携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响及其机制研究

发布时间：2017-03-30 18:07

  本文关键词：携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响及其机制研究，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：目的:胃癌是严重危害人类健康的恶性肿瘤,作为胃癌主要治疗手段的化疗其耐药问题日益严重,缺氧是造成胃癌化疗耐药的重要原因。本课题利用间充质干细胞对胃癌的靶向趋化性,构建表达血红蛋白的间充质干细胞,使其充分携氧后作用于缺氧的胃癌细胞,给予临床比较常用的胃癌化疗药物,观察携氧后的间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响,并从分子水平探讨其影响胃癌化疗效果可能的机制,以确定这种靶向治疗方法的可行性方法:贴壁法培养间充质干细胞及胃癌细胞株MKN-45及SGC-7901,流式细胞术鉴定间充质干细胞表面标志,利用慢病毒感染使血红蛋白基因表达于间充质干细胞并测序验证,筛选出稳转细胞株后,利用IPTG和血红素诱导血红蛋白的表达,western blotting法检测蛋白表达情况。Transwell法检测表达血红蛋白的间充质干细胞是否具有向胃癌细胞株MKN-45及SGC-7901迁移的能力。将此MSC-hemo置于适宜的氧环境中使其充分携氧后研究其对胃癌细胞化疗的影响。分别检测携氧间充质干细胞对5-氟尿嘧啶(5-FU)及顺铂(CDDP)杀伤胃癌细胞功能的影响。设空白对照组、单纯化疗药物组及携氧间充质干细胞联合化疗组,利用MTT法分别检测各组胃癌细胞的活性,流式细胞术对干预前后细胞的凋亡情况进行检测。Trizol法提取干预前后两株胃癌细胞RNA后,实时荧光定量PCR法对干预前后胃癌细胞中HIF-1α、MDR1及VEGF基因表达情况进行检测分析,应用SPASS17.0软件统计学分析各组之间差异,当p0.05时认为有显著性差异。结果:培养的间充质干细胞及胃癌细胞均符合其标准生物学特点。测序结果显示表达于间充质干细胞中的血红蛋白基因序列符合Gene bank中HBA2及HBB基因序列。病毒转染率达到80%,感染复数(MOI)为10。经IPTG及血红素诱导后,Western blotting能够检测到血红蛋白的表达。Transwell结果显示与普通的间充质干细胞一样,表达血红蛋白的间充质干细胞也具备向胃癌细胞迁移的能力。MTT实验及统计分析结果显示与单纯的化疗相比,携氧间充质干细胞联合化疗组对各株胃癌细胞的抑制率更高,凋亡检测结果也显示携氧间充质干细胞干预组具有更高的凋亡率。对各组HIF-1α、MDR1及VEGF基因表达的定量PCR检测结果表明:不论是对于MKN-45细胞株还是SGC-7901细胞组,与未加任何干预的细胞相比,携氧间充质干细胞干预组细胞中HIF-1α、MDR1及VEGF均表现出明显的下降趋势。结论:我们的结果表明携氧间充质干细胞能够明显增强胃癌的化疗效果,利用间充质干细胞作为一种携氧工具为实体瘤补氧是一种新奇的改善肿瘤局部缺氧环境的方法,能够改善胃癌化疗治疗的效果。进一步研究表明此作用的靶点是HIF-1α基因,进而影响了其下游相关基因MDR1、VEGF的表达从而影响胃癌的化疗效果。
【关键词】：间充质干细胞 胃癌 缺氧 化疗 机制
【学位授予单位】：兰州大学
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-9
• 缩略语表9-12
• 第一章 引言12-21
• 1.1 胃癌化疗耐药12-14
• 1.2 肿瘤缺氧14-15
• 1.3 肿瘤缺氧与化疗耐药15-17
• 1.4 目前改善肿瘤缺氧的方法17
• 1.5 间充质干细胞靶向治疗17-19
• 1.6 本课题选题思路及研究内容19-21
• 第二章 携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响21-41
• 2.1 实验材料和方法21-30
• 2.1.1 实验材料21-22
• 2.1.2 实验方法22-30
• 2.2 主要仪器设备30
• 2.3 结果30-38
• 2.3.1 间充质干细胞形态学及表型鉴定30-32
• 2.3.2 胃癌细胞形态学观察32
• 2.3.3 表达血红蛋白的载体构建情况32-34
• 2.3.4 间充质干细胞浸染实验结果34
• 2.3.5 Western blotting检测MSC-hemo细胞中血红蛋白表达情况34-35
• 2.3.6 间充质干细胞体外向胃癌细胞迁移能力35-37
• 2.3.7 携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响37
• 2.3.8 携氧间充质干细胞干预后胃癌细胞化疗凋亡情况37-38
• 2.4 讨论38-41
• 第三章 携氧间充质干细胞影响胃癌化疗效果的机制41-51
• 3.1 实验材料和方法41-43
• 3.1.1 实验材料41
• 3.1.2 实验方法41-43
• 3.2 主要仪器设备43-44
• 3.3 结果44-47
• 3.3.1 携氧间充质干细胞干预对胃癌细胞HIF-1a 基因表达的影响44-45
• 3.3.2 携氧间充质干细胞干预对胃癌细胞MDR1基因表达的影响45-46
• 3.3.3 携氧间充质干细胞干预对胃癌细胞VEGF基因表达的影响46-47
• 3.4 讨论47-51
• 第四章 结论51-52
• 参考文献52-59
• 文献综述 MSC: A new vehicle for gastric cancer targeted gene therapy59-78
• 参考文献72-78
• 在学期间的研究成果78-79
• 致谢79

  本文关键词：携氧间充质干细胞对胃癌化疗效果的影响及其机制研究，，由笔耕文化传播整理发布。

本文编号：277737