PCSK9基因D374Y突变体对HepG2细胞功能的影响及转基因猪的制备

发布时间：2020-07-27 16:11

【摘要】：PCSK9是人类高胆固醇血症的主效基因,介导肝脏细胞LDLR蛋白的胞内溶酶体降解途径,抑制肝脏对血液中LDL-c的清除作用,从而使胆固醇水平上升。PCSK9的高表达或功能获得性突变与动脉粥样硬化疾病有直接的关系,而且影响肝脏功能、肝脏损伤修复、胆固醇运输等性状。为了评估PCSK9过表达对肝脏细胞功能的潜在影响,本文利用Hep G2细胞对增殖、迁移、胆固醇运输等表型进行了检测,结果显示,PCSK9过表达不影响Hep G2细胞的增殖能力,但是显著抑制细胞的迁移和胆固醇外排的能力。PCSK9对肝脏细胞的迁移能力的抑制与胆固醇的调节关系密切。游离胆固醇在细胞膜上的无序分布干扰了小G蛋白活性的发挥和脂筏相关受体参与的信号通路的传导,并参与Erk信号通路的调控。猪的心血管系统和血脂代谢方面与人类非常相近,是研究动脉粥样硬化疾病的有力工具。然而猪的个体差异较大,自然发病的动物缺乏,且诱导病征发生缓慢,因此没有小鼠等模式动物的应用广泛。为了加快疾病发生进程,本研究将PCSK9的获得性突变体D374Y在猪体内过表达,以期模拟动脉血管的病理学变化。本文中使用人APOE启动子调控PCSK9的表达,在人肝癌细胞系Hep G2细胞中验证了转基因载体的有效性,并得到了转基因猪个体。RNA、蛋白水平的结果显示,人PCSK9基因在猪的肝脏中实现了高表达。同时,组织学检测结果表明,转基因猪的肝脏有明显的病变,且免疫组化染色结果显示,转基因猪肝脏LDLR表达量极显著的低于野生型猪。本研究成功获得了人PCSK9过表达的体细胞克隆猪,能够有效的控制疾病研究中个体差异造成的影响,为研究高胆固醇血症提供理想的疾病模型动物。
【学位授予单位】：中国农业科学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R589.2;R-332

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本文编号：2772068