基于肠道菌群研究天王补心颗粒对围绝经期失眠的疗效及作用机制

发布时间：2020-11-21 08:36

　　 目的研究围绝经期失眠与肠道菌群的关系,及天王补心颗粒与天王补心饮片是否具有等效性,在此基础上,探讨天王补心颗粒通过调节围绝经期失眠患者肠道菌群的组成变化来发挥其临床疗效的潜在机制。方法1.理论探讨:系统的总结回顾了中医古籍及现代学者对于失眠的病名、病因、病机及治疗方法的认识,阐述了中医药治疗失眠的可能机制。分析了围绝经期失眠的中医病因病机,总结出阴虚火旺,心神失养是围绝经期失眠的发病机理,滋阴安神法是围绝经期失眠的重要治法。同时也整理了天王补心方中多个单药的药理作用。为天王补心丹治疗围绝经期失眠提供了理论依据。2.实验研究:(1)分别从湖北省中医院脑病科专家门诊、湖北中医药大学国医堂门诊及武汉市中医医院治未病中心门诊共收集女性围绝经期失眠病例13例,分别收集患者予以天王补心颗粒治疗前、治疗后及其非失眠配偶的粪便,采用宏基因组测序法分别检测各组的肠道菌群组成。(2)分别从上述三个门诊共收集失眠病例100例,采用随机数字表法将患者随机分为天王补心饮片组和天王补心颗粒组各50例,分别予以天王补心饮片和天王补心颗粒剂治疗,观察两组的临床有效率。其中,天王补心颗粒剂组中含有13例女性围绝经期失眠患者,我们在完成前述实验的基础上,再对患者使用天王补心颗粒治疗前后分别采用匹兹堡睡眠指数量表、中医证候积分、阿森斯量表、失眠严重程度指数、汉密尔顿抑郁量表和汉密尔顿焦虑量表进行疗效评价。结果1.围绝经期失眠与肠道菌群的相关性研究围绝经期失眠组及其非失眠配偶对照组两组肠道菌群基本信息分析显示,围绝经期失眠组中含有1884种物种,对照组中含有1659种物种,两组共同含有的物种总计有1336种。各个样品均能够在界、门、纲、目、科、属、种这7个分类水平上稳定注释,且各个样品间注释程度相似。对照组与围绝经期失眠组之间存在罗氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌、普拉梭菌、拟杆菌、粪便拟杆菌和蔗糖梭菌等的组成异常。其中,罗氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌和蔗糖梭菌等菌群在围绝经期失眠组中较对照组占比更多,而普拉梭菌、拟杆菌和粪便拟杆菌则占比更少。2.天王补心颗粒与天王补心饮片的等效性研究及天王补心颗粒对围绝经期失眠的疗效研究本研究共完成病例100例,天王补心颗粒剂组和天王补心饮片组各50例,其中天王补心颗粒剂组内含有13例女性围绝经期失眠患者。天王补心颗粒/饮片治疗100例失眠患者的临床研究中,我们首先分别对两组的性别、年龄、身高、体重、BMI等进行分析,结果显示,两组之间年龄、身高、体重、BMI等无明显差异(P0.05),提示两组之间一般情况基线均衡,具有可比性。我们紧接着对天王补心颗粒和天王补心饮片的临床疗效进行了观察,结果显示,天王补心颗粒剂组临床有效率为76%,而天王补心饮片组的临床有效率为78%,两者的临床有效率无显著差异(P0.05)。天王补心颗粒剂干预围绝经期失眠患者的研究中,结果显示,天王补心颗粒能够显著减少围绝经期失眠患者的匹斯堡量表得分、中医证候评分、失眠严重程度指数、阿森斯量表、汉密尔顿焦虑量表和汉密尔顿抑郁量表评分等(P0.05)。3.天王补心颗粒对围绝经期失眠患者肠道菌群组成的影响天王补心颗粒治疗围绝经期失眠前组及治疗后组均含有1884种物种,两组间物种无明显区别。与治疗前组相比,治疗后组中罗氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌和蔗糖梭菌等丰度减少,而普拉梭菌、拟杆菌、粪便拟杆菌、双歧杆菌和乳酸菌则占比增加。我们将天王补心颗粒治疗后的菌群组成与对照组进行了对比,结果显示,与对照组相比,天王补心颗粒治疗后组相关菌群的丰度仍存在一定的差距。结论1.天王补心饮片和天王补心颗粒的疗效具有等效性。2.天王补心颗粒能有效治疗围绝经期失眠。3.围绝经期失眠与肠道菌群紊乱有关,变化的主要菌种为罗氏拜瑞氏菌、瘤胃球菌、普氏菌、普拉梭菌、拟杆菌、粪便拟杆菌和蔗糖梭菌的。4.天王补心颗粒通过调节围绝经期女性失眠患者体内紊乱的肠道菌群来发挥其临床疗效。
【学位单位】：湖北中医药大学
【学位级别】：博士
【学位年份】：2020
【中图分类】：R285.5
【部分图文】：

