50RNAi沉默PTTG1对人胶质瘤细胞生物学行为及化疗敏感性的影响

发布时间：2016-12-31 14:44

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博士学位论文；（７）细胞凋亡百分率＝Ｂ２象限＋Ｂ４象限细胞凋亡；１．２．７干扰ＰＴＴＧｌ对胶质瘤细胞Ｐ１３１ｄＡ；取生长状态良好的胶质瘤细胞ＬＮ．２２９和Ｕ３７３；过表达质粒和ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ质粒，４８小时后；ＰＴＴＧｌ；４组，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法分别检测Ｐ１；达，方法同第一部分；１．３统计学分析；数据用均数±标准差（ｉ±Ｓ）表示；分析，数据服

博士学位论文

（７）细胞凋亡百分率＝Ｂ２象限＋Ｂ４象限细胞凋亡率。

１．２．７干扰ＰＴＴＧｌ对胶质瘤细胞Ｐ１３１ｄＡＫＴ信号通路的影响

取生长状态良好的胶质瘤细胞ＬＮ．２２９和Ｕ３７３，用ｌｉｐｏ．２０００分别转染ＰＴＴＧｌ

过表达质粒和ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ质粒，４８小时后，分为Ｖｅｃｔｏｒ、ＰＴＴＧｌ、Ｓｃｒａｍｂｌｅ、Ｓｉ

ＰＴＴＧｌ

４组，通过Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ方法分别检测Ｐ１３Ｋ、ｐ－Ｐ１３Ｋ，Ａｋｔ、ｐ－Ａｋｔ蛋白的表

达，方法同第一部分。

１．３统计学分析

数据用均数±标准差（ｉ±Ｓ）表示。采用ＳＰＳＳ２１．０统计学软件对数据进行

分析，数据服从正态分布，两组间数据用独立样本ｔ检验方法，两组以上数据

比较用单因素方差分析，若数据不服从正态分布，用秩合检验比较，Ｐ＜０．０５认

为具有统计学差异。

２．结果

２．１ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ协同替莫唑胺抑制胶质瘤细胞的增殖

采用ＭＴＴ实验检测各组细胞生长曲线，结果显示与未加入替莫唑胺的Ｕ３７３组相比，替莫唑胺使胶质瘤细胞生长受到明显抑制，并且随着药物剂量的增加，

抑制胶质瘤细胞生长的作用更加明显，当替莫唑胺的终浓达到４００１ａｍｏｌ／Ｌ作用时间为４８ｈ时，对细胞生长的抑制作用最明显（Ｆ＝８．８１１，Ｐ＝０．００６），，详见图３－１ａ，表３．１ａ，为我们后续实验提供药物最佳浓度及作用时间。

在图３．１ｂ结果显示，转染ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ质粒的Ｕ３７３细胞组和加入

４００１ｘｒｎｏｌ／Ｌ替莫唑胺细胞组的增殖能力均较对照Ｓｃｒａｍｂｌｅ组低，并且ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ质粒与替莫唑胺联合可进一步抑制胶质瘤细胞增殖。

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第三部分ＰＴＴＧｌ在胶质瘤细胞对替莫唑胺化疗敏感性的作用及机制

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图３．１ａ不同浓度替莫唑胺对胶质瘤细胞增值的影响

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表３．１ａ不同浓度替莫唑胺对胶质瘤细胞增殖的影响

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博士学位论文

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表３．１ｂ

ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ协同替莫唑胺抑制胶质瘤细胞增殖

‘：ＶＳＳｃｒａｍｂｌｅＰ＜００５

２．２ＰＴＴＧＩ

ｓｉＲＮＡ协同替莫唑胺促进胶质瘤细胞的凋亡

流式细胞仪检测细胞凋亡显示与ｓｃｒａｍｂｌｅ组比较，应用替莫唑胺组及ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ组细胞凋亡增加，而ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ＋ＴＭＺ组比ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ组及ＴＭＺ

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第三部分ＰＴＴＧｌ在胶质瘤细胞对替莫唑胺化疗敏感性的作用及机制

组促进细胞凋亡作用更加明显，组间差异有统计学意义（Ｆ＝７１．９５２，Ｐ＜０．００１）（图３—２，表３。２）。结果提示ＰＴＴＧｌｓｉＲＮＡ可以显著诱导胶质瘤细胞的凋亡，且可增加胶质瘤细胞对化疗药物的敏感性。

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图３．２

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ＳｉＲＮＡ对胶质瘤细胞Ｕ３７３凋亡的影响

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表３—２

ＰＴＴＧｌ

ｓｉＲＮＡ对胶质瘤细胞凋亡的影响

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博士学位论文

２．３ＰＴＴＧ１

ｓｉＲＮＡ对胶质瘤细胞Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信号通路的影响

结果表明，转染了ＰＴＴＧｌ过表达质粒的胶质瘤细胞ＬＮ．２２９中ｐ－Ｐ１３Ｋ和

ｐ－ＡＫＴ表达较ｖｅｃｔｏｒ组明显增加，而在胶质瘤细胞Ｕ３７３中转染ＰＴＴＧｌ干扰质

粒后ｐ－Ｐ１３Ｋ和ｐ－Ａｋｔ表达量明显下降，结果说明通过下调ＰＴＴＧｌ的表达，可以明显抑制ｐ－Ｐ１３Ｋ和ｐ－Ａｋｔ表达水平，而对Ｐ１３Ｋ和Ａｋｔ表达水平无明显影响，结果见图３．３。

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图３．３ＰＴＴＧｌ对胶质瘤细胞Ｐ１３Ｋ／ＡＫＴ信号通路的影响

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