阿萨希毛孢子菌氟康唑耐药机制的蛋白质组学研究

发布时间：2017-03-31 04:23

  本文关键词：阿萨希毛孢子菌氟康唑耐药机制的蛋白质组学研究，，由笔耕文化传播整理发布。

【摘要】：研究背景：阿萨希毛孢子菌作为常见病原真菌(白念珠菌、烟曲霉、隐球菌)之外的又一个重要的毒力较强的条件致病性真菌,播散性毛孢子菌感染的病死率高达50-80%。·临床及实验室研究表明唑类药物具有较好的体内外抗阿萨希毛孢子菌活性,但随着临床唑类药物(特别是氟康唑)的广泛使用,其对唑类药物耐药的报道逐渐增多。目的：寻找阿萨希毛孢子菌敏感株与相应氟康唑诱导耐药株在氟康唑作用前后的差异蛋白,探寻该菌对氟康唑耐药的可能机制。材料与方法：1 选取氟康唑敏感的临床株(CBS2479、CBS8904)进行氟康唑体外诱导耐药,获得耐药表型稳定的耐药株2479R、8904R;2 iTRAQ多重化学标记-LC-MS质谱分析CBS2479和2479R,CBS8904和8904R在氟康唑作用前后蛋白表达差异；3 应用生物信息学分析手段,对得到的蛋白质组学研究数据结果,从蛋白质功能、通路及网络层面筛选耐药相关(细胞膜、离子通道、酶活性等功能)差异蛋白质；4 根据生物信息学分析的结果,综合文献分析,推测与阿萨希毛孢子菌唑类耐药机制可能相关的差异蛋白。结果：1体外诱导获得阿萨希毛孢子菌稳定氟康唑耐药株；2 iTRAQ多重化学标记-LC-MS质谱分析得到CBS2479组质谱,鉴定分析出77320个质谱,其中肽段30682个,唯一肽段26847,以及7174个蛋白点；CBS8904组质谱,鉴定分析出35653个质谱,其中肽段12746个,唯一肽段12022,以及4585个蛋白点；3 CBS8904组生物信息学分析结果：以1.5倍作为差异表达蛋白质筛选的条件,CBS8904与诱导耐药菌株8904R相比,差异表达蛋白68个,其中上调及下调蛋白各34个；CBS8904氟康唑作用后发现,差异表达蛋白33个,上调蛋白9个,下调蛋白24个；CBS8904和8904R在氟康唑作用后差异表达蛋白38个,上调蛋白31个,下调蛋白7个；其中参与类固醇代谢的蛋白Erg2、Erg4、Erg5、Erg7、Erg11、Erg26,参与细胞应激反应蛋白Ste12、TOR1、DDR48、HSP70与 Calcineurin相关蛋白与阿萨希毛孢子菌的耐药机制相关。4 CBS2479组生物信息学分析结果：以以1.5倍作为差异表达蛋白质筛选的条件,CBS2479与诱导耐药菌株2479R相比,差异表达蛋白167个,其中上调蛋白91个,下调蛋白个；CBS2479氟康唑作用后,差异表达蛋白55个,上调蛋白32个,下调蛋白23个；CBS2479和2479R在氟康唑作用后差异表达蛋白159个,上调蛋白78个,下调蛋白81个；其中参与类固醇代谢的蛋白Erg4、Erg5、Erg6、Erg26,细胞应激反应蛋白DDR48、calcineurin相关蛋白、HSP与阿萨希毛孢子菌的耐药机制相关。结论：1体外诱导阿萨希毛孢子菌可以获得稳定的阿萨希毛孢子菌耐药株,并用于阿萨希毛孢子菌的耐药研究；2阿萨希毛孢子菌敏感株与氟康唑诱导耐药株,在氟康唑干预下存在差异表达蛋白,参与类固醇代谢和细胞应激反应的相关蛋白与阿萨希毛孢子菌的耐药机制相关。
【关键词】：阿萨希毛孢子菌 氟康唑 耐药机制 蛋白质组学
【学位授予单位】：中国人民解放军医学院
【学位级别】：博士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R519
【目录】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-12
• 前言12-15
• 1 阿萨希毛孢子菌概述12-13
• 2 本课题的设计来源13-15
• 第一部分 微量液基稀释法检测T.ASAHII体外药物敏感性15-21
• 1 研究背景15
• 2 实验材料15-17
• 3 实验方法17-19
• 4 结果19-20
• 5 讨论20-21
• 第二部分 阿萨希毛孢子菌人工诱导氟康唑耐药株模型构建及其生物学特性的初步研究21-31
• 1 研究背景21
• 2 实验材料21
• 3 实验方法21-24
• 4 结果24-28
• 5 讨论28-31
• 第三部分 ITRAQ多重化学标记-LC-MS质谱分析比较诱导耐药株与亲本及氟康唑干预后蛋白表达差异31-51
• 1 实验目的31
• 2 实验材料31
• 3 实验步骤31-34
• 4 数据搜索34
• 5 蛋白差异结果34-48
• 6 讨论48-51
• 第四部分 差异蛋白质的生物信息学分析(CBS2479和CBS8904)51-150
• 1 研究目的51
• 2 生物信息学方法51
• 3 CBS8904生物信息学分析结果51-98
• 4 CBS2479生物信息学分析结果98-142
• 5 研究小结142-144
• 6 讨论144-150
• 参考文献150-156
• 综述一156-164
• 参考文献160-164
• 中英文缩略词表164-165
• 博士在读期间发表的文章与参与的课题165-166
• 致谢166

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