肿瘤相关巨噬细胞和胆管癌细胞相互作用促进胆管癌的发展及耐药

发布时间：2021-03-21 21:52

　　第一部分肿瘤相关巨噬细胞诱导胆管癌细胞对吉西他滨化疗抵抗目的:诱导建立肿瘤相关巨噬细胞模型并鉴定表型,检测肿瘤相关巨噬细胞对胆管癌细胞化疗耐药的影响,验证其对胆管癌细胞凋亡过程的调节。方法:综合文献经典方案用细胞因子诱导人单核细胞THP-1,使其分化为肿瘤相关巨噬细胞（TAM）,并通过流式细胞数及RT-PCR验证相应标志物表达。CCK8、流式及WB用以检测TAM诱导的胆管癌细胞对吉西他滨化疗耐药,验证其对于细胞凋亡的影响。结果:所有巨噬细胞分型CD11b均高表达,其中M1型CD80与IL12高表达,而M2型CD206与IL10高表达。CCK8结果显示显示TAM条件培养基（CM）显着降低胆管癌细胞对吉西他滨的敏感性;流式细胞学证明药物抗性是通过减少吉西他滨诱导的细胞凋亡来介导的;WB显示在TAM-CM孵育时吉西他滨诱导胆管癌细胞的活化caspase-3表达显著减少。结论:肿瘤相关巨噬细胞模型建立成功,其通过减少吉西他滨诱导的胆管癌细胞凋亡来介导化疗抵抗。第二部分a PKCι/NF-κB信号通路介导肿瘤相关巨噬细胞诱导胆管癌细胞耐药目的:探讨a PKCι介导肿瘤相关巨噬细胞诱导胆管癌细胞耐... 

【文章来源】：华中科技大学湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直属院校

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流式检测巨噬细胞诱导分化后相关标志物表达

qRT-PCR结果显示M1型巨噬细胞的CD80和IL12较另外两种表型明显增加,而M2型巨噬细胞的CD206和IL10表达较其他两种表型明显(图1-3)。结果符合相应分型标志物表达变化。1.3.3.M2-CM能够增强胆管癌细胞对于吉西他滨的化疗抵抗

为了证明肿瘤相关巨噬细胞调节胆管癌细胞对吉西他滨耐药,胆管癌细胞分别在三种不同条件培养基中培养:正常培养基,M0-CM和M2-CM。设置吉西他滨浓度为0uM、0.1uM、1uM、10uM、100uM 5个浓度梯度。CCK-8检测结果显示(图1-4),随着吉西他滨浓度增加,TFK-1及EGI-1在三种培养基中细胞抑制率均逐渐增加;但M2-CM组相较于正常培养基组和M0-CM组,胆管癌细胞被抑制率明显降低,提示M2-CM能够增强胆管癌细胞对于吉西他滨的化疗抵抗。胆管癌细胞在不同处理时相对数目变化趋势与上述趋势一致。1.3.4.M2-CM显著抑制吉西他滨诱导的胆管癌细胞凋亡


本文编号：3093603