无统计学意义(P0.158)；组内不同时间点的多重比较显示,干预组干预后6月、12月与0月相比P0.05,而对照组干预后1月、6月、12月时间点与0月相比P0.05。健康促进生活方式量表各维度得分重复测量方差分析得知,各维度组间均无差异(P0.165),自我实现、运动锻炼、营养、压力管理四个维度不同时间点间的差异具有显著性(P0.046),所有维度分组和时间之间无交互效应(P0.510)。(2)不同时间点湿热体质量表转化分经重复测量方差分析,结果显示组间湿热体质转化分差异有显著性(F=6.141,P=0.015),不同时间点差异也有显著性(F=19.128,P0.001),分组和时间之间无交互效应(F=1.523,P=0.217)。干预前,两组之间转化分无统计学差异(F=0.043,P=0.513)；干预后两组湿热体质转化分均下降,两组在干预后1个月、6个月湿热体质转化分差异有统计学意义(P=0.033,0.007),干预12个月后,干预组湿热体质转化分有回升的趋势,和对照组之间无显著性差异(F=2.656,P=0.113)。组内不同时间点的多重比较显示两组干预后6月、12月时间点与0月、1月相比P均0.05。(3)不同时间点其他体质量表转化分经重复测量方差分析,结果显示各体质转化分组间差异均无显著性意义(P0.061),但不同时间点差异有显著性(P0.045),除阴虚体质外(F=4.112,P=0.012),其余体质分组和时间之间无交互效应。对照组和干预组随着时间的推移,平和体质的转化分有上升的趋势,而其他7种偏颇体质的转化分均有下降的趋势,两组间的变化趋势均无统计学意义,但干预组组内变化趋势有统计学意义。不同时间点的多重比较显示,除平和质和气郁质意外,干预后6月与0月相比均有一定差异(P0.05)。(4)不同时间点湿热体质量表各条目得分经重复测量方差分析,结果显示,除小便发热或色浓之外(F=10.022,P=0.002),各条目得分组间差异均无显著性意义(P0.070),但不同时间点差异有显著性(除小便发热、阴囊潮湿多汗外,P0.001),各条目分组和时间点之间无交互效应(P0.062),对照组和干预组随着时间的推移,各条目得分有下降的趋势,对照组主要体现在面鼻部油腻或油光发亮、容易生痤疮或疮疖两个症状,干预组除了上述两个症状,对口苦或口中异味、带下色黄或异味、大便粘滞不爽/解不尽、小便发热或色浓均有明显改善趋势。不同时间点的多重比较显示,干预组面鼻部油腻或油光发亮、容易生痤疮或疮疖两个症状在干预一个月后即与干预前相比有明显改善(P0.05),其他各条目在干预后6月、12月也有明显的改善(P0.05)。(5)不同时间点自测健康评分转化分经重复测量方差分析,结果显示自测健康转化分组间无显著性差异(F=2.411,P=0.125),而不同时间点之间的差异有显著性(F=9.368,P0.001),分组和时间之间无交互效应(F=0.677,P=0.518),随着时间的推移,对照组和干预组自测健康转化分均上升,两组在干预后6个月有统计学意义(P=4.376,0.040),不同时间点的多重比较显示,干预组干预后1月、6月、12月与0月相比P均0.05,而对照组6月、12月时间点与0月相比P0.05。随着时间的推移,两组生理、心理、社会健康得分均好转。生理亚健康转化分组间有显著性差异(F=16.631,P0.001),不同时间点之间的差异也具有显著性(F=12.252,P0.001),分组和时间之间无交互效应(F=0.293,P=0.785),干预组器官功能干预后6月即与0月相比有统计学差异(P=0.006),而对照组6月、12月时间点与0月相比均P0.05。心理亚健康转化分组间无显著性差异(F=0.006,P=0.941),不同时间点之间的差异也无显著性(F=2.417,P=0.083),分组和时间之间无交互效应(F=0.615,P=0.568),不同时间点的多重比较显示,干预组干预后6月与0月相比有统计学差异(P0.05)；心理症状维度不同时间点之间的差异也具有显著性(P=0.017)。社会亚健康转化分组间无显著性差异(F=0.006,P=0.941),但不同时间点之间的差异具有显著性(F=3.965,P=0.019),分组和时间之间无交互效应(F=0.510,P=0.612),干预组干预后6月与0月相比有统计学差异(P0.05)；社会适应维度不同时间点之间的差异也具有显著性(P=0.009)。2.湿热体质干预的血浆代谢组学机制研究(1)湿热体质与平和体质血浆1H-NMR分析本实验将平和体质组(10人)和湿热体质组干预前(20人)作为研究对象进行建模,采用PCA、PLS-DA方法分别进行数据处理和模式识别后,湿热体质组和平和体质组各自集中,两组可区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更加显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化分值共筛选得到48个有统计学意义的变量(P=0.000-0.049)。