乳腺癌干细胞多索鲁比素耐药及糖代谢异常的相关机制研究
发布时间：2021-01-27 01:54
第一部分:MiR-124通过STAT3/HIF-1信号通路逆转乳腺癌干细胞对多索鲁比素的耐药性目的:探究MiR-124通过STAT3/HIF-1信号通路逆转乳腺癌干细胞对多索鲁比素的耐药性。方法:基于GPL571,使用GSE24460进行微阵列分析,以确定乳腺癌干细胞多药耐药基因中mRNA的表达差异。GSE24460中分为两组,包括2个亲本对照组和2个MCF7细胞耐药组。收集MCF7细胞,并酶解成单细胞悬液。MicroRNA-124模拟物和非特异性miRNA对照由GenePharma（中国上海）合成。STAT3 siRNA和对照siRNA购自赛默飞世尔科技公司（美国）。pcDNA3.1-STAT3质粒来自GenePharma。使用Lipofectamine TM 2000（Invitrogen Co.,卡尔斯巴德,CA）根据产品说明进行转染。通过MTT测定细胞活力。含有推定的miR-124结合位点的STAT3 3’UTR通过TargetScan（www.targetscan.org）进行分析,并将该miRNA位点插入萤光素酶基因（Promega,美国）的下游并转染,测定萤光素酶活性。免...
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
STAT3在MCF7-R细胞中高表达
STAT3在MCF7和MCF7-R中的表达
为了证明STAT3对CD24-CD44+BCSC的抑制作用,将pcDNA3.1-STAT3载体质粒转染到细胞中。pcDNA3.1-STAT3载体质粒编码除3"UTR以外在内的STAT3结构域的全长编码序列,并且si-STAT3也被转染用于功能丧失测定。如图3A所示,抗阿霉素的CD24-CD44+BCSC显示出更大的IC50。STAT3的转染进一步提高了耐药性,而si-STAT3降低了耐药性,使其表达更接近于正常CD24-CD44+BCSCs。同样,STAT3增加了MCF7-R细胞系中CD24-CD44+细胞的迁移,而si-STAT3则减少了迁移(图3B)。STAT3的敲低使得细胞周期停止于G0期,从而阻碍细胞生长,而过表达的STAT3则加速了细胞周期进入S或M期(图3C,P<0.05)。为了测试BCSC中STAT3对阿霉素的抗性,我们使用流式细胞术和细胞迁移侵袭试验分析来检测STAT3对BCSC对阿霉素的抗性的影响。与MCF7-R组相比,si-STAT3组的凋亡率更高,而pc组在两种阿霉素浓度下均具有相反的结果。此外,NC组的凋亡率比MCF7组更高(图3D,P<0.05)。与NC组相比,si-STAT3组的侵袭BCSC数量减少,而STAT3组则数量增加(图3E,P<0.05)。在Western Blot中,我们测试了包括ALDH1、SOX2和OCT4在内的,与肿瘤干细胞的表达相关的基因。所有基因在pc-STAT3组中的表达均比MCF7-R组中的更高。si-STAT3组中这些基因的相对表达水平低于NC组(图4A,P<0.05)。然后,我们使用蛋白质印迹来验证STAT3是否会通过HIF-1信号通路影响BCSC。图4B显示,HIF-1α在pc-STAT3组中具有更高的表达,并且HIF-1信号传导途径被激活(P<0.01)。
本文编号：3002209
【文章来源】：吉林大学吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校
【文章页数】：86 页
【学位级别】：博士
【部分图文】：
STAT3在MCF7-R细胞中高表达
STAT3在MCF7和MCF7-R中的表达
为了证明STAT3对CD24-CD44+BCSC的抑制作用,将pcDNA3.1-STAT3载体质粒转染到细胞中。pcDNA3.1-STAT3载体质粒编码除3"UTR以外在内的STAT3结构域的全长编码序列,并且si-STAT3也被转染用于功能丧失测定。如图3A所示,抗阿霉素的CD24-CD44+BCSC显示出更大的IC50。STAT3的转染进一步提高了耐药性,而si-STAT3降低了耐药性,使其表达更接近于正常CD24-CD44+BCSCs。同样,STAT3增加了MCF7-R细胞系中CD24-CD44+细胞的迁移,而si-STAT3则减少了迁移(图3B)。STAT3的敲低使得细胞周期停止于G0期,从而阻碍细胞生长,而过表达的STAT3则加速了细胞周期进入S或M期(图3C,P<0.05)。为了测试BCSC中STAT3对阿霉素的抗性,我们使用流式细胞术和细胞迁移侵袭试验分析来检测STAT3对BCSC对阿霉素的抗性的影响。与MCF7-R组相比,si-STAT3组的凋亡率更高,而pc组在两种阿霉素浓度下均具有相反的结果。此外,NC组的凋亡率比MCF7组更高(图3D,P<0.05)。与NC组相比,si-STAT3组的侵袭BCSC数量减少,而STAT3组则数量增加(图3E,P<0.05)。在Western Blot中,我们测试了包括ALDH1、SOX2和OCT4在内的,与肿瘤干细胞的表达相关的基因。所有基因在pc-STAT3组中的表达均比MCF7-R组中的更高。si-STAT3组中这些基因的相对表达水平低于NC组(图4A,P<0.05)。然后,我们使用蛋白质印迹来验证STAT3是否会通过HIF-1信号通路影响BCSC。图4B显示,HIF-1α在pc-STAT3组中具有更高的表达,并且HIF-1信号传导途径被激活(P<0.01)。
本文编号：3002209
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