我们对纳入的对照组及失眠组的样品组成物种进行检测。结果显示,对照组含有1659种物种,失眠组中含有1884种物种,两组共同含有的物种总计有1336种。我们根据以上信息绘制韦恩图(见图1),并以此为基础进行后续进一步分析。4.4两组间物种组成分析

基于Bracken结果的绝对丰度及注释信息,对每个样品在一共7个分类水平界、门、纲、目、科、属、种(Kingdom,Phylum,Class,Order,Family,Genus,Species)上的序列数目占总序列数的比例进行统计,可以有效的评估样本的物种注释分辨率,注释到属/种的比例越高则表示该样本的注释效果越好。如图2所示,各个样品均能够在界、门、纲、目、科、属、种这7个分类水平上稳定注释,且各个样品间注释程度相似。我们进一步对所有样本进行统计和分析,结果发现,在界水平(图3),两组中均检测到物种:Bacteria,物种占比情况:Bacteria(100.00%);在门水平(图4);两组中检测到拟杆菌门(Bacteroidetes),厚壁菌门(Firmicutes),变形菌门(Proteobacteria),放线菌门(Actinobacteria)等;在纲水平(图5),两组间均可检测到拟杆菌纲(Bacteroidia),梭菌纲(Clostridia),Negativicutes纲,丙型变形菌纲(Gammaproteobacteria),放线菌纲(Actinobacteria)等;在目水平(图6),两组间均可检测到拟杆菌目(Bacteroidales),Enterobacterales目,Selenomonadales目,梭菌目(Clostridiales)等;在科水平(图7),两组间均可检测到瘤胃菌科(Ruminococcaceae),普雷沃氏菌科(Prevotellaceae),毛螺菌科(Lachnospiraceae),拟杆菌科(Bacteroidaceae)等;在属水平(图8),两组间均可检测到瘤胃球菌属(Ruminococcus),粪杆菌属(Faecalibacterium),巨单胞菌属(Megamonas),氏菌属(Roseburia),普氏菌属(Prevotella),拟杆菌属(Bacteroides)等;在种水平(图9),两组间均可检测到拟杆菌(Bacteroides vulgatus),普氏菌(Prevotella copr),单形拟杆菌(Bacteroides uniformis),卵圆拟杆菌(Bacteroides ovatus),单形巨单胞菌(Megamonas funiformis),普拉梭菌(Faecalibacterium prausnitzii)等。由于在纲、目、科、属、种水平上,物种的分类较多,从而导致在图5-9中无法全部展示其所有的分类,基于此,我们进一步对所获得的结果进行分析,将样品名作为横坐标(Sample Name),纵坐标(Sequence Number Percent)表示注释到该分类水平的序列数目占总注释数据的比率,柱状图自上而下的颜色顺序对应于右侧的图例颜色顺序。在各分类水平没有注释的序列被归为unclassified一类。图例中最多只显示最优势的20个种类,余下的相对丰度较低的物种被归类为Other在图中展示。同时,我们为了更加清楚的显示对照组与失眠组之间物种的组成差异,我们将属于对照组的样品归类并命名为A组,将属于失眠组的样品归类并命名为B组,结果见图10-14。由于入组人群的个体差异性存在,各组内样品间的物种组成不尽相同,为了更好的观察对照组与失眠组之间物种的组成差异,我们将实验样品分为A组和B组,并对其进行统计和分析,结果如图15-20所示。在门水平上,两组之间存在拟杆菌门,厚壁菌门,变形菌门的组成差异;在纲水平,A组与B组之间存在拟杆菌纲,梭菌纲,Negativicutes纲和丙型变形菌纲等组成差异;在目水平,两组间存在拟杆菌目,Selenomonadales目,Enterobacterales目,梭菌目和韦永氏球菌目的组成不同;在科水平,两组间存在拟杆菌科,毛螺菌科,瘤胃菌科,普雷沃氏菌科,Selenomonadales科,Enterobacterales科,韦永氏球菌科,tannerellaceae科,韦荣球菌科和双歧杆菌科之间的组成差异;在属水平,A、B两组间存在瘤胃球菌属,粪杆菌属,巨单胞菌属,氏菌属,普氏菌属,拟杆菌属,布劳特氏菌属,埃希氏菌属和lachnoclostridium属的组成不同;而在种水平,两组间存在拟杆菌,普氏菌,单形拟杆菌,粪便拟杆菌,单形巨单胞菌,普拉梭菌,罗氏拜瑞氏菌和瘤胃球菌的组成差异。

