NE裂解转录因子p200CUX1促进APL发生发展的机制研究

发布时间：2020-11-09 09:23

　　 目的:中性粒细胞弹性蛋白酶(Neutrophil elastase,NE)是一种由ELANE基因编码的髓性丝氨酸蛋白酶。本研究旨在探讨NE在急性早幼粒细胞白血病(Acute promyelocytic leukemia,APL)细胞增殖和分化中的作用、对APL-NOD/SCID小鼠致病能力的影响及其相关分子机制。方法:首先,通过收集临床骨髓样本和分析Blood Spot数据库中NE m RNA公共微阵列数据,验证NE在APL患者骨髓和外周血细胞中的表达水平。其次,通过慢病毒转染构建稳定过表达NE的NB4细胞和敲低NE的U937细胞,进而运用CCK-8试验和流式细胞术检测细胞增殖和周期分布,运用IF、CO-IP和Duolink?PLA荧光实验检测NE和p200CUX1的共定位和蛋白相互作用,及运用q RT-PCR和western blot测定PCNA、Ki-67、CD11b、C/EBPα、C/EBPβ、Cyclin D1、Cyclin E1、Cyclin A2、P21Waf1/Cip1、P27Kip1等增殖分化相关标志物的表达水平,以探讨NE在APL细胞增殖和分化中的作用及其相关分子机制。最后,构建NB4-NE和NB4-NC NOD/SCID小鼠血液瘤模型,通过观察其一般状况、体重变化、生存时间、骨髓和外周血细胞形态、肝脾大小和重量、肝脾白细胞浸润等指标,来评估NE对APL-NOD/SCID小鼠模型致病能力的影响。结果:NE在APL患者骨髓和外周血中性粒细胞中高表达。过表达NE可以促进NB4细胞的增殖并抑制细胞分化;相反,在U937细胞中,敲低NE或使用NE抑制剂可以减缓细胞增殖并诱导其分化。机制方面,NE与转录因子p200CUX1存在空间上的共定位和蛋白相互作用,可在蛋白水平对其进行有效裂解;而过表达p200CUX1可在一定程度上逆转NE对NB4细胞增殖和分化的影响。另外,NE可增强APL-NOD/SCID小鼠的致病能力,缩短小鼠的生存时间。结论:NE通过裂解转录因子p200CUX1调控APL细胞的增殖与分化,进而促进该疾病的发生发展。NE有望成为APL新的潜在诊疗靶点。
【学位单位】：重庆医科大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R733.71
【部分图文】：

研究分析了公共微阵列数据集中所包含的87例APL、540例M2 AML、23例ALL患者的骨髓或外周血样本和12例人正常HSCs中NE mRNA的表达情况。结果显示,与M2 AML、ALL患者和正常HSCs相比,NE在APL患者骨髓和外周血细胞中的表达水平显著升高,差异有统计学意义(图1.1)。2.1.2 NE在APL患者骨髓中性粒细胞中高表达

为探讨NE在APL中的蛋白表达水平,我们收集了2例APL、1例M2 AML患者和1例健康对照者的骨髓样本(病例信息见表1.9),分离中性粒细胞后,运用western blot技术检测其NE蛋白表达水平。结果显示,相比于健康对照者,来源于APL和M2 AML患者的骨髓中性粒细胞中NE表达显著升高。其中,APL患者骨髓中性粒细胞中NE表达升高程度较M2 AML患者更为明显(图1.2)。2.2 NE在白血病细胞株中的表达

我们运用qRT-PCR和western blot检测人急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4、HL-60和人白血病细胞株U937中NE的表达情况。结果显示,与健康对照者骨髓中性粒细胞相比,HL-60和U937细胞中NE表达水平相对较高,而NB4细胞中几乎没有NE蛋白表达(图1.3)。2.3过表达NE促进NB4细胞增殖并抑制细胞分化
【参考文献】

相关期刊论文 前3条

1 张欣;于亮;;NOD/SCID小鼠-白血病模型在白血病研究中的应用现状及进展[J];临床血液学杂志;2015年03期

2 于文俊;杨文华;史哲新;杨向东;王慧娟;;NOD/SCID小鼠模型在实验血液学研究中的应用[J];中国实验动物学报;2008年05期

3 孟云霄;陈杰;卢朝辉;;CUTL1与肿瘤[J];国际病理科学与临床杂志;2006年01期

本文编号：2876210