基于核受体-CYP450/OATPs通路研究小檗碱对调血脂药代谢和转运的调控作用及分子学机制

发布时间：2020-12-10 00:15

　　背景:小檗碱（Berberine,BBR）是一种从天然药物中提取的异喹啉类生物碱,常用于胃肠道疾病的治疗。近年的研究证实其可通过增加LDL-C受体的表达,激活AMP激酶和阻断MAPK/ERK通路来降低低密度脂蛋白和甘油三脂的水平。他汀类药物主要通过抑制甲羟戊酸的合成,减少胆固醇在肝脏的合成而降低低密度脂蛋白水平,是临床常用的调血脂药。基于BBR与他汀类药物调血脂作用机制的不同,临床上常将BBR与他汀类药联合应用于高脂血症的治疗。但有报道他汀类药物引发的横纹肌溶解副作用,60%是因联合用药改变代谢或转运特性所致,故而BBR对药物代谢酶和转运体的影响备受学者关注。研究发现,BBR及其（40）相代谢产物小檗红碱（Berberrubine,BRB）、去亚甲基小檗碱（Demethylene berberine,DBB）在肝脏中浓度远高于血浆中浓度,且可影响药物的代谢酶和转运体功能,然BBR与他汀类药物联合应用后,是否因其对药物代谢酶和转运体的作用导致药物相互作用的发生尚属未知,确应系统探究。值得一提的是,诸多研究表明,核受体在调控药物代谢和转运相关的靶基因方面发挥着至关重要的作用,BBR亦通过激... 

