持续人工光照对雌性大鼠生殖内分泌的影响及滋阴补阳中药干预作用的实验研究

发布时间：2017-01-31 20:00

  本文关键词：持续人工光照对雌性大鼠生殖内分泌的影响及滋阴补阳中药干预作用的实验研究，由笔耕文化传播整理发布。

《南京中医药大学》 2015年

持续人工光照对雌性大鼠生殖内分泌的影响及滋阴补阳中药干预作用的实验研究

邹奕洁  

【摘要】：目的：探索持续人工光照对雌性大鼠排卵节律及卵巢内分泌的影响,探讨滋阴补阳序贯中药在组织学和基因学水平的干预作用。方法：选用32只3周离乳雌性SD大鼠,持续人工光照造模大鼠,随机分为空白组、模型组、中药组3组,观察大鼠早期性成熟情况、连续进行阴道脱落细胞检测,记录动情周期情况,持续光照30天后,在动情前期于凌晨2：00、14：00进行开场试验记录行为学数据,同时眼眶取血检测褪黑素及性激素。光照3个月后,动情前期凌晨2：00再次记录开场试验,眼眶取血,检测褪黑素,14：00进行断头处死取颈动脉血检测性激素、褪黑素。手术摘取各组大鼠卵巢,行HE染色、基因表达谱检测、根据基因表达谱检测结果行RT-PCR及免疫组化鉴定相关因子表达情况。结果：光照初期模型大鼠出现性成熟提前、动情期持续延长、动情间期延长,逐渐出现周期不规律,昼夜褪黑素水平均降低,以下午14点差异明显,有统计学意义；性激素中T、PRL, LH均升高,其中T、PRL有统计学差异。持续光照3个月给予滋阴补阳序贯中药后,三组血清褪黑素均降低,但无组间差异,性激素水平较50天时降低,但组间无差异。HE染色显示：被膜增厚,膜间质细胞增生,卵泡发育停滞；皮质部所有卵泡均为发育不良卵泡,颗粒细胞减少被挤压呈扁平或立方形,层数减少,未见优势、成熟卵泡。所有黄体呈弥漫性筛网状、微囊状结构,重度扩张、无排卵、卵泡原位黄素化并形成大量筛网状、微囊状黄体结构,黄体内颗粒细胞显著减少。中药治疗组卵巢HE染色可见膜间质细胞增生程度减轻,卵泡发育停滞；未见优势卵泡,但发育不良卵泡比率较模型组下降、卵泡内颗粒细胞层数较模型组略增加、仍无排卵痕迹、卵泡原位黄素化,形成筛网状、微囊状黄体结构较模型组略减少,正常黄体比率增加。基因表达谱分析显示：持续人工光照对大鼠卵巢基因表达谱有明显影响,出现大量差异基因,给予调整生殖节律的滋阴补阳中药后,1067个差异基因的偏差得到调整,其中611个基因表达增加,456个基因表达下降。差异表达基因的生物学过程结合pathway分析结果表明：滋阴补阳序贯中药对LHR、EGFR, MT受体等通路的基因网络表达调控作用明显。免疫组化结果显示,与中药干预后光照大鼠卵巢Cry2蛋白表达明显差异增加(P0.05)； 中药增加MT1蛋白表达(P0.05)；LHR蛋白表达无明显差异(P0.05),中药还可明显增加EFGR蛋白表达(P0.05)。RT-PCR结果显示：中药干预后明显上调了模型大鼠卵巢Cry2mRNA, MTlmRNA、CYP17A1mRN1 EGFmRNA、EGFRmRNA基因表达(P0.05)。结论：1、持续人工光照对卵巢节律造成明确的影响,并随光照时间的延长损伤逐渐加重,可以由初期的性腺功能亢奋转为低落,从阴道脱落细胞涂片到组织学、血清褪黑素、卵巢基因表达谱、蛋白质表达等均有所反应。2、持续人工光照随着时间的延长,中医病机可由“阴虚阳亢”转为“阴阳两虚”。3、滋阴补阳序贯中药符合该病病机特点,通过滋肾填精、温补肾阳序贯给药,提高优势卵泡和成熟黄体比例,改善卵巢功能。4、滋阴补阳中药不直接提高血清褪黑素水平,而是上调其受体及前体水平,增强其生物学效应而起效。5、滋阴补阳中药改善持续人工光照大鼠卵巢节律的作用机制较为复杂,短期的中药治疗虽未能在阴道脱落细胞涂片及血清性激素方面获得证据,但从组织学、借助基因表达谱技术,在卵巢基因表达及相关因子表达上取得有力证据,说明该中药干预方式是多水平、多靶点、多途径的。

【关键词】：
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R271
【目录】：

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