SIRT1在子宫内膜样腺癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响和机制研究

发布时间：2017-03-17 16:00

  本文关键词：SIRT1在子宫内膜样腺癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响和机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景子宫内膜癌(Endometrial carcinoma, EC)是女性生殖系统常见的三大恶性肿瘤之一,其发病率仅次于宫颈癌,但是在一些发达国家及我国北京、上海等发达地区其发病率达到甚至超过了宫颈癌,而且有逐年上升并且年轻化的趋势。由于子宫内膜癌的临床症状明显,便于及时发现,并且就诊时多处于疾病的早期阶段,加之高分化子宫内膜样腺癌居多,其恶性程度低,预后较好,早期患者5年生存率达90%左右。然而由于取材的局限性或误诊为月经不调,约15%患者就诊时已处于疾病的晚期阶段,预后较差,死亡率高达60%。子宫内膜癌的治疗方法除了常规手术和放化疗外,缺少新的治疗手段,患者生存率在很长一段时间内无明显改善。近年来,肿瘤的靶向治疗成为肿瘤研究的热点与难点,但对于子宫内膜癌尚无有效的靶向治疗的方向。因此,探究新的特异性强、敏感性高的肿瘤靶分子具有重要的临床意义。沉默信息调节因子1(Silent Information Regulatorl, SIRT1)是一种依赖烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(Nicotinamide Adenine Dinucleotide, NAD+)的去乙酰化酶,它可使多种组蛋白和非组蛋白的赖氨酸残基发生去乙酰化。它的去乙酰化活性能使其可以与多种重要的转录因子和转录调节因子作用,调节基因转录、染色质的稳定性及靶基因的活性,从而参与机体的多种生物学功能,如能量代谢、应激反应和细胞衰老等。因此,SIRT1在糖尿病、心血管疾病、神经退行性疾病及代谢性疾病等多种疾病中发挥着重要的作用。近几年的研究发现SIRT1对肿瘤的发生发展也有一定的影响,其在肿瘤中作为抑癌基因或促癌基因,是由不同组织中的SIRT1上下游调节因子分布不同决定的。SIRT1在子宫内膜癌中的表达国内外未见研究。同时,另有研究表明,SIRT1可调节FoxO1的表达,进而调节脂类代谢等细胞生理过程；FoxO1活化后可调节多种基因的表达,其中包括固醇调节原件结合蛋白1(Sterol Regulatory Element Binding Protein 1, SREBP1),其通过降低Spl和SREBP-1c的转录活性、干扰转录起始复合物在SREBP-1c启动子区的组装进而抑制SREBP-1转录。然而在子宫内膜癌中SIRT1和SREBP1的相关性未见研究。SREBP1是一类固定于内质网和核膜的具有碱性螺旋-环-螺旋-亮氨酸拉链的结构膜连接蛋白的成员,它能调节脂肪酸合成中大多数酶的活性,例如乙酰辅酶A羧化酶、脂肪酸合成酶、硬脂酰基辅酶A脱氢酶等。在肿瘤细胞中,脂肪酸的合成是增加的。许多研究表明,SREBP1在多种肿瘤中高表达。我们课题组在以前的研究中表明,SREBP1在子宫内膜癌和卵巢中均为高表达,SREBP1的表达与FIGO分期和组织分化程度密切相关,同时体内、体外实验证实,沉默SREBP1的表达可以诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖。另有研究表明,抑制SREBP1或其下游的靶基因,能诱导细胞进入凋亡程序。因此SREBP1在肿瘤中可能作为促癌基因发挥作用。本研究探讨SIRT1在子宫内膜样腺癌中的表达情况,分析SIRT1的表达与患者的年龄、疾病分期、肿瘤分化程度等临床病理特征的相关性,及与患者生存率的相关性,通过检测SREBP1的表达情况,研究SIRT1对子宫内膜癌细胞的生物学行为的影响和作用机制,为子宫内膜癌的临床诊断、预后评价和靶向治疗提供新的理论依据。