肝脏特异性miR-192在调控肝细胞癌肿瘤干性中的作用

发布时间：2021-02-17 07:11

　　原发性肝癌具有较高的致死率和肿瘤异质性,其中约90%为肝细胞癌（HCC）。在HCC中已鉴定了多种肿瘤干细胞（CSC）的生物标志物,但对于不同CSC亚群中的代谢表型和共享信号分子或通路仍知之甚少。本课题围绕肝细胞癌的CSC展开,分为如下两个主要部分。第一部分:miR-192-5p（miR-192）在多组肝细胞癌CSC标记物阳性的HCC患者中,表达显著沉默。在HCC病人队列（n=241）中,定义五组CSC阳性的HCC患者,即EpCAM⁺,CD90⁺,CD133⁺,CD44⁺和CD24⁺HCC,及相对应阴性患者,进而比较分析阳性与阴性患者组间miRNA表达谱,发现14个miRNA在各组阳性患者中均显著表达下调,且与预后相关。其中最显著的miRNA为miR-192。随后研究发现,miR-192在肝脏中含量丰富且特异性强。在2个独立的HCC队列中（n=613）验证发现,miR-192在五组CSC阳性亚群中均显著下调。此外,过表达miR-192能显著抑制HCC细胞的恶性表型如细胞迁移、侵袭... 

【文章来源】：浙江大学浙江省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

【文章页数】：97 页

【学位级别】：博士

【文章目录】：
致谢
中文摘要
Abstract
缩略词表
1 引言
    1.1 肝癌
        1.1.1 肝癌分类
        1.1.2 肝癌的原发驱动因素
    1.2 HCC的异质性
        1.2.1 HCC的肿瘤干性（所用的CSC标志物）
        1.2.2 肿瘤干性的信号通路调控
    1.3 肿瘤代谢
        1.3.1 HCC的肿瘤代谢
        1.3.2 肿瘤代谢与肿瘤干性的关系
        1.3.3 靶向糖酵解对肿瘤干性抑制
    1.4 微小RNA（microRNA）
        1.4.1 MicroRNA发现、功能
        1.4.2 MicroRNA参与HCC的肿瘤代谢
        1.4.3 MicroRNA参与HCC肿瘤干性
    1.5 肿瘤微环境
        1.5.1 广谱定义
        1.5.2 代谢分子参与调控肿瘤微环境——乳酸
    1.6 本课题的主要科学问题
2 材料与方法
    2.1 实验材料
        2.1.1 细胞系
        2.1.2 菌株和质粒
        2.1.3 主要实验仪器
        2.1.4 主要试剂
        2.1.5 主要实验试剂盒
        2.1.6 抗体
        2.1.7 常规试剂配制
    2.2 实验方法
        2.2.1 质粒构建
        2.2.2 细胞培养
        2.2.3 细胞转染
        2.2.4 慢病毒包装及感染细胞
        2.2.5 双荧光素酶报告质粒实验
        2.2.6 Western blot
        2.2.7 ECAR和 OCR检测
        2.2.8 TRIzol法提细胞总RNA
        2.2.9 mRNA逆转录和实时定量PCR
        2.2.10 microRNA逆转录和实时定量PCR
        2.2.11 CRISPR/Cas9 基因编辑
        2.2.12 流式细胞分析
        2.2.13 2-NBDG的摄取,葡萄糖水平和乳酸水平检测
        2.2.14 共培养体系
        2.2.15 细胞恶性程度体现（克隆形成、细胞迁移、侵袭、划痕、悬浮小球）
        2.2.16 小鼠皮下成瘤实验
        2.2.17 统计学处理
        2.2.18 引物序列
3 miR-192 抑制肝细胞癌的肿瘤干性
    3.1 前言
    3.2 miR-192-5p在5类肿瘤干细胞阳性亚群中均显著降低
+的HCC病例">    3.3 作为肝脏特异性和高丰度的miRNA,miR-192-5p在 HCC病例中表达下降,尤其是CSC⁺的HCC病例
    3.4 miR-192-5p显著抑制HCC细胞系的肿瘤干细胞表型
    3.5 miR-192KO细胞系的建立,及其干性表型
    3.6 miR-192 表达受甲基化影响
    3.7 miR-192 在癌症中的相关研究
+肝细胞癌中过度的糖酵解">4 miR-192 的缺失导致CSC⁺肝细胞癌中过度的糖酵解
    4.1 前言
    4.2 miR-192 低水平表达的HCC病例中,糖酵解相关的代谢分子和基因呈现高表达
    4.3 miR-192 抑制肝细胞癌的糖酵解
    4.4 miR-192 缺失的HCC细胞消耗更多的葡萄糖
    4.5 三个关键糖酵解调控因子是miR-192 潜在靶基因,同时对增强HCC的肿瘤干性有重要意义
+HCC中高水平c-Myc/低水平miR-192 正反馈机制">    4.6 c-Myc抑制miR-192 转录水平,进而维持高糖酵解水平的CSC⁺HCC中高水平c-Myc/低水平miR-192 正反馈机制
+的HCC细胞产生过量的乳酸激活微环境中非HCC细胞的p-Erk,从而促进HCC细胞自身的肿瘤干性和恶性表型">    4.7 CSC⁺的HCC细胞产生过量的乳酸激活微环境中非HCC细胞的p-Erk,从而促进HCC细胞自身的肿瘤干性和恶性表型
5 讨论及意义
小结
参考文献
附录
    附录1 引物列表
个人简历



本文编号：3037634