【文章来源】：南昌大学江西省 211工程院校

【文章页数】：158 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
摘要
abstract
中英文缩略词表
第1章 引言
第2章 小檗碱、小檗红碱和去亚甲基小檗碱对HepG2 细胞中CYP1A2、3A4、2B6 表达的影响
    2.1 材料
        2.1.1 细胞株
        2.1.2 主要药品
        2.1.3 主要试剂
        2.1.4 主要仪器设备
    2.2 方法
        2.2.1 主要工作液的配置
        2.2.2 HepG2 细胞培养及生长曲线绘制
        2.2.3 BBR、BRB、DBB、RIF、PHE、OME对 HepG2 细胞的毒性实验
        2.2.4 细胞中蛋白浓度的测定
        2.2.5 BBR、BRB、DBB对 Hep G2 细胞中CYP1A2、3A4、2B6 mRNA表达的影响
        2.2.6 BBR和 BRB对 Hep G2 细胞中CYP1A2、CYP3A4 蛋白表达的影响[51]
        2.2.7 数据处理与统计分析
    2.3 结果
        2.3.1 HepG2 细胞的培养及其生长曲线的绘制
        2.3.2 BBR、BRB、DBB、RIF、PHE、OME对 HepG2 细胞的毒性实验
        2.3.3 细胞中蛋白浓度的测定
        2.3.4 RT-qPCR引物及扩增产物特异性
        2.3.5 BBR、BRB和 DBB对 HepG2 细胞中CYP1A2、3A4、2B6mRNA表达的影响
        2.3.6 BBR和 BRB对 HepG2 细胞中CYP1A2、3A4 蛋白表达的影响
    2.4 讨论
第3章 小檗碱和小檗红碱对HepG2 细胞代谢非那西汀、咪达唑仑和阿托伐他汀的影响
    3.1 材料
        3.1.1 细胞株
        3.1.2 主要药品
        3.1.3 主要试剂
        3.1.4 主要仪器和设备
    3.2 方法
        3.2.1 主要工作液的配制
        3.2.2 HepG2 细胞的培养
        3.2.3 HepG2 细胞样品中非那西汀、咪达唑仑、阿托伐他汀浓度测定
        3.2.4 BBR、BRB对 HepG2 细胞代谢PHE、MDZ和 ATV的影响
        3.2.5 数据处理与统计分析
    3.3 结果
        3.3.1 细胞样品中PHE、MDZ、ATV浓度测定的方法学评价结果
        3.3.2 BBR、BRB对 HepG2 细胞代谢PHE、MDZ和 ATV的影响
    3.4 讨论
第4章 小檗碱、小檗红碱和去亚甲基小檗碱对HepG2 细胞中OATP1B1 转运体表达的影响
    4.1 材料
        4.1.1 细胞株
        4.1.2 主要药品
        4.1.3 主要试剂
        4.1.4 主要仪器设备
    4.2 方法
        4.2.1 主要工作液的配置
        4.2.2 HepG2 细胞培养
        4.2.3 细胞中蛋白浓度的测定
        4.2.4 BBR及 BRB、DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 mRNA表达的影响
        4.2.5 BBR及 BRB、DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 转运体蛋白表达的影响
        4.2.6 数据处理与统计分析
    4.3 结果
        4.3.1 细胞样品中蛋白浓度的测定
        4.3.2 RT-qPCR引物及扩增产物特异性
        4.3.3 BBR及 BRB、DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 mRNA表达的影响
        4.3.4 BBR、BRB和 DBB对 HepG2 细胞中OATP1B1 转运体蛋白表达的影响
    4.4 讨论
第5章 小檗碱、小檗红碱对HepG2 细胞摄取阿托伐他汀和瑞舒伐他汀的影响
    5.1 材料
        5.1.1 细胞株
        5.1.2 主要药品
        5.1.3 主要试剂
        5.1.4 主要仪器和设备
    5.2 方法
        5.2.1 主要工作液的配制
        5.2.2 HepG2 细胞的培养
        5.2.3 细胞中蛋白浓度的测定
        5.2.4 HepG2 细胞样品中RSV、ATV浓度测定方法的建立
        5.2.5 ATV和 RSV在 HepG2 细胞中摄取条件的优化
        5.2.6 BBR、BRB对 HepG2 细胞摄取ATV和 RSV的影响
        5.2.7 数据处理与统计分析
    5.3 结果
        5.3.1 细胞样品中RSV、ATV浓度测定的方法学部分验证结果
        5.3.2 ATV和 RSV在 HepG2 细胞中摄取条件的优化结果
        5.3.3 BBR、BRB对 HepG2 细胞摄取ATV和 RSV的影响
    5.4 讨论
第6章 小檗碱对阿托伐他汀钙、瑞舒伐他汀钙在大鼠体内药代动力学影响
    6.1 材料
        6.1.1 实验动物
        6.1.2 主要药品与试剂
        6.1.3 主要仪器
    6.2 方法
        6.2.1 主要溶液的配制
        6.2.2 大鼠血浆中RSV、ATV浓度测定的LC-MS/MS方法建立
        6.2.3 长期给予BBR对 ATV在大鼠体内药代动力学的影响研究
        6.2.4 长期给予BBR对 RSV在大鼠体内药代动力学的影响研究
    6.3 结果
        6.3.1 LC-MS/MS法测定大鼠血浆中ATV、RSV浓度的方法学验证
        6.3.2 长期给予BBR对 ATV在大鼠体内药代动力学的影响
        6.3.3 BBR对 RSV在大鼠体内药代动力学的影响
    6.4 讨论
第7章 基于核受体AhR和 PXR研究小檗碱和小檗红碱对CYP1A2和CYP3A4 表达的影响
    7.1 材料
        7.1.1 细胞株和质粒
        7.1.2 主要药品
        7.1.3 主要试剂
        7.1.4 主要仪器设备
    7.2 方法
        7.2.1 主要溶液的配制
        7.2.2 HepG2 细胞的培养
        7.2.3 质粒的构建及提取
        7.2.4 质粒瞬时共转染
        7.2.5双荧光素酶报告基因实验
        7.2.6 细胞蛋白的提取
        7.2.7 基于AhR、PXR探究BBR及 BRB对 CYP1A2和CYP3A4 报告基因活性的影响
        7.2.8 沉默AhR、PXR对 BBR及 BRB调控CYP1A2和CYP3A4 蛋白的影响
        7.2.9 BBR及 BRB对核受体AhR、PXR胞核蛋白表达的影响
        7.2.10 数据处理与统计分析
    7.3 结果
        7.3.1 基于AhR、PXR探究BBR及 BRB对 CYP1A2和CYP3A4 报告基因活性的影响
        7.3.2 沉默AhR、PXR对 BBR及 BRB调控CYP1A2和CYP3A4 蛋白的影响
        7.3.3 BBR及 BRB对核受体AhR、PXR胞核蛋白表达的影响
    7.4 讨论
第8章 基于RXRα研究小檗碱及小檗红碱对OATP1B1 表达的影响
    8.1 材料
        8.1.1 细胞株和质粒
        8.1.2 主要药品
        8.1.3 主要试剂
        8.1.4 主要仪器设备
    8.2 方法
        8.2.1 主要溶液的配制
        8.2.2 HepG2 细胞的培养
        8.2.3 质粒的构建及提取
        8.2.4 质粒瞬时共转染
        8.2.5双荧光素酶报告基因实验
        8.2.6 细胞蛋白的提取
        8.2.7 基于RXRα研究BBR及 BRB对 OATP1B1 报告基因活性的影响
        8.2.8 分别沉默FXR、LXRα 和RXRα 对BBR及BRB调控OATP1B1 蛋白表达的影响
        8.2.9 BBR及BRB对FXR、LXRα 和RXRα 胞核蛋白表达的影响
        8.2.10 数据处理与统计分析
    8.3 结果
        8.3.1 基于RXRα 研究BBR及BRB对OATP1B1 报告基因活性的影响
        8.3.2 分别沉默FXR、LXRα 和RXRα 对BBR及BRB调控OATP1B1 影响
        8.3.3 BBR及BRB对FXR、LXRα 和RXRα 胞核蛋白表达的影响
    8.4 讨论
第9章 结论与展望
    9.1 结论
    9.2 展望
致谢
参考文献
攻读学位期间的研究成果
综述
    参考文献



本文编号：2907723