第一部分SIRT1在子宫内膜样腺癌中的表达及与临床病理特征的相关性研究目的：检测子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生和正常子宫内膜组织中的SIRT1蛋白、基因水平的表达情况,并分析其与患者年龄、疾病分期、肿瘤分化程度等临床病理特征的相关性,及与患者生存率的相关性,初步探讨S1RT1在子宫内膜癌发生、发展过程中的作用。方法：本研究采用免疫组织化学技术检测SIRT1在子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜组织中的表达情况,并通过随访研究,应用SPSS统计软件分析SIRT1的表达与临床病理特征的相关性及与患者生存率的相关性；同时采用实时荧光定量RT-PCR及Western-blot技术检测SIRT1在60例新鲜子宫内膜样腺癌及其癌旁正常子宫内膜组织中的基因、蛋白质的定量表达情况。结果：1.在子宫内膜样腺癌、子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜组织中SIRT1均在细胞核中表达。在三者中的阳性表达率分别为81.5%、54.2%、47.1%。SIRT1的阳性表达率在子宫内膜样腺癌组中明显高于子宫内膜不典型增生组及正常子宫内膜组,P0.05,差异有显著性,而子宫内膜不典型增生组与正常子宫内膜组相比较,P0.05,无统计学差异。2.SIRT1的阳性表达率在子宫内膜样腺癌中低分化组明显高于高分化组,P0.05,有统计学差异；在Ⅲ、Ⅳ期组明显高于Ⅰ、Ⅱ期组,P0.05,有统计学差异；有淋巴结转移组明显高于无淋巴转移组,P0.05,差异有显著性；不同年龄组之间相比较,P0.05,无统计学意义。3.采用Kaplan-Meier法进行生存分析,结果显示：SIRT1阳性表达的患者总体生存时间34.68±3.80个月,SIRT1阴性表达的患者总体生存时间44.93+3.31个月,总体生存时间SIRT1阳性表达的患者比SIRT1阴性表达的患者明显要短,P0.05,有统计学差异。4.SIRT1的基因表达水平在新鲜子宫内膜样腺癌组织组明显高于其癌旁正常子宫内膜组织组,P0.05,有统计学差异；SIRT1的蛋白质表达水平在新鲜子宫内膜样腺癌组织组中亦明显高于其癌旁正常子宫内膜组织组,P0.05,有统计学差异。结论：1.与子宫内膜不典型增生及正常子宫内膜组织相比较,SIRT1在子宫内膜样腺癌组织中高表达。2.子宫内膜样腺癌中SIRT1的表达与临床病理分期、组织分化程度、有无淋巴结转移密切相关,而与年龄无关。3.子宫内膜样腺癌中SIRT1的阳性表达,提示较低的患者生存率,预示与不良预后密切相关。4.SIRT1在子宫内膜样腺癌中作为促癌基因发挥作用,有待于成为子宫内膜样腺癌的新的肿瘤标志物,用于肿瘤诊断及预后判定。3.子宫内膜样腺癌中SIRT1的阳性表达,提示较低的患者生存率,预示与不良预后密切相关。4.SIRT1在子宫内膜样腺癌中作为促癌基因发挥作用,有待于成为子宫内膜样腺癌的新的肿瘤标志物,用于肿瘤诊断及预后判定。第二部分SIRT1对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响和作用机制研究目的：检测SIRT1在子宫内膜癌细胞系Ishikwa、ECC、RL95-2、KLE中的表达情况,应用基因干扰技术沉默SIRT1的表达,探讨SIRT1对子宫内膜癌细胞生长、增殖、迁移及侵袭的影响。并检测SIRT1沉默前后SREBP1表达水平的变化,探讨SIRT1在子宫内膜癌中的可能的作用机制。方法：应用Western-blot技术检测SIRT1在4种子宫内膜癌细胞系中的表达情况。构建SIRT1的基因干扰系列,应用SIRT1 SiRNA沉默SIRT1的表达,利用慢病毒载体导入RL95-2细胞,应用Western-blot技术检测转导效率；研究SIRT1对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响；并应用Western-blot技术检测SIRT1沉默前后SREBP1表达量的变化。