白藜芦醇及HIF-1α-VEGF-A通路对大鼠左肺移植术后移植肺的作用及机制探讨

发布时间：2018-11-29 07:33

【摘要】：第一部分:改良套管吻合法建立同种异体大鼠左肺原位移植模型目的:通过改良套管吻合法建立同种异体大鼠左肺原位移植模型,并绘制学习曲线,观察肺移植模型存活率。方法:将100只SD大鼠分为供体60只和受体40只两组,先进行20只供体手术及肺门套管的学习,再采用改良套管吻合技术完成大鼠左肺原位移植手术。结果:20例供肺手术中,到开展到第15例时,供肺灌洗的质量基本都是令人满意的,40例肺移植手术中,到开展到第25例时,受体手术时间才逐渐稳定;供体手术时间为9.28±2.01分钟,供肺肺门游离时间为6.04±1.43,供肺套管时间为5.70±2.36,受体手术时间为33.40±8.44,冷缺血时间为26.37±6.01,热缺血时间为16.29±3.58;所有肺移植手术的成功率为51.61%,手术技术掌握后的手术成功率达到80%左右。结论:改良套管吻合法建立的同种异体大鼠左肺原位移植模型可重复性高。通过对套管吻合操作细节的改良,降低了肺移植受体手术的难度,明显缩短了学习周期。第二部分:白藜芦醇对大鼠左肺移植术后急性期移植肺的保护作用和相关机制目的:白藜芦醇是一个多功能的生物活性物质。研究发现它有抗炎效果,在预防器官的缺血再灌注损伤也有明显作用。但目前尚无报道白藜芦醇对肺移植供肺是否存在保护作用。本研究通过比较不同处理条件下肺移植后早期的大鼠全身及局部炎症表现,以及肺组织中相关蛋白的表达情况,来研究白藜芦醇对大鼠同种异体左肺移植术后移植肺的作用及机理。方法:我们将SD大鼠分为白藜芦醇组(RES组)、地塞米松组(DEM组)和生理盐水组(NS组),分别于术前1小时予受体腹腔注射白藜芦醇混悬液(60mg/kg)、地塞米松(1mg/kg)和生理盐水(2ml/kg),并进行左肺原位移植后使之存活24小时,我们检测受体血清和肺泡灌洗液的细胞因子浓度。行HE染色观察双侧肺的组织结构,对肺组织的损伤程度进行评分。并且用免疫组化染色检测诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、核因子-κB P65、受体互作丝氨酸/苏氨酸激酶3(RIPK3)和混合谱系激酶结构域蛋白(MLKL)的表达。结果:我们发现NS组移植肺组织镜下较严重的肺泡上皮水肿增厚、呼吸性支气管内和肺间质有大量红细胞伴肺间质中性粒细胞浸润、局部见肺不张表现;RES组和DEM组移植肺组织镜下表现较为相似,炎症表现较NS组轻,肺泡结构基本正常、局部肺泡腔内可见红细胞,肺间质中少量中性粒细胞和红细胞。ELISA结果显示:RES组移植肺肺泡灌洗液及血清中IL-6、TNF-α水平较NS组均有不同程度下降,抗炎效果与DEM组相似,IL-10浓度较NS组无明显差异。RES组的i-NOS、RIPK3和MLKL的高表达的比例约为50%、50%和37.5%,分别都低于NS组的水平,并且肺组织损伤程度和程序性坏死相关蛋白表达阳性率呈反比。结论:根据上述研究,我们认为通过建立同种异体大鼠左肺原位移植模型,发现白藜芦醇预处理对肺移植术后早期移植肺组织结构存在一定的保护作用。并且我们发现移植肺组织损伤和程序性坏死相关蛋白的表达的关系,提示肺移植相关缺血再灌注损伤的发生机理可能与细胞程序性坏死有关。第三部分:HIF-1α-VEGF-A通路的激活在肺移植后慢性排斥反应中的作用目的:低氧诱导因子1α(HIF-1α)在低氧状态下发挥转录活性,很多研究表明器官移植后移植物长期处于缺氧状态,导致移植物功能受到影响。我们假设肺移植后慢性闭塞性细支气管炎与HIF-1α有关。本研究比较HIF-1α及其下游靶基因血管内皮生长因子(VEGF)A等在同种及异种肺移植大鼠肺组织中的表达情况,研究该通路与大鼠肺移植后闭塞性细支气管炎(BO)的关系。方法:我们采用袖套吻合法建立大鼠左肺原位移植模型,实验组是由F344的左肺移植给Lewis大鼠;术后予环孢菌素抗急性排异,LPS刺激诱导BO;于术后第90天处死取肺。行HE染色和Masson染色观察移植肺的组织结构,评估肺纤维化评分,免疫组化检测HIF-1α、VEGF-A和VEGF受体蛋白-2(VEGFR-2)在移植肺组织中的表达水平,分析HIF-1α表达与VEGF-A及VEGFR-2间的相关性。结果:动物模型术后影像学及病理学资料均提示该动物模型在术后90天时发生了闭塞性细支气管炎。异种移植物HIF-1α、VEGF-A和VEGFR-2术后表达阳性率为77.27、63.64和68.18%,明显高于同种移植。肺组织纤维化程度在异种移植物中分数最高,明显高于其余组,p0.01;并且与HIF-1α、VEGF-A和VEGFR-2蛋白表达阳性率呈正相关。结论:该模型可模拟临床肺移植后闭塞性细支气管炎,移植后肺组织HIF-1α及其下游基因VEGF-A等表达上调,提示HIF-1α-VEGF-A通路的激活可能参与了肺移植后闭塞性细支气管炎的发生与转归,为肺移植后BO的防治提供了新的切入点。
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【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2017
【分类号】：R285.5

【参考文献】