mTOR与PARP-1相互作用调节光诱导感光细胞parthanatos死亡

发布时间：2021-01-18 13:31

　　研究背景年龄相关性黄斑变性（AMD）、视网膜色素变性（RP）和Stargardt病等视网膜退行性疾病严重危害视功能,最终可能造成不可逆性盲。视网膜退行性疾病的发病机制包括多种视网膜功能相关基因突变和危险环境因素。而过度的光照作为其中一种有害的环境因素,在视网膜退行性疾病的发病机制中起着至关重要的作用。感光细胞死亡是视网膜退行性疾病的重要的病理特征,然而光诱导视网膜感光细胞死亡的具体机制尚不十分明确。过度的光照可以引起视网膜的光热损伤、光机械损伤和光化学损伤。其中,光化学损伤在视网膜光损伤中起主导作用。视网膜在暴露于强光后,视紫红质可以吸收光子并激活电离效应,形成氧化自由基。过度的光照刺激下自由基的合成降解失衡,产生过量的活性氧簇（ROS）导致氧化应激水平上升,此时失衡的抗氧化系统无法将产生的活性氧簇有效清除,因此内部抗氧化系统受损,最终造成哺乳动物视网膜中氧化应激的超载。在某些刺激作用下,细胞凋亡的进程受到一系列信号级联的有序调节,其中含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶（Caspase）依赖途径是一种经典的凋亡途径,通过活化一系列半胱氨酸蛋白水解酶来调节细胞凋亡和炎症,维持体内平衡。它可以... 

【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：128 页

【学位级别】：博士

【部分图文】：

慢病毒感染661W细胞中mTOR、PARP-1蛋白的表达水平

Hoechst/PI染色

为了探究光损伤条件下感光细胞中m TOR、PARP-1通路的变化,本实验将细胞分为黑暗正常组(661W)、黑暗对照组(Scramble)、光照对照组(Lt Scramble)、光照m TOR敲低组(Lt mTOR KD)、光照PARP-1敲低组(Lt PARP-1KD)。采用Western Blot法对光损伤条件下的感光细胞中m TOR、PARP-1通路上蛋白表达情况进行检测,以β-actin为内参基因,采用Image J软件测量不同蛋白条带的灰度值,并通过计算获得m TOR、p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1、PARP-1、PAR、AIF蛋白在不同条件下的相对表达含量。结果如图2.3所示,与Scramble相比,在光损伤条件下Lt Scramble中p-m TOR、p-4EBP1、p-S6K1、PARP-1、PAR的蛋白表达水平明显升高,p-m TOR/mTOR比值上升(??:P<0.01,???:P<0.001,差异具有统计学意义),说明光损伤激活了m TOR、PARP-1信号通路;与Scramble相比,Lt Scramble组中AIF活化,出现了一条57k Da的裂解带(???:P<0.001,差异具有统计学意义)。与Lt Scramble相比,Lt mTOR KD、Lt PARP-1KD中AIF 57kDa裂解带变浅消失(???:P<0.001,差异具有统计学意义),说明光损伤激活了AIF信号通路,m TOR、PARP-1的基因敲除抑制了AIF的活化;与Lt Scramble相比,Lt mTOR KD组中m TOR的基因敲除能有效抑制光损伤条件下PARP-1信号通路的激活,表现为PARP-1、PAR的表达下降(??:P<0.01,???:P<0.001,差异具有统计学意义);与Lt Scramble相比,Lt PARP-1 KD组中PARP-1的基因敲除能有效抑制光损伤条件下m TOR信号通路的激活,表现为p-mTOR、p-4EBP1、p-S6K1表达下降,p-mTOR/mTOR比值下降(???:P<0.001,差异具有统计学意义),证明在光损伤条件下m TOR和PARP-1两条通路之间互相影响,存在相互作用的关系。2.6 讨论


本文编号：2985036