顺铂诱导HBV再激活和肝细胞损伤的分子机制研究

发布时间：2017-03-26 11:15

  本文关键词：顺铂诱导HBV再激活和肝细胞损伤的分子机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：乙型病毒性肝炎是一种严重威胁人类健康的重要公共卫生问题,据世界卫生组织报道,全世界约20亿人曾感染过HBV,其中近4亿成为HBsAg性的慢性携带者,而其中的3/4是来源于中国；全球每年因HBV感染所致死的近100万,其中约半数在中国。同时据世界卫生组织统计,癌症是目前人类最主要的死亡原因之一；而这些肿瘤患者合并有HBV感染的数目也极其庞大,当这些患者在接受化疗或免疫抑制剂治疗时,其中部分患者会发生HBV再激活的现象,大量瞬时活化的HBV则可能导致机体出现严重的肝功能损伤甚至是肝衰竭,从而引起治疗减缓或是中断,继而耽误肿瘤患者的有效治疗,必将严重影响其预后甚至是危及其生命。近年来,国内外已有多项临床实验证实顺铂等化疗药物可以诱导HBV再激活,从而引起HBV复制增强,同时伴随急性肝功能损伤或肝衰竭的危象,导致病死率急剧上升。但是顺铂诱导HBV再激活的分子机制至今仍不清楚。本研究中,我们首先在体外成功构建了基于环化自连的HBV DNA (circularized HBV DNA)感染的细胞和动物模型,并通过与线性HBV DNA感染模型比较,发现circularized HBV DNA的感染效率和复制水平明显优于线性的HBV DNA (P0.05),由于circularized HBV DNA在结构上完全等同于HBV cccDNA,因而在没有外源载体DNA的干扰下,可以更加真实地反应HBV感染的基本病理生理过程；进而为下一步的实验研究及HBV慢性持续感染的机制和抗病毒的治疗提供强有力的依据。其次,我们分别在体内和体外证实：顺铂一方面可以通过直接上调HBV复制相关转录因子PGC-1α和HNF-4α的表达,从而增强HBV核心启动子活性,继而在转录水平上调HBV的复制；另一方面可以直接上调HBV cccDN A的表达,从而导致HBV D NA水平显著增加。最后,我们通过RT-PCR、Western-blot、BrdU、siRNA和流式细胞术等实验证实,DDP诱导HBV再激活致肝细胞损伤的分子机制主要通过以下两个途径来完成：其一,顺铂可以直接诱导肝细胞氧化应激(ROS水平上调),并抑制其细胞的增殖从而阻滞于S期；高氧化状态下的内环境导致内质网应激,从而引发未折叠蛋白反应,当UPR超载时,诱发细胞凋亡,参与急性肝细胞损伤甚至肝功能衰竭的病理生理过程；其二,顺铂显著上调细胞Alix蛋白表达,并增加HBV核心颗粒的直接释放,显著增加的HBcAg有可能作为一种强免疫原,从而激发机体发生强烈的免疫反应,继而导致急性肝细胞损伤及肝衰竭；同时姜黄素和NAC可以成功规避在临床上由顺铂所引发的HBV再激活的风险,因此可将姜黄素和NAC作为阻断其关键靶点的潜在靶向性药物。本实验研究发现,顺铂诱导HBV再激活的主要机制为：顺铂通过直接上调HBVcccDNA、PGC-1α和HNF-4α的表达,从而引起HBV的复制水平显著增加,同时诱导细胞内质网应激及ROS的产生和病毒核心颗粒的直接释放,参与了患者急性肝细胞损伤及肝衰竭的病理生理过程,该研究有望为全面解析临床HBV再激活奠定坚实的基础。
【关键词】：乙型肝炎病毒 病毒复制 核心颗粒 再激活 顺铂
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R512.62
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-17
• 第一部分 采用环化自连的HBV DNA构建HBV水动力小鼠模型17-65
• 1 材料与方法18-50
• 2 结果50-61
• 3 讨论61-65
• 第二部分 顺铂诱导HBV再激活的分子机制研究65-105
• 1 材料与方法65-85
• 2 结果85-99
• 3 讨论99-105
• 第三部分 顺铂诱导HBV再激活致肝细胞损伤的分子机制研究105-136
• 1 材料与方法105-113
• 2 结果113-125
• 3 讨论125-136
• 全文总结136-138
• 参考文献138-149
• 文献综述149-161
• 参考文献154-161
• 致谢161-162
• 攻读博士学位期间参加的会议162-163
• 攻读博士学位期间发表的论文163

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Establishment and primary application of a mouse model with hepatitis B virus replication[J];World Journal of Gastroenterology;2007年40期

  本文关键词：顺铂诱导HBV再激活和肝细胞损伤的分子机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：268731