为了研究正常组与失眠组之间的差异性,我们根据相关参考文献[114-116],选择了绝对丰度排名前20名的物种,通过进行聚类分析从而构建样品的聚类,以此考察两组间在各个分类水平上的差异性。结果见图21-26,图21-26分别体现了两组在门、纲、目、科、属、种这六种分类水平上的聚类情况。由于图21-26图中信息较多且繁杂,为更加清晰的体现对照组及失眠组在各分类水平上的聚类情况,我们将样品分为A、B两组,然后再进行聚类分析,结果见图27-32。种是生物分类系统上的基本单位,种、属相对于门、纲、目、科而言,更加细致也更加准确。因此,在本试验中,我们对图31及图32进行分析,结果显示,A、B两组之间存在罗氏拜瑞氏菌,瘤胃球菌,普氏菌,普拉梭菌,拟杆菌,粪便拟杆菌,蔗糖梭菌等的组成差异,其中,围绝经期失眠组中罗氏拜瑞氏菌,瘤胃球菌,普氏菌和蔗糖梭菌等组成占比较对照组多,而普拉梭菌,拟杆菌,粪便拟杆菌在整体菌群中占比则较对照组少。提示围绝经期失眠患者与正常人相比,其体内的肠道菌群组成发生变化,变化的主要菌种为罗氏拜瑞氏菌,瘤胃球菌,普氏菌,普拉梭菌,拟杆菌,粪便拟杆菌和蔗糖梭菌。图4 各样本在门水平的物种相对分布图
【相似文献】

相关期刊论文 前10条

1 姜竹成;;天王补心合剂治疗心肾不交型失眠的临床研究[J];四川中医;2006年07期

2 苗仁华;汪海宣;叶红兵;刘静;;RP-HPLC法测定天王补心片中梓醇的含量[J];临床医药文献电子杂志;2017年28期

3 李伟荣;陈瑞玉;许庆文;黄天来;宓穗卿;王宁生;;含与不含朱砂的天王补心散对小鼠安神作用的影响[J];中药药理与临床;2011年03期

4 王联发,鲍正毅,邹宝明,黄振平;“天王补心脑口服液”对急性心肌缺血的保护作用[J];南京部队医药;1999年04期

5 谢光前;窦斌峰;王丽;;天王补心膏治疗心悸、失眠的临床疗效观察[J];河南中医;1992年02期

6 杨晨华,卢鹏伟,牛艳阳,杨竞春;关于天王补心(浓缩)丸、安神补气(浓缩)丸用量的商榷[J];湖南中医学院学报;2002年04期

7 史宁;郭宏举;耿帅;常李荣;;超高效液相色谱串联四级杆飞行时间质谱快速测定天王补心片中五味子醇甲和藁本内酯含量[J];陕西中医;2020年02期

8 谢光璟;刘源才;胡辉;左刚;王平;;基于Trx系统介导的抗氧化应激探讨天王补心方对失眠模型大鼠的干预作用[J];时珍国医国药;2019年04期

9 冉瑞芳;;天王集团 健康产业新帝国[J];现代营销(创富信息版);2016年12期

10 冉瑞芳;;只有民族的,才是世界的! 天王集团:让中华中医文化走向世界[J];现代营销(创富信息版);2017年01期

相关博士学位论文 前3条

1 杨希茜;基于肠道菌群研究天王补心颗粒对围绝经期失眠的疗效及作用机制[D];湖北中医药大学;2020年

2 陈京华;天王复心方抗心肌缺血作用及对TLR4-NF κ BP65表达影响的研究[D];湖南中医药大学;2014年

3 孙杰;刘东汉教授辨治肺系病证经验及泻肺补心方治疗慢性肺源性心脏病临床研究[D];中国中医科学院;2016年

相关硕士学位论文 前10条

1 邢月;中国古代佛教天王造像身着铠甲造型特征研究[D];新疆师范大学;2014年

2 杨月;湘西“天王”信仰的道德教化功能研究[D];吉首大学;2016年

3 田臻;补心胶囊的药学研究[D];北京协和医学院;2007年

4 王豔秀;《勝天王般若波羅蜜經》異文研究[D];西南大学;2013年

5 李宝石;补心通脉颗粒对动脉粥样硬化家兔氧化应激的影响[D];南方医科大学;2011年

6 任强;补心饮治疗慢性心力衰竭气阴两虚证的临床研究[D];山东中医药大学;2014年

7 刘颀;低碳经济在句容市天王镇白沙村规划设计中的应用[D];南京林业大学;2012年

8 李亚茹;补心逐瘀汤干预气虚血瘀型慢性心力衰竭临床疗效评价[D];山东中医药大学;2014年

9 张艳华;从清代《持国天王》与现代《四臂观音》对比研究看唐卡艺术保护与传承[D];中国艺术研究院;2017年

10 赵林钢;补心软脉颗粒抗心肌缺血的作用及其机制研究[D];南京中医药大学;2014年

本文编号：2892809