结果：1.SIRT1在子宫内膜癌细胞系Ishikwa、ECC、RL95-2、KLE中表达的灰度值分别为4834.87±105.68、5022.51±89.46、6769.22±121.07、5822.68±178.64,可见SIRT1在RL95-2细胞系中的表达水平较高。2.应用Western-blot技术检测干扰组与空质粒载体组SIRT1表达的灰度值分别为1103.53±80.41、6157.70±212.69,转导效率达81.4%以上。3.自动细胞计数结果显示：细胞增殖速度干扰组明显低于空质粒载体组及空白对照组,P0.05,有统计学差异；而空质粒载体组与空白对照组相比较,P0.05,无统计学意义。4.细胞克隆形成实验结果显示：直径10mm细胞克隆形成的数目,干扰组明显少于空质粒载体组及空白对照组,P0.05,差异有显著性,而空质粒载体组与空白对照组相比较,P0.05,无统计学差异。5.细胞迁移和侵袭实验结果显示：细胞迁移数目,干扰组明显少于空质粒载体组及空白对照组,P0.05,有统计学差异,而空质粒载体组及空白对照组相比较,P0.05,无统计学差异；细胞侵袭数目,干扰组亦明显少于空质粒载体组及空白对照组,P0.05,亦有统计学差异；而空质粒载体组及空白对照组相比较,P0.05,无统计学差异。6. Western-blot技术检测干扰组与空白对照组SREBP1的表达的灰度值分别为4815.68±101.28、2312.17±89.15,SREBP1的蛋白质表达水平在干扰组中明显低于空质粒载体组,P0.05,有统计学意义。结论：1.进一步证实SIRT1在子宫内膜癌中的表达与组织分化程度密切相关,并且筛选出干扰细胞系。2.SIRT1在子宫内膜癌中可能作为促癌基因发挥作用,可促进肿瘤细胞生长、增殖、迁移和侵袭。3.SIRT1可能作为子宫内膜癌基因治疗的靶位点,为子宫内膜癌的治疗提供新的思路。4.在子宫内膜癌中,SIRT1可以影响SREBP1的表达,推测SIRT1可能通过影响脂代谢来发挥其肿瘤促进作用,有待进一步研究。
【关键词】：子宫内膜样腺癌 沉默信息调节因子1 免疫组织化学技术 实时荧技术光定量RT-PCR技术 Western-blot技术 子宫内膜癌 SIRT1 基因干扰技术 细胞生长 细胞增殖 细胞迁移 细胞侵袭 SREBP1 脂代谢
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 中文摘要6-11
• 英文摘要11-17
• 符号说明17-19
• 第一部分 SIRT1在子宫内膜样腺癌中的表达及与临床病理特征的相关性研究19-47
• 前言19-21
• 材料与方法21-32
• 结果32-34
• 讨论34-39
• 结论39-40
• 第一部分相关图表40-44
• 参考文献44-47
• 第二部分 SIRT1对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响及作用机制研究47-73
• 前言47-49
• 材料与方法49-56
• 结果56-58
• 讨论58-63
• 结论63-64
• 第二部分相关图表64-69
• 参考文献69-73
• 致谢73-74
• 攻读博士学位期间发表的学术论文目录74-75
• 学位论文评阅及答辩情况表75-76
• 英文论文76-101

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 郑素平;;RNA干扰在肿瘤治疗方面的研究进展[J];中山大学研究生学刊(自然科学.医学版);2011年02期

2 邵荣光;;小干扰RNA介导的多靶点肿瘤治疗[J];药学学报;2009年03期

  本文关键词：SIRT1在子宫内膜样腺癌中的表达及对子宫内膜癌细胞生物学行为的影响和机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：253080