【摘要】：背景:动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)是心脑血管疾病的的主要诱因,血管内皮功能障碍是AS的起始步骤。氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)可引起血管内皮细胞结构和功能的改变。本课题在前期实验研究基础上以丹参有效活性成分丹参素钠(DSS)来探讨其减轻血管内皮损伤信号通路,进一步扩展其对中药复方定心方在抗AS治疗的药理机制研究,为中医药防治AS寻找新的靶点。目的:从动物和细胞水平探讨DSS对ox-LDL诱导动脉粥样硬化小鼠血管内皮细胞损伤的保护作用及可能机制。方法:(1)动物实验SPF级8周龄雄性ApoE基因敲除(Apo E-/-)小鼠50只,以人血清低密度脂蛋白(LDL)诱导血管内皮损伤的方法建立APoE-/-小鼠AS血管损伤模型。随机分为5组,每组10只,分别为:①对照组、②模型组、③DSS-L、④DSS-M、⑤DSS-H,②、③、④、⑤组均给予DSS2.5、5、7.5mg/kg腹腔注射,每日一次;①组灌服等剂量生理盐水,实验16周。(2)细胞实验采用ox-LDL诱导HUVEC损伤的方法建立细胞模型。浓度梯度组:分别以 0、25、50、100mg/L 的 ox-LDL 作用 HUVEC24h。时间梯度组:以 50mg/L ox-LDL 作用 HUVEC0,3,6,12,24 h。干预组:①对照组②DSS 组③ox-LDL+DSS组④ ox-LDL 组⑤ ox-LDL+SB203580⑥ ox-LDL+SP600125。结果:(1)小鼠血脂检测结果显示:模型组显著高于对照组(P0.05),与模型组相比,DSS-M 与 DSS-H 血清 TC、TG、LDL-C 显著降低(P0.05)。(2)小鼠主动脉AS斑块病理形态学观察:模型组较对照组有较明显的AS斑块形成,DSS可剂量依赖性抑制AS斑块形成(P0.05)。(3)小鼠主动脉AS斑块LDL的表达:各给药组LDL表达较模型组均显著降低(P0.05);DSS-H组显著低于DSS-L、DSS-M组(P0.05)。(4)小鼠主动脉LDL蛋白表达:与模型组相比,DSS-M、DSS-H组显著抑制LDL蛋白表达(P0.05)。(5)小鼠血清ET-1检测结果显示:与对照组相比,模型组小鼠的血浆ET-1含量水平显著增高(P0.05),DSS-M组显著低于模型组(P0.05)。(6)ox-LDL对HUVEC增殖的影响:浓度梯度组:与模型组相比,25、50、100 mg/L ox-LDL组均可显著抑制HUVEC增殖(P0.05),25、50、100 mg/L ox-LDL组差异无统计学意义(P0.05)。时间梯度组:与对照组相比,50 mg/L ox-LDL作用12 h、24 h后均能抑制HUVEC增殖(P0.05)。(7)ox-LDL对HUVEC凋亡的影响:浓度梯度组:与模型组相比,50、100mg/Lox-LDL作用24h后可显著提高早、晚期凋亡率%(P=0.00),两组间无显著差异(P0.05)。时间梯度组:50 mg/L ox-LDL作用12、24h后均可提高早、晚期凋亡率%(P=0.001)。(8)ox-LDL对HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表达影响:浓度梯度组:100 mg/L ox-LDL作用24 h后达到峰值(P=0.00)。时间梯度组:50 mg/L ox-LDL作用3h、6h后均可提高HUVEC中p-p38 MAPK蛋白表达(P0.05)。(9)ox-LDL对HUVEC中的p-JNK蛋白表达影响:浓度梯度组:25、50mg/L ox-LDL作用12 h后可显著提高HUVEC中p-JNK蛋白的表达(P=0.00)。时间梯度组:50mg/Lox-LDL作用3、6h后均可提高HUVEC中的p-JNK蛋白表达(P0.05),两组间无显著差异(P0.05)。(10)DSS对ox-LDL影响HUVEC细胞内p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表达影响:与模型组相比,DSS-M和DSS-H组能够显著抑制HUVEC中p-p38 MAPK、p-JNK蛋白表达(P=0.00),两组间无显著差异(P0.05)。(11)DSS对ox-LDL影响HUVEC分泌TNF-α、IL-6的干预作用:与模型组相比,25、200mg/L DSS预处理HUVEC 24h后降低HUVEC分泌IL-6水平(P0.05),两组间无显著差异(P0.05);50、200mg/LDSS预处理HUVEC24h后降低HUVEC分泌TNF-α水平(P0.05),两组间无显著差异(P0.05)。(12)DSS及MAPKs通路抑制剂对ox-LDL影响HUVEC增殖的干预作用:与模型组相比,100 mg/L DSS组可减轻ox-LDL对HUVEC增殖的抑制作用(P=0.00),SP600125及 SB203580均可减轻 ox-LDL 对 HUVEC 增殖的抑制(P0.05)。(13)DSS及MAPKs通路抑制剂对ox-LDL影响HUVEC凋亡的干预作用:与模型组相比,50、100mg/L DSS均可显著降低早、晚期凋亡率%(P=0.00),两组间无显著差异(P0.05),SP600125及SB203580均可降低早、晚期凋亡率%(P=0.001)。结论:动物实验证实DSS可通过降血脂、ET-1,减少IL-6、TNF-α,抑制AS斑块形成和下调LDL表达等方面延缓AS的发生发展。细胞实验证实ox-LDL可抑制HUVEC增殖并促进其凋亡、可诱导HUVEC分泌炎症因子,DSS可通过增加HUVEC增殖,减少HUVEC凋亡及炎症因子分泌来发挥抗AS作用,其机制可能与抑制MAPKs信号通路有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5
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2361123
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