结果显示,与平和体质组比较,湿热体质组血浆中对分类贡献较大的特异性代谢物28个,均为上升状态,即异亮氨酸、亮氨酸、缬氨酸、苏氨酸、乳酸、α-羟基异丁酸、脯氨酸、胆碱、组氨酸、氧化三甲胺(TMAO)、甜菜碱、β-葡萄糖、牛磺酸、α-葡萄糖、丙二醇、胆固醇、甘氨酸、甘油丙三醇、瓜氨酸、丙酰甘氨酸、谷氨酰胺、丙氨酸、三磷酸甘油酸、天冬氨酸、肌酸、3-羟基丁酸、醛固酮、不饱和脂类。(2)生活方式干预前后湿热体质的血浆1H-NMR分析本实验将湿热体质对照组10人干预前后作为研究对象进行建模,采用PCA、PLS-DA方法分别进行数据处理和模式识别后,湿热体质对照组干预前后样本各自集中,可区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更加显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化分值共筛选得到53个有统计学意义的变量(P=0.000-0.035)。结果显示,湿热体质生活方式干预前后血浆中对分类贡献较大的特异性代谢物26个,均为下降状态,即醛固酮、胆固醇、异亮氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、酮戊二酸、丙酮酸、胆碱、精氨酸、组氨酸、氧化三甲胺(TMAO)、β-葡萄糖、牛磺酸、a-葡萄糖、丙二醇、苏氨酸、甘氨酸、甘油丙三醇、缬氨酸、亮氨酸、瓜氨酸、丙酰甘氨酸、丙氨酸、三磷酸甘油酸、天冬氨酸、不饱和脂肪酸。与平和体质相比,湿热体质中醛固酮、胆固醇、亮氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、谷氨酰胺、胆碱、组氨酸、氧化三甲胺(TMAO)、α-葡萄糖、β-葡萄糖、牛磺酸、丙二醇、苏氨酸、甘氨酸、甘油丙三醇、瓜氨酸、丙酰甘氨酸、丙氨酸、三磷酸甘油酸、天冬氨酸、不饱和脂肪酸等22种代谢产物的表达明显上升,而生活方式干预后,这22种代谢产物的表达明显下降。(3)二妙丸干预前后湿热体质的血浆1H-NMR分析本实验将湿热体质干预组10人干预前后作为研究对象进行建模,采用PCA、PLS-DA方法分别进行数据处理和模式识别后,湿热体质干预组干预前后样本各自集中,可区分。进一步用OPLS-DA模型处理数据后,两组样本集中趋势更加显著,分类效果更好。综合载荷矩阵图、S图、VIP值、归一化分值共筛选得到46个有统计学意义的变量(P=0.000-0.037)。结果显示,二妙丸干预湿热体质前后血浆中对分类贡献较大的特异性代谢物26个,其中乳酸、α-羟基异丁酸、3-羟基丁酸呈升高状态,醛固酮、胆固醇、谷氨酸、谷氨酰胺、胆碱、精氨酸、氧化三甲胺(TMAO)、脯氨酸、甲醇、β-葡萄糖、牛磺酸、α-葡萄糖、丙二醇、苏氨酸、甘氨酸、甘油丙三醇、缬氨酸、亮氨酸、丙酰甘氨酸、丙氨酸、三磷酸甘油酸、天冬氨酸、不饱和脂肪酸呈下降状态。与平和体质相比,湿热体质中醛固酮、胆固醇、亮氨酸、缬氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、胆碱、氧化三甲胺(TMAO)、α-葡萄糖、β-葡萄糖、牛磺酸、丙二醇、苏氨酸、甘氨酸、甘油丙三醇、丙酰甘氨酸、丙氨酸、三磷酸甘油酸、天冬氨酸、不饱和脂肪酸等20种代谢产物的表达明显上升,而二妙丸干预后,这20种代谢产物的表达明显下降。结论：1、二妙丸干预湿热体质的临床试验表明,健康促进生活方式和结合二妙丸的干预对大学生湿热体质的改善都可以起到明显的效果,可使整个体质向平和体质转化,生活方式起效较为缓慢；加上药物干预后,短期内即可改善湿热体质状态,且效果更好,长期随访也表明疗效显著。2、在症状改善上,单纯健康生活方式干预湿热体质主要体现在面鼻部油腻或油光发亮、容易生痤疮或疮疖两个症状,而加上二妙丸干预对口苦或口中异味、带下色黄或异味、大便粘滞不爽／解不尽、小便发热或色浓也有明显改善。3、健康促进生活方式和结合二妙丸干预均可以改善自测健康状况,主要体现在生理健康方面,单纯生活方式干预对妥善处理不愉快的事、人际关系满意度、自我满意度、新环境适应等社会适应的干预有效果,加上二妙丸干预对紧张、抑郁、缺乏安全感、害怕、孤独、多疑等心理症状方面的干预效果较明显。4、湿热体质的形成可能与三羧酸循环、脂肪酸代谢、缬氨酸/亮氨酸/异亮氨酸降解、糖异生、丙酮酸代谢、鸟氨酸循环、天冬氨酸代谢、胆汁酸合成、嘌呤嘧啶代谢、精氨酸和脯氨酸代谢、甘氨酸和丝氨酸代谢、甜菜碱代谢、氨回收、氨基糖代谢等多个代谢通路相关。最主要涉及的是三大能量代谢途径的旺盛,炎性/免疫反应增强,中枢神经系统抑制,肌肉疲劳,细胞渗透性增强,以及胃肠道功能紊乱。生活方式或二妙丸通过调节这种代谢紊乱达到调理湿热体质的作用。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R285
，

本文编号：2053292